常见的化学发光体系
吖啶酯化学发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
吖啶酯化学发光机制
常见的化学发光体系
AMPPD化学发光体系 welcome to use-1,2these PowerPoint templates, New ☆ （金刚烷） 二氧环乙烷及其衍生物的发光 体系是目前最重要、最灵敏的一类发光体系，主 Content design, 10 years experience 要代表：ALP-AMPPD发光体系。
直接化学发光免疫分析
直接化学发光的机制
夹心法
化学发光酶免疫分析
Chemiluminescence enzyme immunoassay，CLEIA
•用参与催化某一化学发光反应的酶如辣根过氧化物 酶（HRP）或碱性磷酸酶(ALP)来标记抗原或抗体 ，在与待测标本中相应的抗原(抗体)发生免疫反应 后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合 物，经洗涤后，加入底物(发光剂)，酶催化和分解 底物发光，由光量子阅读系统接收，光电倍增管将 光信号转变为电信号并加以放大，再把它们传送至 计算机数据处理系统，计算出测定物的浓度。
☆ 该体系中溶液的pH增高会增强发光强度,实验 证明最佳pH为9.0，在该体系中加入水溶性的大分 子物质牛血清白蛋白(BSA)或十四烷酰氨基荧光 素与十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)构成的水溶性 胶粒,可使发光强度增强400倍。
常见的化学发光体系
AMPPD化学发光体系
☆ 3-（2-螺旋金刚烷）-4-（3-磷氧酰）苯基-1,2welcome to use these PowerPoint templates, New 二氧环乙烷（ AMPPD ）。 Content design, 10 years experience ☆ AMPPD是一种超敏感的AP底物,它首先在AP 的特异催化下迅速脱磷酸基生成AMPD-阴离子中 间体(半衰期2～30 min), 此不稳定的中间体经分子 内电子转移裂解为一分子的金钢烷酮和一分子处 于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子，当回到基态 时发出发出λ max为477 nm的光，并可持续几十分 钟。
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
化学发光酶免疫分析
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
•以碱性磷酸酶 标记抗体(或抗原)，在与反应 体系中的待测标本和固相载体发生免疫反应
后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体
复合物，这时加入AMPPD发光剂，碱性磷酸 酶使AMPPD脱去磷酸根基团而发光。
化学发光酶免疫分析
☆ 虫荧光素酶在催化时,首先与虫荧光素酰腺苷 酸(由Mg2+-ATP与虫荧光素复合而成)生成复合物, 然后该复合物放出质子,酶变构导致虫荧光素氧化 脱羧并发射光子。
常见的化学发光体系
生物发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New ☆另一生物发光体系是水母发光蛋白,它不需要加 Content design, 10 years 2+ experience 入荧光素酶,只需加入Ca 或Se2+便能通过分子内 反应而发出λ max为470 nm的蓝光。
电化学发光机制
常用进口发光免疫分析产品
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☆ 高锰酸钾发光反应分为两类：（1）直接与高 锰酸钾反应产生化学发光；（2）利用增敏剂增强 高锰酸钾化学发光。
☆ 目前提出的高锰酸钾化学发光机理中发光体主
要有两类：激发态的锰或锰的配合物；单线态氧 的二分子复合物。
常见的化学发光体系
生物发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New ☆ 北美荧火虫体内的荧光素 /荧光素酶是著名的 生物化学发光体系 ,它由虫荧光素酶、虫荧光素 Content design, 10 years experience [D-(-)-2-6’-羧基-2’苯并噻唑-△2-噻唑啉-4-羧酸]、 ATP、Mg2+及O2所组成。
化学发光酶免疫分析
辣根过氧化物酶标记的化学发光免疫分析
•采用辣根过氧化物酶（HRP）标记抗体(或抗原 )，在与反应体系中的待测标本和固相载体发生 免疫反应后，形成固相包被抗体-待测抗原-酶（ HRP）标记抗体复合物，这时加入鲁米诺发光 剂、H2O2和化学发光增强剂使产生化学发光。
化学发光酶免疫分析
常见的化学发光体系
