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⑶标本运送 采血后应立即送检，如不能立即 送检，需室温保存或置35～37℃孵箱中，切勿 冷藏。自动化连续检测系统虽有允许延迟上机 检测微生物生长的原理，还是应该尽量减少延 迟上机时间。
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3.分离培养
⑴血培养操作过程中应注意生物安全防护。
⑵血培养瓶处理 传统手工法血培养每天至少检 查一次，注意微生物生长可视信号，应无菌抽 取培养物，涂片革兰氏染色，选择合适的培养 基转种，同时做药敏试验。
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1.尿中常见分离菌
革兰氏阳性菌 金黄色葡萄球菌 血浆凝固酶阴性葡萄球菌 肠球菌 A群链球菌 结核分支杆菌 念珠菌
革兰阴性菌 大肠埃希菌 克雷伯菌属 变形杆菌属 淋病奈瑟氏菌 肠杆菌属 假单胞菌属 罗威登菌属 沙雷菌属 不动杆菌属 假单胞菌属
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⒉ 标本的采集与运送
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(三) 尿
尿路感染是指尿道内有大量微生物繁殖 而引起的尿路炎症。从肾脏排泌出来的 尿液正常情况下是无菌的，如果在尿液 中分离出细菌（排除污染因素）即为菌 尿，同时伴有感染症状者称为尿路感染。 根据感染部位可分为上尿路感染（肾盂 肾炎）及下尿路感染（膀胱炎），男性 还可出现前列腺炎。
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2. 标本的采集与运送
⑴ 采血指征 一般患者出现以下体症时可作为 采血的重要指征：发热（≥38℃）或低温 （≤36℃ ）、寒战、白细胞增多（计数＞ 10000×109/L），特别有“核左移”未成熟的 或杆状核白细胞，皮肤黏膜出血，昏迷，多器 官衰竭，血压降低，CRP升高及呼吸快，特殊 患者（如血液病）出现粒细胞减少，（成熟的 多形核细胞＜1000×109/L ）血小板减少等， 或同时具备上述几种体征时而临床可疑菌血症 应采集血培养。新生儿菌血症应该增加尿液和 脑脊液培养。最好在感染患者未进行系统性抗 菌药物治疗之前及时采集血培养。
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⒊分离培养
(1) 痰标本培养前处理：不含或粘液很少的标本 可直接接种，遇有含大量粘液的标本，应加入 等量的液化剂（如PH7.6的10g/L胰酶溶液 等），放置35℃待充分液化再行接种 。亦可 加液化剂后搅拌混匀离心，取沉淀物接种。
⑵一般细菌分离培养：将处理后的痰标本分 别划区接种于血平板(适用于分离肺炎链球菌和 其他细菌),巧克力平板(适用于分离嗜血杆菌)和 麦康凯/中国兰平板。巧克力平板需置5%二氧 化碳环境（无二氧化碳培养箱可用烛缸），35 ℃培养24小时后观察菌落形态，涂片染色，挑 取可疑纯菌落，做进一步鉴定。
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⒋结果分析及报告
⑴结果分析 痰及下呼吸道分泌物标本易受到 定植在上呼吸道的正常菌群污染。当从送检标 本中分离出多种细菌时，确定那一种分离细菌 是引起下呼吸道感染的病原菌，这对临床诊断 与治疗至关重要。当在同一培养基上分离出1 种以上的病原菌（复合菌）时，要结合患者的 临床症状，涂片染色镜检情况及患者近期细菌 分离培养结果等，综合判断所分离的多种细菌 中那一种细菌可能为致病菌，通常多为优势菌。 当分离的优势菌与涂片染色镜检结果一致时， 要做药敏试验。若分离培养结果与涂片染色镜 检结果不一致时，可不进行药敏试验，以免误 导，仅报告分离鉴定结果，由临床大夫定夺是 否重试。
⑶培养基的选择 一般革兰氏阳性菌选血琼脂， 革兰氏阴性球菌选血琼脂、巧克力琼脂，革兰 氏阴性杆菌再加一个中国兰或麦康凯培养基， 真菌需转种于真菌培养基。根据生长情况，挑 取纯菌落进行进一步鉴定。
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4.结果报告 ⑴阳性结果报告 初级报告：阳性血培养结果非常重要，应该立 即口头报告给医生，包括革兰氏染色特性和形 态，疑似何种菌等。同时记录报告日期、时间、 内容以及接受报告人的姓名。 中级报告：报告直接抗菌药物敏感试验结果和 细菌种属的初步鉴定结果。 最终报告：报告细菌种属名和标准抗菌药物敏 感试验结果。 ⑵阴性结果报告 普通血培养3天无菌生长可报告为“72小时培 养未见细菌生长”但培养瓶要继续培养至7天， 如果发现有菌生长，可发补充报告，某些特殊 致病菌培养时间需延长。
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(2)报告方式
初步报告：在分离出细菌后，进行革兰氏 染色，作出初步报告。
最终报告：有意义的阳性结果报告，应报 告菌落计数、细菌种名及药敏结果。
无意义的阳性结果报告，报告菌落数、 革兰氏染色形态特征，并注明是纯培养 或是混合菌生长。
阴性结果报告:应报告无菌生长和菌落计 数＜1000cfu/ml或 ＜100cfu/ml尿。
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（四）粪便
急性感染性腹泻可以由细菌、病毒及原 虫引起，实验室常规检查是细菌培养。 每种感染性腹泻的致病菌因其独特的致 病机理而引起一系列不同的典型症状， 这些症状和详细的病史能为诊断腹泻疾 病类型提供依据。因此，为了查找腹泻 病因，必须了解患者的病史即：症状、 发病时间、年龄、旅游史、进食情况和 使用抗菌素情况。
