• 耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球 耐热DNA酶作为除血浆凝固酶外鉴定金黄色葡萄球
菌致病力的指标之一。该酶的最适pH为9.0。 菌致病力的பைடு நூலகம்标之一。该酶的最适pH为9.0。
金黄色葡萄球菌的肠毒素
• 金黄色葡萄球菌肠毒素：是金黄色葡萄球菌一种重
要的致病物质。本菌引起的食物中毒是因为食品污 染了金黄葡萄球菌后，由细菌产生大量肠毒素而导 致的。
• 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷 液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品至盛有225mL磷
酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶( 酸盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置 适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的 适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的 样品匀液。
增菌与分离培养
• 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL 增菌培养：吸取5mL上述样品匀液，接种于50mL
7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内， 7.5%氯化钠肉汤或10%胰酪胨大豆肉汤培养基内， 36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯 36℃±1℃培养18h～24h。金黄色葡萄球菌在7.5%氯 化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大 化钠肉汤中呈混浊生长，污染严重时在10%胰酪胨大 豆肉汤内呈混浊生长。
这两种酶均与金黄色葡萄球菌的致病性有关。
• 血浆凝固酶：与金黄色葡萄球菌的致病力密切相关。
一般认为，血浆凝固阳性的金黄色葡萄球菌菌株有 致病力。否则为无力的菌株。血浆凝固酶对热稳定， 能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大 能抵抗60℃30min甚至100℃30min后，仍能保存大 部分活性。
牛肉浸粉，并加入少量磷酸氢二钾和葡萄糖促进 葡萄球菌的生长。
样品的稀释
• 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸 固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225 mL磷酸
盐缓冲稀释液或生理盐水的无菌均质杯内， 8000r/min～ 8000r/min～10000 r/min均质1min～2min，或放入 r/min均质1min～2min，或放入 盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质 盛有225 mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质 器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。 器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。
• 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1个或 挑取Baird－Parker平板或血平板上可疑菌落1
以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜面， 以上，分别接种到5mL BHI和营养琼脂小斜面， 36℃±1℃培养18 h～ 36℃±1℃培养18 h～24 h。 h。
• 取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入可 取新鲜配置兔血浆0.5mL，放入小试管中，再加入可
金黄色葡萄球菌检验
概况
• 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种， 葡萄球菌属微球菌科，本菌有19个菌种，
从人体上可检出12个种。 从人体上可检出12个种。 • 葡萄球菌属主要与皮肤腺体和温血动物的 粘膜相关系，有些种是人及动物的条件致 病菌。 • 金黄色葡萄球菌对人类有致病性，通常被 称为病原性球菌。金黄色葡萄球菌可引起 化脓性炎症，又称为化脓性球菌。
培养特性：
• 易培养，对营养要求不高，在普通培养基中生长良
好。
• 需氧或兼性厌氧。 • 最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。耐盐性强， 最适生长温度37℃，最适生长pH 7.4。耐盐性强，
在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于 在含10～15%的氯化钠培养基中仍能生长，可用于 筛选菌种。
分离培养基
• 血琼脂：是一种基础培养基，含有5%的脱 血琼脂：是一种基础培养基，含有5%的脱
纤维血(羊血或兔血) 纤维血(羊血或兔血)。用于观察金黄色葡 萄球菌的溶血现象。金黄色葡萄球菌在血 琼脂平板上呈β 琼脂平板上呈β溶血。
• 金黄色葡萄球菌的菌落形态：呈金黄色，
有时也呈白色，大而突起，圆形、不透明、 表面光滑，周围有透明的β 表面光滑，周围有透明的β溶血环。
疑菌落的BHI培养物0.2mL～0.3mL，振荡摇匀，置 疑菌落的BHI培养物0.2mL～0.3mL，振荡摇匀，置 36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观 36℃±1℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观 察6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现 6h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现 凝块）或凝固体积大于原体积的一半，判定为阳性 结果。
葡萄球菌 。 • 报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄 报告在25g（mL）样品中检出或未检出金黄 色葡萄球菌。
谢谢! 谢谢!
