三、鉴别
（一） 重氮化-偶合反应
1. 原理
芳伯氨基
NaNO2 H+
重氮盐
碱性β-萘 酚
偶氮染料
适用范围： 具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基
H2N
COOC2H5
苯佐卡因
H 2N
C O O C H 2C H 2N (C 2H 5)2 H C l 盐酸普鲁卡因
2. 方法
（1） S 重氮化偶合 沉淀（橙黄到猩红色） 如：苯佐卡因，盐酸普鲁卡因
盐酸普鲁卡因（二乙胺基乙醇酯）
盐酸普 鲁卡因
NaOH ↓白（普鲁卡因）
△ 油状物
△
过量
沉淀溶解 HCl ↓白
HCl 对氨基苯甲酸钠 + 二乙氨基乙醇
（↑碱性）
2. 苯佐卡因（乙醇酯）
苯佐卡因 NaOH 乙醇 I2 碘仿
△
黄色沉淀及臭气
3. 对乙酰氨基酚与醋氨苯砜
水解
S
醋酸
乙醇 H+
乙酸乙酯
香味
盐酸普鲁卡因胺
抗心律失常药
酯键
酰胺键
不属对氨基苯甲酸酯类药物, 但结构
与化学性质相似
二 、酰胺类药物
R3
R1
N C R2
HO
R4
结构特点: 苯胺的酰基衍生物, 具芳酰氨基
典型药物:
对乙酰氨基酚 盐酸利多卡因 盐酸布比卡因 醋氨苯砜
HO
H 3 C O C H N
NHCOCH3
对乙酰氨基酚
O S O
外指示剂法：
Ar—NH2
HCl Ar—N ≡N+Cl
NaNO2
碘化钾 淀粉糊
蓝色
2NaNO2+2KI+4HCl 2NO+I2+2KCl+2NaCl+2H2O
优：
灵敏度较高
缺： （1）使用不方便 （2）碘化钾在未到终点时，在酸性条
件下可被空气氧化析出碘。 （3）外试消耗供试品
（二）非水溶液滴定法
醋酸汞：用以形成不离解的氯化汞，加3-5ml 以消除氢卤酸的干扰
结晶紫：非水溶液滴定指示剂 pH 0.5（绿）～2.0(蓝）
（三）UV法
对乙酰氨基酚在稀碱性溶液中， 在257±1nm波长处有最大吸收，可用 于其原料及其制剂（包括对乙酰氨基 酚片剂、注射液、栓剂）的含量测定。
对乙酰氨基酚 Ch.P（2000）
来源：由还原剂铁粉与对氨基酚的氧化 物引起
方法：比色与比浊
检查方法
取本品1.0g，加甲醇溶液（1→2） 20ml溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试 液1m1，摇匀，放置30min；如显色，与 对乙酰氨基酚对照品1.0g 加对氨基酚 50g用同一方法制成的对照液比较，不 得更深。
允许杂质存在的最大量
L
2. 硫氰酸盐衍生物
盐酸丁 25%硫氰酸胺
卡因
5%醋酸
测熔点（131 燥
（六）UV
苯环的紫外吸收特性
（七）IR
适用于结构复杂而相互差别小的 药物鉴别与区别。 例：盐酸普鲁卡因与盐酸普鲁卡因胺
四、杂质检查
（一）盐酸普鲁卡因注射液中杂质的检查
杂质来源： 制备或贮藏过程中水解
非水溶液滴定法步骤
除另有规定外,精密称取供试品适量〔约消耗 高氯酸滴定液(0.1mol/L)8ml〕， 加冰醋酸10～30ml使溶解，加各药品项下规 定的指示液1～2滴， 用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定。 终点颜色应以电位滴定时的突跃点为准，并
将滴定的结果用空白试验校正。
醋酐：用以除去溶剂中的水分
检查方法： TLC的杂质对照品法
精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml中 含盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液，作为供试品溶液。 取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1ml中含 30g的溶液，作为对照品溶液。取上述两种溶 液各10 l，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘 合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮-甲醇 （14∶1 ∶ 1 ∶ 4）为展开剂，展开后，取出晾 干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2％对二甲氨基 苯甲醛乙醇溶液100ml，加冰醋酸5ml制成）喷
为了避免滴定过程中HNO2 的分 解逸失，可采用快速滴定法。
快速滴定法：滴定管尖插入液面下2／3 处，在搅拌下一次性放下大部分滴定液， 近终点前才提出滴定管，冲洗管尖，再 缓缓滴定至终点。
（5）终点指示
终点指示方法
永停滴定法 外指示剂法 电位法 内指示剂法
电位滴定法:
原理： 以参比电极与指示电极同时浸入
雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的
杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较， 不得更深。
