２．色谱条件
色 谱 柱 ：Ａｇｉｌｅｎｔ － Ｃ１８ （５μｍ １５０ × ４．６ｍｍ）柱；流动相：以甲醇－ 水（２０：８０）用 冰醋酸调 ｐＨ 值 ３．５；流速：１．０ｍｌ ／ ｍｉｎ； 检 测 波 长 ：２７７ｎｍ；柱 温 ：室 温 ；进 样 量 ： ２０μｌ；甲硝唑在上述色谱条件下的保留
时间约为 ４．１ｍｉｎ，理论塔板数以甲硝唑 峰计约为 ９２１５２。
（２００７０６１５ 收稿）
２００７．８ ５２
４．方法与结果
４．１ 线性关系试验 精 密 称 定 甲 硝 唑 约 １４ｍｇ 于 １００ｍｌ 容 量 瓶 中 ， 加 盐 酸 溶 液 （９ →１０００）约 ３０ｍｌ，微温使甲硝唑溶解，加流动相稀释 至刻度，摇匀，作为贮备液。分别精密移 取 贮 备 液 １．０ｍｌ，２．０ｍｌ，５．０ｍｌ，８．０ｍｌ， １０．０ｍｌ 于 ５０ｍｌ 容量瓶中，均用流动相稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ，各 取 ２０μｇ 进 样 ，在 ２７７ｎｍ 波长处检测。以进样量（Ｘ）对峰面 积（Ｙ）进行线性回归，得回归方程。试验 结果表明，甲硝唑在 ２．８～２８μｇ ／ ｍｌ 范围 内呈良好线性关系，回归方程为 ｙ＝ ３．１４３７ｘ＋８．６９５×１０４，ｒ＝０．９９９６。 ４．２ 精密度试验 在上述色谱条件下，取 １３μｇ ／ ｍｌ 的 甲硝唑对照品溶液重复进样，测定峰面 积的 ＲＳＤ＝０．９１％（ｎ＝６）。
关键词 高效液相色普法 甲硝唑 含量测定
《中国药典》对甲硝唑的测定采用了 紫外分光光度法［１］，也有人采用荧光猝灭 法和双波长分光光度法进行测定。但三 方法精密度、灵敏度较差，自动化程度也 较低。该实验建立以高效液相色谱法测 定甲硝唑的含量，方法简捷，易于控制。
１．仪器与试药
安捷伦公司的 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００ 全自动高 效液相色谱仪，二极管阵列检测器。甲硝 唑对照品（中检所提供的甲硝唑对照 品），甲硝唑片由某制药厂提供（批号： ０６０６０６，０６０８１２，０６０９１１；规格 ０．２ｇ），甲醇 为国产色普纯试剂，冰醋酸、盐酸为国产 分析纯试剂，水为去离子经 Ｍｉｌｌｉ－ Ｑｐｌｕｓ 超纯水器处理。
首 都 医 药 药品检验
ＣＡＰ ＩＴＡＬ ＭＥＤＩＣＩＮＥ
高效液相色谱法测定甲硝唑片中甲硝唑的含量
广东轻工职业技术学院（５１０３００） 李桂锋 广东省湛江市药品检验所（５２４０３７） 陈日檬 广东轻工职业技术学院（５１０３００） 李慧玮
摘要 目的 建立测定甲硝唑片中 甲硝唑含量的高效液相色谱法。方法 采 用 ａｇｉｌｅｎｔ － Ｃ１８（５μｍ １５０2４．６ｍｍ）柱 ，以 甲醇－ 水（２０：８０）用冰醋酸调 ｐＨ 值 ３．５ 为流动相，流速为 １．０ｍｌ ／ ｍｉｎ，柱温为室 温，检测波长为 ２７７ｎｍ。结果 甲硝唑在 ２．８～２８μｇ ／ ｍｌ 浓度范围内峰面积与进样 量呈良好线性关系（ｒ＝０．９９９６），回归方程 为 ：ｙ＝３．１４３７ｘ＋８．６９５ ×１０４，平 均 回 收 率 为 ９９．６％，ＲＳＤ＝０．９３％，日内 稳 定 性 ＲＳＤ＝ １．０％。结论 该方法简便，快捷，准确，样 品供试液稳定，重现性好，可作为甲硝唑 片中甲硝唑的含量测定方法。
５．讨论
实验证明，该研究提出用 ＨＰＬＣ 法测 定甲硝唑片含量，选择性、准确度及专属 性比目前采用的紫外分光光度法检测的 要高，且方法简便、回收率高，精密度、重 现性好，自动化程度高，可作为提高甲硝 唑片中甲硝唑含量测定的检测方法。 参考文献 １ 中国药典委员会．中国药典（二部）［Ｓ］． 北京：化学工业出版社，２００５，１２３～１２４
４．３ 重现性试验 对同一批样品从称样起按样品测定 项下操作，重复实验 ６ 次，结果甲硝唑测 定项的 ＲＳＤ＝１．２％，说明本法重复性良好。 ４．４ 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品粉未适量 （含甲硝唑约 １．２ｍｇ），于 １００ｍｌ 容量 瓶 中，加盐酸溶液（９→１０００）约 ２０ｍｌ，微温 使甲硝唑溶解，再精密加入甲硝唑对照 品贮备 １０ｍｌ，用加流动相稀释至刻度，摇 匀，即得。按上述色谱条件分别测定，记 录峰面积。计算得回收率为 ９９．２％，ＲＳＤ＝ ０．６６％（ｎ＝５）。 ４．５ 稳定性试验 取 ０６０６０６ 批样品，依“３．２”项下的供 试品溶液配制供试液一份，于配制供试 液后的 ０ 小时，２ 小时，４ 小时，６ 小时，８ 小时依法各测定 １ 次，记录峰面积，计 算。ＲＳＤ 为 ０．６２％（ｎ＝５），结果表明供试 液稳定性良好。 ４．６ 样品测定 取对照品溶液和供试品溶液 ３ 批， 按上述色谱条件每件测定 ３ 次，按外标 法以峰面积计算甲硝唑的含量。结果与 《中国药典》的方法测定结果比较。将测 定所得的峰面积按回归方程计算即得。
３．溶液配制３ຫໍສະໝຸດ １ 对照品溶液 分别精密称取甲硝唑对照品约 １３ｍｇ，１００ｍｌ 容量瓶，加盐酸溶液（９→ １０００）约 ３０ｍｌ，微温使甲硝唑溶解，并稀 释至刻度，摇匀，作为贮备液。再精密移 取贮备液 １０ｍｌ 置于 １００ｍｌ 容量瓶，加流 动相稀释至刻度，摇匀，即得。 ３．２ 供试品溶液 取本品 １０ 片，精密称定，研细，紧密 称取适量（ 约 相 当 于 甲 硝 唑 ５０ｍｇ），置 １００ｍｌ 容量瓶中，加盐酸溶液（９→１０００） 约 ３０ｍｌ，微温使甲硝唑溶解，加流动相稀 释 至 刻 度 ，摇 匀 ，滤 过 ，精 密 量 取 续 滤 液 ５ｍｌ 置 ２００ｍｌ 容量瓶中，加流动相稀释至 刻度，摇匀，即得供试液。