Ｏｘｄ ｔ ｅ Ｓｒ ｓ ｎ ｔ ｅＤｅ ｅｏ ｍｅ ｔｏ ｏ ｒ ｌ ｓ ｌ ｏ ｉ． ｉ ａｉ ｔｅ ｓｉ ｖ ｌ ｐ ｎ ｆＧｌ ｍｅ ｕ ｏ ｃｅ ｓｓ Ａ ｖ ｈ ｒ ｍ Ｊ
Ｎｅｈｏ．０ ８ ｕ ； （ ： —０ ｐ ｒ１２０ ｇ８ ９１ ６ ７ ． Ａ ２ ）２
ｌ 材料和方法 １１ 材料 ． 人脐静脉内皮细胞株购于北京大学医学院肿瘤研究 备测 。Ｆ ｎ及 Ｃ ｌＶ测定依照 Ｅ ＩＡ试剂盒说明检测 。Ｅ － 蛋 ｏＩ ＬＳ Ｔ１ 白测定按照 Ｅ － 放免试剂盒说明检测。 Ｔ１
１ ． 统 计学处理 采用 Ｓ Ｓ １． ．４ ２ Ｐ Ｓ１ ０统计 软件包进 行数据处
《 求医问药》下半月刊
Ｓｅ ｅ ｉａ ｎ ｓ ｈ ｅｉｉｅ ０ １ ｅｋＭ ｄｃ ｌＡｄＡ ｋＴｅＭｄｃｎ ２ １ 年第 ９ 卷 第６ 期
２ ５
注： 与正常对照组比较 ＜ ． ；与单培养 比 Ｐ０ ５ Ｏ 较 △ ＰＯ ５ ＜． ；与高糖组 比 ０ 较 与高糖高脂组比较 ｊ ＜ ． 。 ｆ ０５ ｝ ０ Ｐ 表 ２ 共培养及单培养各组 Ｆ 含量 ｎ
这一机制被认为与 Ｐ Ｃ系统和 Ｔ Ｆ Ｂｌ Ｋ Ｇ ． 激活相关 。
综上所述 ，高糖高脂环境下内皮细胞与系膜细胞间可能存 在异常的相互 作用 ，这一相互作用可以促进细胞外基质的产
生。而氯沙坦可以通过抑制细胞外基质的产生，干预这一异常
的相互作用 ，这可能也是氯沙坦治疗糖尿病’ 肾病的重要机制之
１ ＿ ２ 方 法
１ ． 细胞培养 取在 １％ｔ 牛血清的低糖 ＤＭＥ 培养液中 ．１ ２ ０ Ｊ ， Ｍ 贴壁生 长良好的处于对数生长期的细胞进入实验组。单培养 系 膜细胞 以 ２×１５个／Ｌ ０ 孑 直接接种于普通 ６ Ｌ 孑 培养板 中；共培养
先将内皮细胞以 １ ０ 个／ ×１５ 孔接种于 ６孔培养板中，待细胞贴
＿ ３ 培养 ，系膜细胞单培养两种 。每种培养方式分别按照培养条件 ２ 氯沙坦对内皮细胞和系膜细胞相互作用的干预 细胞上清 随机分为六组：Ａ正常对照组（． ｍ １ ． ５ ｍ ｏＬ 葡萄糖） Ｂ 甘露 液中 Ｃ ｌ 、Ｆ 含量在培养 ｌ，２，４ｈ ５ ／Ｄ ； ｏＩ ｎ Ｖ ２ ４ ８ 时氯沙坦干预组与高 醇组 （ ４ ｍ ｌ 甘 露醇 ） ２．ｍ ｏＬ ５ ／ ；Ｃ 高糖组 （ ０ ｍ ｌ ． 萄 ３ｍ ｏＬＤ 葡 糖高脂组 比 ， 均＜． 表 １ ２。 ／ 较 Ｐ ０ ５（ ， ） Ｏ 表 １ 共培养及单培养各组 Ｃ ｌ ｏＩ Ｖ含量（ ／） ｕＬ ｇ
