收稿日期：#$$%;$<;#=；修回日期：#$$%;$>;!" 资助项目：广东省重大科技专项（ ?@$%$@$=） 作者简介：杨莺莺（!>"@ A ），女，副研究员，从事水产动物益生素的研究。B;C/-6：DDD=$#E !#"7 4(C
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第" 期
杨莺莺等：益生菌 #$% 液体发酵工艺的研究
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%! 材料与方法
!" !# 菌株 菌株 #$% 是南海水产研究所饲料与健康养殖开
发中心实验室分离保存的菌种。 !" $# 培养基： %* +* %! 菌种斜面培养基! ! 普通营养琼脂斜面。 %* +* +! 种子液体培养基! ! 普通营养肉汤。 %* +* , ! 摇 床 发 酵 液 体 基 础 培 养 基 ! ! 蛋 白 胨 -* ’. ，玉米淀粉 +* ’. ，/01+ 23& -* ’. ，4563& ·)1+ 3 -* -’. ，,* -7. 4863& 水溶液 -* %. 。 %* +* &! 活菌计数培养基! ! 普通营养琼脂。 !" %# 培养条件
!" ’# 生长曲线的测定 按已测 定 的 最 佳 培 养 条 件，培 养 温 度 ,-9 ，
培养基初始 C1 )* -，接种量 ’. （ 相对摇瓶装液 量），装液量 %-- ;< = ’-- ;<，+,- ?·;@8 ( % 摇床培 养下采用已测定的最佳培养基，玉米淀粉 +. ，蛋 白胨 +* ’. ，/01+ 23& -* 7. ，玉米浆 %* ’. 。在发 酵过程中每隔 & : 取样 % 次，直至 杆菌能耐酸、耐碱、耐高温（!$$H ） 及 耐挤压，在制粒过程中及酸性环境下均能保持高度 的稳定性，其适合对虾饲料加工业的条件［!，#］；孢 子进入动物胃肠后，能耐胃酸的低 FG 值，在肠道
迅速萌发而发挥生理作用；同时芽孢杆菌具有很强 的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶活性，能降解植物性饲 料中某些复杂的碳水化合物，从而提高饲料的转化 率并增加 饲 料 的 可 利 用 种 类［@］； 芽 孢 杆 菌 具 有 高
表 !# 培养温度与菌株 ()! 的生物量 *+," !# -../01 2. 1/34/5+165/ 27 85291: 2. ;15+<7 ()!
温度 = 9 DE;CE?0DF?E
菌体浓度 = %-7 GHI·;< ( % 0JF8K08LE
+’ ,- ,’ &- &’ ’* " 7* + %-* , &* ) %* ,
菌种斜面培养：,-9 ，恒温培养 +& :。 液体菌种培养：用’ % ;; 的接种环挑取 ’ 环 斜面菌种于液体培养基中，装液量 %-- ;< = ’-- ;< 三角瓶，硅胶塞塞口，,- > ,+9 ，+,- ?·;@8 ( % 摇床 培养 %7 :，镜检无杂菌后备用。 摇床发酵培养：装液量 %-- ;< = ’-- ;< 三角 瓶，接种量 ’. （ 相对摇瓶装液量）。硅胶塞塞口， ,-9 ，+,- ?·;@8 ( % 摇床培养 +& :。 !" &# 检测方法 菌数测定采用活菌平板计数方法［7］。 芽孢转化 率 用 血 球 计 数 板［7］直 接 计 数 每 格 内 的孢子数量与菌营养体数量，其孢子转化率为每格 内孢子量 = 每格内孢子数量 A 营养体 B %--. 。
关键词：益生菌；液体发酵；培养条件；培养基
中图分类号：R’#$!7 @& & & & & 文献标识码：?
文章编号：!"I@ A ###I A （#$$%）$" A $$== A $"
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+! 结果与讨论
$" !# 培养条件 +* %* %! 温度! ! 温度的高低与菌体的酶反应速率、 氧在培养液中的溶解率和传递速率等密切相关，从 而影响到菌体的生长。本实验是在基本培养条件 下，将 培 养 温 度 设 置 为 +’、,-、,’、&-、&’9 ， 培养 +& : 取样测定菌浓度。培养温度对菌株 #$% 生长的影响见表 %，在 +’ > ,’9 之间，随着温度的 升高，菌的生长速度加快，,’9 组菌生物量最高， &-9 组菌生物量下降。+& : 取样观察，,-9 组芽孢 转化率达 "-. ，,’9 组芽孢转化率达 )’. 。结果 表明，为达到较高的生物量和较高的芽孢转化率， ,’9 为较适的温度。 +* %* +! 初始 C1 值! ! 将培养基的初始 C1 值设为 ’* ’、"* -、"* ’、)* -、)* ’、)* ’、7* -，接 种 培 养 +& :，取样测定菌浓度，初始 C1 值与菌株 #$% 生 物量的关系见表 +。
发酵基础培养基成分保持不变的情况下改变氮源、碳源、生长因子、无机盐单因子进行单因子试验，采用 K> （@）= 正交表设计实验，进行培养基优化，确定最佳培养基配比为玉米淀粉 #J ，蛋白胨 #7 %J ，8/G# MN= $7 <J ，
玉米浆 !7 %J ，OP’N=·IG# N $7 $%J ，@7 $<J O.’N= 水溶液 $7 !J 。在最佳培养条件下，用最优培养基测定了菌 株 9;! 的生长曲线，并确定了菌株 9;! 的最佳种龄为 !< Q #$ +，生产收获时间为 #" +。
表 $# 初始 4= 值与菌株 ()! 的生物量 *+," $# -../01 2. <7<1<+> 4= 27 85291: 2. ;15+<7 ()!
初始 C1 值 @8@D@0M C1
’* ’ "* - "* ’ )* - )* ’ 7* -
菌体浓度= %-7 GHI·;< (% &* + )* 7 N* 7 %%* " N* + "* , 0JF8K08LE
（ !"#$% &%’() !*) +’,%*-’*, .*,*)-/% 0(,$’$#$*，&%’(*,* 1/)2*34 "5 +’,%*-4 !/’*(/*,，6#)(78%"# %!$@$$，&%’()）
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