上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 优点
鸟枪法
操作简便 广泛使用
专一性强
反转录法
根据已知氨基 专一性最强 酸合成DNA法
缺点 工作量大，盲目， 分离出来的有时并 非一个基因 操作过程麻烦， mRNA很不稳定，要 求的技术条件较高 仅限于合成核苷酸 对较少吗?
PCR技术—聚合酶链式反应

概念：
是一项在生物体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术

原理：
DNA双链复制的基本原理
PCR扩增仪

前提：
一段已知目的基因的核苷酸序列
条件： 模板DNA
(含有目的基因)
四种脱氧核苷酸dNTP 热稳定DNA聚合酶(Taq酶） 一对引物 温度控制
指数 方式扩增，即____ ④方式：以_____ 2n （n为扩增循 环的次数）
基因工程基本操作的四个步骤
1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定
一、目的基因的获取
请阅读P9第一和二两段
编码蛋白质的结构基因 1、目的基因主要是指______________________
2、获取目的基人工合成
利用PCR技术扩增目的基因
(二)利用PCR技术扩增目的基因 选修1 P60
多聚酶链式反应 ，是一项 ① 概念：PCR全称为_______________ 体外复制特定 DNA片段的核酸合成技术 在生物____ ___________ DNA双链复制 ②原理：__________ 已知基因的核苷酸序列 、 ③条件：_______________________ 四种脱氧核苷酸 、___________ 一对引物 (做启动子)、 _______________ DNA聚合酶 前提条件： ___________. 指数 方式扩增，即____ ④方式：以_____ 2n （n为扩增循 环的次数） ⑤结果： 使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增
⑤结果：
使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增
⑥过程： a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板 氢键 断裂，形成___________ 单链DNA 在热作用下，_____ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 双链 。 物与DNA模板结合，形成局部________ c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从 引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补 DNA链 。 的________
(单链RNA/单链DNA)
核酸酶H
单链DNA
DNA聚合酶 因的获得
③根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ：
蛋白质的氨基酸序列 根据已知蛋白质 的氨基酸序列，推测 推测 出相应的信使RNA序列， mRNA的核苷酸序列 然后按照碱基互补配 推测 对原则，推测出它的 结构基因的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序 列，再通过化学方法， 化学合成 以单核苷酸为原料合 目的基因 成目的基因。(一)从基因中获取目的基因1.基因

将含有某种生物不同基因的许多 DNA片断，导入到受体菌的群体中， 各个受体(直接分离法) 供体细胞中的DNA 限制酶 许多DNA片段
与载体连接载入
目的基因 分离
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
运载体 导入 受体细胞（基因组）外源DNA扩增产生特定RNA
②反转录法：
以目的基因转录成的 信使RNA为模板，反转录 成互补的单链DNA，然后 在酶的作用下合成双链 DNA，从而获得所需的基 因。
反转录酶 杂交双链