糖尿病肾病 （ ｉ ｅ ｃ ｅｈｏａ ｙＤ 是糖尿病患者最主 糖 ） 高脂组 （０ ｅ Ｌ Ｃ） 高糖高脂组 （ ０ ｍ ｌ Ｄ ｄａ ｔ ｐ ｒｐｔ ， Ｎ） ｂ ｉｎ ｈ ；Ｄ ２ｍｄ Ｐ ；Ｅ Ｌ ３ｍ ｏＬ ． ／ 要 的微血管并 发症之一，是终末期肾病 的主要病 因【。糖脂代 葡萄糖＋ ０ ／ Ｐ ；Ｆ氯沙坦组 ，加入氯沙坦 （ ｌ １ ２ｍｇ Ｌ Ｃ） Ｌ 工作浓度 ： 谢紊乱在 Ｄ Ｎ的发生发展 中起非常重要的作用 ，相互促进导致 １．ｍｏ Ｌ）预处理 １ ０５ ｌ ／ ｈ后，加入 Ｄ 葡萄糖 、Ｌ Ｃ ． Ｐ ，工作浓度同 肾小球 系膜 区 Ｅ Ｍ 进行性聚积和肾小球硬化 。为更好 的模拟 Ｅ组。各组分别培养 １ ，２ ，４ ｈ Ｃ ２ ４ ８ 。每组均重复 ３次。 Ｄ Ｎ时肾小球病变过程 ，本实验通过建立 内皮 细胞与系膜细胞 １ ． 细胞上清液各种蛋 白测定 收集上清液置于．Ｏ ．３ ２ ７ ℃保存 ， 的共培养模型 ，以单独培养的系膜细胞做对照 ，研究 内皮细胞 与系膜 细胞间的相互作用对 Ｅ Ｍ 产生的影响 ，以期从 细胞 间 Ｃ 相互作用的角度探讨 Ｄ 的发病机制。 Ｎ
理 ，均以 ±ｓ 表示 ，两组间差异 比较采用 ｔ 检验 ；多组间差异
比较采用方差分析，Ｐ ０ ５ ＜ ． 表示差异有统计学意义。 ０ ２１ 高糖高脂对 Ｆ 、Ｃ ｌＶ的影响 在共培养及单培养条件 ． ｎ ｏ Ｉ 下，与对照组相 比，随作用时间的延长 ，高糖、高脂对细胞上 清液 中 Ｃ ｌ 、Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ的分泌有促进作用 （ ＜ ． ，其中作用 Ｐ ００ ５）
培养组细胞上清液 Ｃ ｌ 、Ｆ ｏＩ Ｖ ｎ的含量较单培养组 明显增高 （ ＜ ． ） ２ Ｐ０ ５ ；（ ０ ）氯沙坦可抑制高糖高脂引起的 Ｆ 和 ＣｌＶ升高 （ ｎ ｏＩ Ｐ ＜ ．５ ；结论 ：（ ）高糖高脂环境下，内皮细胞和系膜细胞 问存在相互作用，这种作用能促进 Ｅ Ｍ－ｏ Ｉ ０Ｏ ） １ Ｃ Ｃｌ Ｖ、Ｆ ｎ的产生；（ ）氯沙 ２ 坦能通过抑制 Ｅ Ｍ 的产生影响细胞间的相互作用。 Ｃ 【 关键词 】 高糖 ；溶血卵磷脂； 细胞间相互作用；细胞外基质 【 中图分类号】 ５７ Ｒ ８． １ 【 文献标识码 】 Ａ 【 文章编号】 ６２ ５３ ２ １） ６ ０４０ １ ． ２ （ ０１ ０． ２． ７２ ０ ２