鲁米诺化学发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光机制
常见的化学发光体系
吖啶酯化学发光体系
☆ 光泽精是第一个被发现有化学发光性质的吖啶 welcome to use these PowerPoint templates, New 类化合物，也是应用最广泛的一种吖啶酯类发光 Content design, 10 years experience 试剂。 ☆ 吖啶类化合物的发光效率高，量子产率可达 0.05，作为标记物用于免疫分析，其发光体系简 单、快速，不需要加入催化剂，也不需要增强剂， 从而降低了背景发光，提高了信噪比，干扰作用 少。
常见的化学发光体系
鲁米诺化学发光体系
☆ 鲁米诺（ luminol ）、异鲁米诺（ isoluminol ）及 welcome to use these PowerPoint templates, New 其衍生物的发光为氧化反应发光，它们在碱性条件 Content design, 10 years experience 下通过辣根过氧化物酶（ HRP）催化，被H2O2氧化 生成3-氨基邻苯二酸的激发态中间体，当其回到基 态时发出光子。
常见化学发光体系简述
连海燕 2015-11-25
目录
化学发光免疫分析基本原理
常见的化学发光体系
化学发光免疫分析法分类
常用进口发光免疫分析产品
化学发光免疫分析基本原理
化学发光免疫分析含有免疫分析 和化学发光分析2个系统
免疫分析系统是将化学发光物质或酶作为标记物,直接 标记在抗原或抗体上,经过抗原与抗体反应形成抗原-抗 体免疫复合物。 化学发光分析系统是在免疫反应结束后,加入氧化剂或酶 的发光底物,化学发光物质经氧化剂的氧化后,形成一个 处于激发态的中间体,会发射光子释放能量以回到稳定基 态,发光强度可以利用发光信号测量仪器进行检测，根据 化学发光标记物与发光强度的关系,可利用标准曲线计算 出被测物的含量。
常见的化学发光体系
AMPPD化学发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
AMPPD及其衍生物化学发光机制
常见的化学发光体系
电化学发光体系
☆ 电化学发光的反应在电极表面进行 ,发光底物为三 welcome to use these PowerPoint templates, New 2+ 联吡啶钌[Ru(byp) 3 ],三丙胺(TPA)用来激发光反应 Content design, 10 years experience ☆ 在阳极表面,两种物质同时失去电子。在电极板上 Ru(byp)32+被氧化成Ru(byp)33+ TPA也被氧化成阳离 子自由(TPA+*), TPA+*自发地释放一个质子而变成 非稳定分子(TPA*), 将一个电子递Ru(byp)33+, 形成激 发态的Ru(byp)32+ *。 Ru(byp)32+在衰减的同时发射一 个波长为620 nm的光子,重新回到基态Ru(byp)32+
常见的化学发光体系
电化学发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience
常见的化学发光体系
高锰酸钾化学发光体系 welcome to use these PowerPoint templates, New ☆ 反应机理：化学反应诱导的激发态 Mn(Ⅱ )的磷 4T →6A 的转换。 光，类似于固态 Mn ( Ⅱ ) 1 1 Content design, 10 years experience
化学发光酶免疫分析
电化学发光免疫分析
直接化学发光免疫分析
•用吖啶酯直接标记抗体(抗原)，与待测标本中相应 的抗原(抗体)发生免疫反应后，形成固相包被抗体待测抗原-吖啶酯标记抗体复合物，这时只需加入氧 化剂（H2O2）和NaOH使成碱性环境，吖啶酯在不需要 催化剂的情况下分解、发光 。 •由集光器和光电倍增管接收、记录单位时间内所产 生的光子能，这部分光的积分与待测抗原的量成正比 可从标准曲线上计算出待测抗原的含量。
☆生物发光体系的特点是发光效率、灵敏度、选 择性均非常高。
常见的化学发光体系Байду номын сангаас
2
☆ Ce（IV）化学发 光体系 ☆ 过氧化草酸化学 发光体系
1
☆ N-溴代琥珀亚酰胺发光体系 ☆ 高碘酸钾化学发光体系
其他化学发光体系
☆ 铁氰化钾发光体系 ☆ 罗丹明族化合物化学发光体系
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化学发光免疫分析法分类
直接化学发光免疫分析
碱性磷酸酶标记的化学发光免疫分析
电化学发光免疫分析
Electrochemiluminescence immunoassay，ECLIA
•
以电化学发光剂三联吡啶钌标记抗体(抗
原)，以三丙胺(TPA)为电子供体，在电场中 因电子转移而发生特异性化学发光反应，它 包括电化学和化学发光两个过程。