大黄中大黄素的提取、分离与鉴定
同组人：石春杰
黄旭龙
陈永
潘洋
肖娟娟
大黄中大黄素的提取、分离与鉴定
一实验目的
1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法
2）掌握PH梯度提取法的原理和操作
3）掌握蒽醌类化合物鉴定方法
4）了解液液萃取法分离混合物的实验方法
二实验原理
大黄为蓼科植物，味苦，性寒，具有泻热通经等功效。

其主要有效成分为大黄素、芦荟大黄素、大黄素甲醚等蒽醌类化合物，其中大部分为结合的蒽醌，少数为游离的蒽醌。

结合的蒽醌类化合物由于其苷元具有酚羟基，故呈弱酸性，能溶于水、乙醇、碳酸氢钠溶液，但有机溶剂中的溶解度很小。

游离的蒽醌容易溶于氯仿、乙醚等有机溶剂而不溶于水。

其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三大黄素甲醚和大黄酚的酸性最弱。

根据以上的混合物的酸性差异，可用碱性强弱的不同溶液进行梯度
本实验主要用薄层层析法分离纯化大黄素，其Rf值由大到小分别为大黄酚和大黄素甲醚、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸。

大黄素：橙黄色针状结晶，mp.256—257℃（乙醇或冰醋酸），能升华，其溶解度如下：四氯化碳0.01﹪、氯仿0.07﹪、二硫化碳0.009﹪、乙醚0.14﹪、苯0.041﹪。

易容于乙醇，可溶于稀氨水、碳酸钠水溶液，几乎不溶于水。

三实验器材、
（1）药品：大黄粗粉，20％硫酸溶液、5％碳酸氢钠溶液、5％碳酸钠溶液、盐酸、丙酮、乙酸乙酯、硅胶板、石油醚、大黄素标准品等。

（2）回流装置一套、烧杯、层析槽、试管、梨形分液漏斗、水浴锅、电热套、蒸发皿、真空泵、抽滤瓶、铁架台等。

四实验内容
（1）酸水解：用天平称取大黄粉10g,放置500ml烧杯中，加20﹪H2SO4水溶液100ml，直火加热1小时，用布氏漏斗抽滤，滤饼水洗后于70℃左右干燥。

溶液沸腾是关闭电源，不沸腾再打开，注意不要烧干。

大黄粉从土黄色变为黑色。

（2）总羟基蒽醌苷元的提取：滤饼经干燥后，置索氏提取器中，加入乙醚150ml，回流提取2小时，得乙醚提取液。

乙醚提取液经薄层色谱检查有大黄酸、芦荟大黄素，大黄素、大黄素甲醚、大黄酚。

包办为硅胶板，展开剂为石油醚（沸程为60—90℃）-乙酸乙酯（7:3），进水平或直立展开，在可见光下可看到四个斑点，Rf≈0.9的黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚混合物，在此条件下分不开，其余三个斑点，依Rf值由大到小分别为大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）
（3）PH梯度萃取分离
①大黄酸的分离和提纯：将上述乙醚提取液以5 % 碳酸氢钠溶液振荡提取，水层呈紫红色。

分出水层，再重复提取数次，直至不显红色为止（共约60ml，分3~4次提取）。

合并水层提取液，用盐酸酸化至pH3左右，即得黄色沉淀为大黄酸。

②大黄素的分离和提纯：碳酸氢钠溶液提取后的乙醚层再以5%碳酸钠溶液振荡
提取数次（共约120ml，分3~4次提取）水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得黄色沉淀，过滤，用水洗沉淀，以冰冷丙酮洗，在冰醋酸或吡啶中结晶数次，得橙色大针状结晶。

经熔点测定、纸色谱或薄层色谱，与标准品对照鉴定为大黄素。

③芦荟大黄素的分离和提纯：碳酸钠溶液提取后的乙醚层，再经0.25% 氢氧化钠溶液振荡提取数次（约100ml，分3~4次提取），水层呈红色，合并水层提取液，加盐酸至酸性（pH6左右），得橙色沉淀。

过滤后用水洗沉淀，干燥后在冰醋酸或乙酸乙酯中结晶数次，得橙色长针状结晶。

经熔点测定、纸色谱或薄层色谱鉴定为芦荟大黄素。

④大黄酚和大黄素甲醚的分离和提纯：上述芦荟大黄素分离后的乙醚液用5%氢氧化钠溶液振荡提取数次，直至无色。

合并深红色的水层溶液，加盐酸至酸性，得黄色沉淀。

过滤，水洗，干燥后得大黄酚和大黄素甲醚混合物
五大黄素的提取，分离流程图
流程图
大黄粗粉30克
20%硫酸150ml，加热1h，抽滤，干燥
滤饼
乙酸乙酯回流提取1h
水层（红色）乙酸乙酯层（弃掉）
盐酸
黄色沉淀（粗品）
水洗至中性，丙酮溶解，分离纯化
注意：1.游离蒽醌的提取要控制温度，不宜太高
2.PH梯度萃取分离时，要检查是否萃取完全。