（三）试剂 ❖ 1. LB固体培养基 ❖ 2. 氨苄青霉素（Amp） 100mg/ml
实验步骤
转化: ❖ 1．取适量连接产物加到分装的200 μL感受态
细胞中，冰上混匀，冰浴30min；此过程中， 需倒含氨苄的LB平板。 ❖ 2．42℃热激90s，迅速在冰浴中冷3-5min； ❖ 3．上述管中加入600μL LB培养基，于37℃振 荡培养45min；此过程中，在LB平板上涂布XGal 40 μL和IPTG 20 μL 。
❖ 转化混合物中的DNA形成抗DNA酶的羟基-钙 磷酸复合物黏附于细胞表面，经42℃短时间热 击处理，促进细胞吸收DNA复合物。进入细胞 的DNA分子通过复制、表达，实现遗传信息的 转移，使受体细胞出现新的遗传性状。
❖ 将经转化后的细胞在选择性培养基中培养，即 可筛选出转化体(transformant)，即带有异源 DNA分子的受体细胞。
实验六 转化及重组子的筛选
1.实验目的 2. 实验原理 3. 实验仪器、材料与试剂 4. 实验步骤 5. 实验结果与讨论
实验目的
❖ 了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究 中的意义；
❖ 学习外源DNA转化入受体菌细胞并筛选转化 子的方法。
实验原理
❖ 转化（transformation）是将异源DNA分子导 入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传 性状的一种手段。其原理是细菌处于0℃， CaCl2低渗溶液中，菌细胞膨胀成球形。
❖ 4．取适量菌液涂布LB平板(含Amp 50μg/ml)， 室温涂布均匀后（至菌液完全被吸干），于 37℃倒置，过夜培养；
❖ 5．观察菌落，筛选阳性克隆。
实验结果与讨论
❖ 经抗生素初筛长出的细菌常出现假阳性的现 象，为确定外源基因已转化入细菌，需另外 的酶切和PCR验证。
基因导入方法:
1)电击法 (Gene transfer by electroporation)
基因导入方法:
2)基因枪法(Biolisticbombardment)(植物细胞)
Transfer of T-DNA from Agrobacterium into a plant cell
Regeneration of leaf disks infected by Agrobacterium
DNA重组
❖ 外源基因插入与否可通过载体上的Lac Z基因 进行初步的筛选。有外源基因插入的细菌呈 白斑，无外源基因插入的细菌呈蓝斑。
Alfa互补
实验仪器、材料与试剂
（一）仪器 ❖ 1. 恒温摇床 ❖ 2. 超净工作台 ❖ 3. 恒温水浴锅 ❖ 4. 恒温箱 ❖ 5. 微量取液器
（二）材料 ❖ 1. ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ验四所得连接产物 ❖ 2. 实验五制备的大肠杆菌感受态细胞