ｅｏｏｙｏ ｔ ｅ ｉ ｅ ｓＤ ａｅ ｓ ０ １ ０Ｓｐ ｌ ） ． ｔ ｌ ｆｙ ｄａ ｔ ． ｉ ｔ ， ０ ， （ｕ ｐ２： ｉ ｇ ｐ２ ｂｅ ｂｅ２ ５ ６ ［］ Ｌ ｅＨＳ Ｓ ｎ Ｙ Ｏ ｉｉ ｄＬ ｗ Ｄ ｎｉ ｉｏｒｔｎ ａｄ ３ ｅ ， ｏｇ Ｃ ． ｘｄ ｅ ｏ － ｅｓｙＬｐ ｐｏｅ ｎ ｚ ｔ ｉ
２ 内皮 细胞 与 系膜 细 胞相 互作 用对 Ｆ 、Ｃ ｌＶ 的影 响 ． ２ ｎ ｏＩ 正
壁后再将系膜细胞 以 ２ １５ 孔接种于微孑底膜套皿内。待 × ０ 个／ Ｌ 细胞生长至 ８％ ０ 融合时换用无血清的 Ｄ Ｍ 同步化 １ 后 ， ＭＥ ２ ｈ 加入条件培养液进行干预。 １ ． 实验分组 按培养方式不 同分为 内皮细胞与系膜细胞共 ．２ ２
来， 脂代谢紊乱也越来越受到人们的关注 ， 前脂代谢紊乱也被 目
证实是 Ｄ Ｎ的一种独立损伤因素［。糖尿病 肾病特征性的病理 ２ ］
变化为系膜细胞增生 、细胞外基质聚积及 肾小球基底膜增厚 。 系膜区细胞外基质过度堆积是导致糖尿病 肾病 肾小球硬化的直 接原 因之一 ，众多研究表 明，Ｆ ｎ和 Ｃ ｌＶ是反应细胞外基质 ｏＩ 胶原代谢的敏感指标。本研究发现 ，不论在共培养还是在单培 养条件下 ，高糖和高脂均可 以促进系膜细胞 Ｆ ｎ和 Ｃ ｌＶ 的产 ｏＩ 生 ，而在高糖高脂联合作用条件下 ，这一促进作用更加明显 ，
２ｈ ４ 达高峰 （ ＜ ． ） 高糖对 Ｃ ｌ Ｐ０ ５ ； ０ ｏＩ Ｖ、Ｆ 的促进作用与渗透 ｎ 压无关 ，相同渗透压的甘露醇对 Ｃ ｌＶ、Ｆ ｏ Ｉ ｎ的分泌无明显影响 （＞ ． ） ＰＯ ５ 。高糖高脂组细胞上清液中 Ｃ ｌ Ｆ 的增加更为 ０ ｏＩ Ｖ、 ｎ 明显 （ ＜ ． ） 表 １ ｏ Ｐ ００ （ ，２） ５
抗剂（ｒ 目前已广泛应用于糖尿病肾病的临床治疗 中。氯沙 Ａ Ｂ） 坦作为一种重要的 ＡＲ Ｂ类药物 ，许多研究证实其对 肾脏的保 乱 ，更重要 的是能够抑制糖尿病状态下多种损伤介质的表达 。 本文 的研究结果显示加入氯沙坦干预能明显减少高糖高脂所致 的 Ｃｌ ｏ１ Ｖ、Ｆ 增加 ，提示氯沙坦可以通过对 Ｅ Ｍ 的分泌的拮 ｎ Ｃ
▲ Ｐ０ ５ ＜ ． ；与高脂组比较 ※ Ｐ Ｏ ５ ０ ＜． ： ０
注：与正常对照组 比较 Ｐ ０ ５ ； ＜． ０ 与单培养比较
与高糖高脂组 比较 撑Ｐ ０ ５ ＜． 。 ０
３ 讨 论
△ Ｐ０ ５ ＜ ． ；与高糖组 比 ０ 较
▲ Ｐ０５ ＜． ；与高脂组 比 ※ Ｐ０ ５ ０ 较 ＜． ： ０