• 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板 将上述培养物，分别划线接种到Baird-Parker平板
和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。Baird和血平板，血平板36℃±1℃培养18h～24h。BairdParker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。 Parker平板36℃±1℃培养18h～24h或45h～48h。
涂片染色
报告
增菌培养基
• 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基， 7.5%氯化钠肉汤：为葡萄球菌选择性增菌培养基，
因金黄色葡萄球有耐受高盐的特性，因而能在此 增菌液中生长，除某些嗜高盐的海洋菌外，大多 数细菌都被增菌液中的高盐所抑制。
• 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%，以胰酪胨替代 胰酪胨大豆肉汤：含氯化钠达10%，以胰酪胨替代
血。
• 可产生卵磷脂，在卵黄高盐培养基上形成周围有
白色沉淀环的菌落。
• 大多数菌株分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖，产酸不
产气。甲基红试验、 VP试验多为阳性，不产生靛 VP试验多为阳性，不产生靛 基质。触酶阳性。
金黄色葡萄球菌的酶
• 金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。 金黄色葡萄球菌可产生血浆凝固酶和耐热DNA酶。
金黄色葡萄球菌的生物学特性
形态与染色： • 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～ 金黄色葡萄球菌的典型形态呈球形，直径0.4～ 1.2µ ，大小不一，平均直径约为0.8µ 1.2µ m，大小不一，平均直径约为0.8µ m。 • 革兰氏染色阳性，呈葡萄串状排列。无鞭毛、无 芽胞。在陈旧培养物中，衰老的菌体常转为革兰 氏阴性。
• 同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的
肉汤培养物作为对照。
• 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL BHI， 结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5mL BHI，
36℃±1℃培养18h～48h，重复实验。 36℃±1℃培养18h～48h，重复实验。
结果报告
• 如血浆凝固酶试验阳性，可判定为金黄色
型毒力较弱摄入25µg，才引起中毒。一般认为引 型毒力较弱摄入25µg，才引起中毒。一般认为引 起人中毒的最小剂量是1.0~7.2µg/kg。 起人中毒的最小剂量是1.0~7.2µg/kg。
金黄色葡萄球菌的检测程序
检样25g(mL) 225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液 检样25g(mL) ＋225mL生理盐水或磷酸盐缓冲液 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 7.5%氯化钠肉汤或10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤 36± 36±1℃ 18~24h
革兰氏染色
血浆凝固酶试验
• 试验原理：致病性的金黄色葡萄球菌产生的血
浆凝固酶，使血浆中纤维蛋白原转变为纤蛋白， 附着于细菌表面 ，产生凝固。
• 金黄色葡萄球菌可产生两种凝固酶：一种是与
细胞壁结合的凝固酶，为结合凝固酶；另一种 是菌细胞释放于培养基中，为游离凝固酶。二 者的抗原性不同。
血浆凝固酶试验
约2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊 2~3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊 带，在其外层有一透明圈。用接种针接触菌落似有奶油树胶 的硬度，偶而可见无混浊带和透明圈的非典型菌落。
• 长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产
生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。
分离培养基
• Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大 Baird-Parker琼脂：培养基中含有卵黄亚碲酸钾，能抑制大
多数细菌的繁殖，并能促进金黄色葡萄球菌的生长使其产生 黑色和晕圈。培养基中的丙酮酸钠和甘氨酸也能促进金黄色 葡萄球菌的生长。
• 金黄色葡萄球菌的菌落形态：圆形、光滑凸起、湿润，直径
• 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、 在普通营养琼脂平板上培养18～24ｈ，可形成圆形、
表面光滑、不透明的菌落。可产生金黄色色素，色 素为脂溶性，不溶于水，故色素只局限于菌落内， 不渗至培养中。
• 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β型溶 在血平板上可形成明显透明的溶血环。为β
• 根据肠毒素的血清型，可分A、B、C（C1、C2）、D、 根据肠毒素的血清型，可分A ）、D
E 5 个型。A型肠毒素引起的食物中毒较多，约占 个型。A 50%左右。其他依次为D 50%左右。其他依次为D、C、B和E型。也有A＋D、 型。也有A A＋B、A＋C、B＋C等。
• A型肠毒素毒力较强，摄入1µg即可引起中毒；B 型肠毒素毒力较强，摄入1µg即可引起中毒；B
• 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在 近年报导表明，50%以上的金黄色葡萄球菌菌株在
实验室条件下可产生肠毒素，并且1 实验室条件下可产生肠毒素，并且1个菌株能产生 两种或两种以上的肠毒素。
• 肠毒素是一种可溶性蛋白质，由单个无分枝的肽链
组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有 组成。分子量约为3000左右。易溶于水，难溶于有 机溶剂。
• 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋 耐热，经100℃煮沸30min不被破坏，也不受胰蛋