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基本接种方法
曲线划线法（又称连续划线法）、分区 划线法、棋盘格划线法、倾注平板法、 斜面接种法、穿刺培养法、液体培养基 接种法等。
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三、临床各种标本的采集、分离培养及 报告方式
▪ 血（适用胸腹水） ▪痰 ▪尿 ▪便 ▪脓
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（一） 血
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（二）痰（即下呼吸道感染标本）
临床通常将正常人喉以上部位称为上呼吸道， 上呼吸道定植有大量的正常菌群，而气管以下 包括气管、支气管和肺泡称下呼吸道，通常无 菌。下呼吸道感染包括急性气管～支气管炎、 慢性支气管炎急性发作，支气管扩张继发感染 及肺实质感染（肺炎、肺脓肿）等。病原体有 细菌、病毒、衣原体、支原体、真菌、立克次 氏体和原虫等。
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一、医学微生物实验室基本条件及设备
▪ 细菌实验室 ▪ 无菌实验室 ▪ 基本设备
2020/11/144细菌实验室细菌实验室是细菌检验的场所，在此完 成标本接种、孵育、分离、细菌鉴定和 药物敏感试验。所以细菌实验室必须具 备空气及桌面消毒的条件，确保室内相 对无菌。如：足够强度的紫外线灯管， 耐酸碱的桌面等。
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⑵支气管镜采集法、防污染毛刷采集法、环甲 膜穿刺经气管吸引法、经胸壁针穿刺吸引法和 支气管肺泡灌洗法，均由临床医生按照相应操 作规程采集，但必须注意所采集标本尽可能避 免咽喉部正常菌群的污染。
⑶小儿取痰法：用弯压舌板向后压舌，将拭子 伸入咽部，小儿经压舌刺激咳嗽时，可喷出肺 部或气管分泌物粘在拭子上送检。
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2.标本采集及运送
对可疑烈性呼吸道传染病(如SARS，肺炭疽， 肺鼠疫等)的患者采集痰标本时必须注意生物安 全防护。
⑴自然咳痰法（最常用的方法）：以晨痰为佳， 采集标本前应用清水、冷开水漱口或牙刷清洁 口腔和牙齿。尽可能在使用抗菌药物之前采集 标本，用力咳出呼吸道深部的痰，痰液直接吐 入无菌、清洁、干燥、不渗漏、不吸水的广口 带盖的容器中，标本量要≥1ml。标本要尽快 送检，不能及时送检的标本室温保存≤2小时。
(2)特殊培养: 对临床要求真菌、淋病奈瑟 菌及结核菌等培养者，根据细菌所需条 件接种相应特殊培养基，放置相应条件 下进行培养。
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4．结果分析及报告
⑴结果分析: 一般单种细菌菌落数＞ 105cfu/ml可能为感染，需要进一步鉴定 和做药敏试验；＜104cfu/ml可能为污染； 在两者之间需要根据病人的临床表现进 行评估。对于导尿标本＞103cfu/ml即为 感染；耻骨上膀胱穿刺标本任意数目即 为感染，均需进一步鉴定和做药敏试验。
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⑵采血时间及采血量 采血培养应该尽量在使用 抗菌药之前进行，在24小时内采集2～3份血培 养（一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为 单份血培养）。对间歇性寒战或发热应在寒战 或体温高峰到来之前0.5～1小时，采集血液， 或于寒战或发热后1小时进行。成人采血量8～ 10ml，儿童1～5ml。血液和肉汤之比1：5 ～ 1：10。
下呼吸道感染者可有发热、咳嗽和咳痰，痰 呈脓性、粘稠或血性，是下呼吸道感染细菌检 查的主要标本。细菌学检验能明确感染病原， 并提供有关抗菌药物对分离菌的抗菌活性，有 助于疾病的治疗、流行病学调查研究和医院感 染的监测。
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1.呼吸道标本(痰)中常见的分离细菌
革兰氏阳性菌 草绿色链球菌，肺炎链球
⑴尿培养检查的临床指征(有下列情况之一者， 应进行尿培养） a.有典型的尿路感染症状 b.有肉眼脓尿或血尿 c.尿常规白细胞和/或亚硝酸盐阳性 d.不明原因的发热而无其他局部症状 e.留置导尿管的病人出现发热 f.膀胱排空功能受损 g.泌尿系统疾病手术前
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(2)标本采集 a.清洁中段尿 最好是晨尿，是临床上最 常留取尿标本的方法 b.耻骨上膀胱穿刺法 是评估膀胱内细菌 感染的“金标准” c.直接导尿法 d.小儿收集包 e.留置导尿
菌，化脓性链球菌 表皮葡萄球菌 ,金黄色葡
萄球菌,其他葡萄球菌 微球菌，消化链球菌，消
化球菌 肠球菌 真杆菌，丙酸杆菌，乳酸
杆菌 放线菌，奴卡苗，结核分
枝杆菌 白喉棒状杆菌，类白喉棒
状杆菌 念珠菌
革兰氏阴性菌 韦荣球菌 脑膜炎奈瑟菌，其他奈瑟 菌 卡他莫拉菌 肺炎克雷伯菌及其他克雷 伯菌 沙雷菌，变形杆菌 大肠埃希氏菌及其他肠杆 菌科细菌 百日咳鲍特菌，不动杆菌 铜绿假单胞菌及其他假单 胞菌属细菌 嗜肺军团菌，气单胞菌 流血感杆嗜菌血杆菌，付流感嗜 拟杆菌，梭杆菌
临床细菌培养鉴定流程与报告
思考题
❖ 1、血培养阳性结果如何分级报告？ ❖ 2、如何根据尿液菌落计数分析尿培养结果