（ 上接第 ２ ６页 ）［】 张素 良，张少波． ７ 思密达 治疗迟发型母乳
［Ｏ 魏雪莲 ，关晓洁． １】 妈咪爱散剂联合思密达治疗新生儿母乳
性黄疸 １ 例报告． 医药实践． １． （ ） ６． ５ ７ 临床 ２ ０ ９ Ａ：４ ６ ０ １６ ４ ４ ［ 施文洁， ． ０ ８ ］ 钱琪 １ 例母乳 性黄疸 的临床 分析． １ 中国实用 医
Ａ Ｊ ｅｈｏ．０ ８２（） －． ｐｂ２０ ｅ ． ｍ Ｎ ｐ １ ０ ； １ １ Ｅ ｕ ０７Ｓｐ ０ ｒ ２ ８ ：７ ２ ［］ Ｍｃ ａｒ Ｄ Ｄ ｓ ｇｌ ｉ ｆ ａｙａｉ ｅ ｂ ｌｍ ｅ ２ Ｇ ｒ Ｊ ． ｙｒ ｕａｏ ｏ ｔ ｃ ｍ ｔ ｏｉ ｉ ｔ ｙ ｅ ｔｎ ｆｒ ｄ ａ ｓ ｎ ｈ
参 考文献
［］ Ｘ ｅ ， ｈｎＸ Ｅ ｉ ｍ ｏ ｇ， ｊｒ ｕ ｏ ｓ ｒｋｆ ｔｒ １ ｉ Ｙ Ｃ ｅ ． ｐｄ ｉｌ ｙｍａ ｔ ｍｅ，ｉ ｃ ｓ ｅ ｏ ｏｏ ｃ ｓ ａｏ ，
ｐ ｅ ｅ ｔ ｎ ａ ｄ ｍａ ａ ｅ ｎ ｆ ｃ ｒ ｎ ｃ ｋ ｄ ｅ ｉｅ ｓ ｎ Ｃ ｉ ａ ｒｖ ｎ ｉ ｎ ｎ ｇ ｍｅ ｔ ｏ ｈ ｏ ｉ ｉｎ ｙ ｄ ｓ ａ ｅ ｉ ｈ ｎ ． ｏ
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《 求医 问药 ＞下半月刊
Ｓｅ ｅｉａ ｎ ｓ ｈ ｅ ｉｉｅ ０１ ｅｋＭ ｄｃｌＡｄＡｋＴｅＭｄｃｎ ２ １ 年第 ９ 卷 第６ 期
浅谈高糖高脂环境下 肾小球内皮细胞与系膜细胞间相互作用
对细胞外基质产生的影响
赵晋 晋 １ 雷 闽湘 ２
（ 湖南省长沙市第一医院内分泌科 湖南 长沙 ４ ００ ：２中南大学湘雅医院内分泌科 湖南 长沙 ４ ０ ０ ） １ １０ ８ １０ ８
。
一
Ｏ
本实验发现，与系膜细胞单培养相 比，正常葡萄糖水平 下将内皮细胞与系膜细胞共 同培养 ，上清液 Ｃ ｌＶ及 Ｆ 含量 ｏ Ｉ ｎ 均无 明显变化 ；而 在高糖及高脂 条件下两种细胞共培养时 ， Ｃ ｌＶ及 Ｆ ｏＩ ｎ蛋 白含量 均 明显 高于单培养 时的数值 。结果表 明，内皮细胞与系膜细胞之间可能存在一定的相互作用 ，导致 损伤反应在肾小球局部不断放大 ，加重细胞外基质的积聚。 肾脏局部肾素 。 血管紧张素． 固酮 （ Ａ 醛 Ｒ Ｓ）系统在糖尿病 肾病的发病机制 中的作用 日益受到重视 ，而血管紧张素受体拮
抗 ，使内皮细胞和系膜 细胞之间的异常相互作用得到有效控 制，从而产生明显的肾脏保护作用。