以利用DNA合成仪人工合成
蛋白质的氨基酸序列
推测
mRNA的核苷酸序列
推测
基因的核苷酸序列
化学合成
思考：化学法合
成的目的基因含内含 子、启动子和终止子 吗？
目的基因
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人工合成法（真核生物）
反转录法 目的基因的信使RNA
单链DNA
合成
目的基因
化学合成法
肽链氨基酸序列
推测
信使RNA序列
推测
基因的核苷酸序列
合成
目的基因
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课堂小结生物体内全部DNA
限制酶
许多DNA片段
与运载体连接导入
受体菌群体
某种生物某个时期的mRNA
反转录 cDNA
与运载体PPT
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真核细胞的cDNA的获取
非编码区 基因 启动子
不含非编码 序列。即不 含非编码区
和内含子
编码区
非编码区
终止子
转录 剪接 逆转录 复制
合成
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3
原核细胞的基因结构
非编码区 编码区上游
启动子
编码区
非编码区
编码区下游 终止子
与RNA聚合酶结合位点
基 编码区 ：编码蛋白质 ,连续不间断
因
结
①不编码蛋白质。
构 非编码区 ②调控遗传信念:
将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受 体菌的群体中，各个受体菌分别含有：cDNA语言精品资源PPT6
基因组DNA与cDNA1.2 基因工程的基本操作程序
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知识回顾： 基因工程基本操作的四个步骤
有了目的基因，我们才能赋
1、目的基因的获取 予一种生物以另一种生物的 遗传特性。
使目的基因在受体细胞中稳
2、基因表达载体的构建 定存在，并可进行遗传、表 达和发挥作用
载体进入受体细胞稳定表达，
3、目的基因导入受体细胞 才能实现一种生物的基因在 另一种生物中的转化。
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aP、CDRNA技变术性的（操90℃作-过95程℃）：
双链DNA模板在热作用下，
氢___键__断裂，形成_单__链___D_N_A
b、退火（复性55℃-65℃）：
系统温度降低，引物与DNA
模板结合，形成局部双链
________。
c、延伸（70℃-75℃）：在
Taq酶的作用下，合成与模
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2.利用PCR技术扩增目的基因
1 概念： PCR全称为_多__聚__酶__链__式__反__应__，是一项 在生物体__外__复制_特__定__D_N_A_片__段_的核酸合成技术。
2 原理：DNA复制 原料：模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷 酸；热稳定DNA聚合酶
3 前提： 已知目的基因的一段核苷酸序列
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延伸
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③过程：
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PCR技术的操作过程
PCR反应体系中目的基因成指数(2n)形式扩增
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PCR技术扩增与DNA复制的比较
DNA复制
PCR技术
场所
主要在细胞核内
体外复制
原理
碱基互补配对原则
碱基互补配对原则
条件 解旋方式
四种脱氧核苷酸、模 板、酶、ATP
物种间的基因交流
无
有
某种生物的部分基因 某种生物的全部基因
可以
部分基因可以
语言精品的基因的有关信息，例如，根据基因 的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的 位置、基因的转录产物mRNA，以及基因的表达 产物蛋白质等特性来获取目的基因。
语游言精有品资R源PNPAT 聚合酶结合位点: 4
真核细胞的基因结构
非编码区
编码区上游
启动子
编码区
非编码区
编码区下游
终止子
与RNA聚合酶 结合位点 外显子
内含子
基
外显子：能编码蛋白质的序列 编码区
因
内含子：不能编码蛋白质的序列
结 非编码区 ：有调控作用,上游有RNA聚合
构
酶语结言精合品资位源PP点T (启动子)。
板互补的_D_N__A_链___。
d.重复a.b.c步骤：每重复
一次，目的基因增加_一_语_言倍精品资源PPT
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5/G—G
5/ 引物Ⅱ 3/
3/
G—G C—C
T—C 3/ 3/ A—G 5/
引物Ⅰ
G—A 5/
变性 复性
1.目的基因DNA受热变性，解链； 2.引物与单链互补结合； 3.合成链在DNA聚合酶作用下进行延伸。
RNA聚合酶 剪接有关的酶
mRNA前体
mRNA
逆转录酶
单链DNA DNA聚合酶
cDNA
语言精品资源PPT8基因组DNA与cDNA的比较类型
大小 基因中启动子（具有 启动作用的DNA片段）cDNA 小无基因组 大
有
基因中内含子(位于编 码蛋白质序列的非编 码DNA片段）
基因多少
解旋酶催化解旋
四种脱氧核苷酸、 模板、酶、引物
DNA在高温下变性解旋
酶
细胞内的DNA聚合酶、 解旋酶、DNA连接酶等
热稳定的DNA聚合酶
特点 结果
半保留复制、 边解旋变复制
半保留复制、 全解旋再复制
形成整个DN语A言分精品子资源PPT 大量的DNA片段 16
随堂闯关 PCR技术扩增过程
a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下， 氢断键裂）：系统温度DN降A低，引物 与DNA模板结合，形成局部__双__链____。
c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 从
引物的D5N′A端→3′端延伸，合成与模板互补 的___链_____。
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3. 人工合成法
在基因较小，核苷酸序列已知的情况下，可
才能确定目的基因是否真正
4、目的基因的检测与鉴定 在受体细胞中稳定遗传和正
语言精品资源PPT 确表达。
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一、目的基因的获取
1 目的基因主要是编码蛋白质的基因： 如：与生物抗性相关的基因、与优良品质相 关的基因、与生物药物和保健品相关的基因、 与毒物降解相关的基因、与工业用酶相关的 基因、具调控作用的因子等。