允许杂质存在的最大量
L
供试品量 100%
30103 10
100%1.2%
2.510
以下那种药物中应检查对氨基苯 甲酸
A. 盐酸普鲁卡因 B. 盐酸普鲁卡因胺 C. 注射用盐酸普鲁卡因 D. 盐酸普鲁卡因胺片 E. 盐酸普鲁卡因注射液
NaNO2 Ar—N ≡N+Cl
HCl
适用范围：具有芳伯氨基或潜在芳伯氨基
2. 测定条件 （1）溴化钾的加入
溴化钾起催化剂的作用
NaNO2 + HCl → HNO2 +NaCl HNO2 + HCl → NO·Cl + H2O
N O+ Cl-
N H2
慢
H N NO
快
N N OH
快
N N + C l-
2. 有关物质 检查方法：TLC 以对氯乙酰苯胺为杂质对照品，检
查多种杂质的限量。 对氯乙酰苯胺：杂质对照品法 其它杂质：参比杂质对照品法
3. 对氨基酚 来源：乙酰化不完全或发生水解 检查原理与方法：对照法
对氨基酚 亚硝基铁氰化钠 蓝色配位化合物
（对照）
OH-
比色
OH-
（样品）
亚硝基铁氰化钠
1. 乙醇溶液的澄清度与颜色
第六章 胺类药物的分析幻灯片
H2N
COOC2H5
苯佐卡因
H 2N
C O O C H 2C H 2N (C 2H 5)2 H C l 盐酸普鲁卡因
H 3 C (H 2 C )3 H N
C O O C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 )2 H C l
盐酸丁卡因
H 2 N
C O N H C H 2 C H 2 N (C 2 H 5 )2H C l
HNO2+H2O
终点： 溶液中开始有亚硝酸，电极起氧化 还原反应，电流计偏转，为终点。
永停滴定法（附录ⅦA）
用作重氮化法的终点指示时，调节R1 使加于电极上的电压约为50mV。取供试品 适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外， 可加水40ml与盐酸溶液（1→2）15ml，而 后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化 钾2g，插入铂—铂电极后，将滴定管的尖端 插入液面下约2/3处，用亚硝酸钠滴定液 （0.1mol/L或0.05mol/L）迅速滴定，随滴 随搅拌，至近终点时，将滴定管
待滴定液，测量电位，随着滴定进行 电位也逐渐变化，电位发生突跃即为
终点 。
内指示剂法:
原理： 过量的亚硝酸氧化指示剂变色如：
中性红、橙黄IV-亚甲蓝和二氰双邻氮 菲亚铁
缺点：重氮盐有色干扰
永停滴定法 Ch.P（2000）
原理：
电极：铂—铂电极
阳极 NO+H2O HNO2+H++e
阴极 NO+H++e
2. 酯键或酰胺键的水解
利用水解产物的性质来进行鉴别 注： 水解速度受空间位阻、光线、热
或碱性条件的影响
3. 弱碱性（脂烃胺侧链）
与生物碱沉淀试剂生成沉淀，非 水溶液滴定法测定含量。
游离碱易溶于有机溶剂； 其盐 可溶于水。
4. 其它取代基（酚羟基） 可区别对乙酰氨基酚与醋氨苯酚
5. 与金属离子沉淀 6. UV和IR
对乙酰氨基酚 Ch.P（2000） [鉴别] （2）取本品约0.1g，加稀盐酸5m1， 置水浴中加热40分钟，放冷；取0.5m1， 滴加亚硝酸钠试液5滴，摇匀，用水3ml稀 释后，加碱性β-萘酚试液2m1，振摇，即 显红色。
（3）盐酸丁卡因 NaNO2 N-亚硝基乳白色沉淀
H+
H 3 C (H 2 C )3 H N
取本品约40mg，精密称定，置250ml
量瓶中，加0.4％氢氧化钠溶液50ml溶解
后，加水至刻度，摇匀，精密量取5m1，
（2） S 水解
重氮化偶合 沉淀
如：对乙酰氨基酚，醋氨苯砜
盐酸普鲁卡因 Ch.P（2000） [鉴别] （1）本品显芳香第一胺类的鉴别
反应（附录Ⅲ） 取供试品约50mg，加稀盐酸1m1，必要 时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L亚 硝酸钠溶液数滴，滴加碱性β-萘酚试液数 滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色 沉淀。
N H C O C H 3
醋氨苯砜
H3C
NHCOCH2N(C2H5)2
CH3
. HCl . H2O
CH3
C4H9 N
NHCO
盐酸利多卡因
. HCl
CH3
盐酸布比卡因
（一）化学结构及性质
1. 芳伯氨基或潜在芳伯氨基 （1）重氮化偶合反应 （2）用亚硝酸钠滴定法进行含量测定
注: 盐酸丁卡因无此特性 利多卡因与布比卡因难水解
最常用
酸度 加快重氮化反应速度 重氮盐在酸性溶液中稳定 防止生成偶氮氨基化合物
酸度 阻碍芳伯氨基的游离 亚硝酸易分解
N样 :N盐酸= 1: 2.5 ~6
（3）温度 T ，V T ， 亚硝酸逸失，重氮盐分解
在室温下（10°C— 30°C）进行滴定
（4）滴定速度