对1：
A1

lg
I01 I1

1b c
I1 I01 10λ1bc
对2：
A2
lg
I02 I2
λ
2bc
I2 I02 10λ2bc
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1 Ư I2

lg
I 01
I 01 10λ1bc

光是一种电磁波，具有波粒二像性。
λν= c ，E =hν =hc/ λ Planck常数：h=6.626 × 10 -34 J × S 光的波长越短（频率越高），其能量越大。
白光(太阳光)： 由各种单色光组成的复合光
单色光： 由单一波长的光组成的光
复合光： 由不同波长的光组成的光
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3、朗白比尔定律：
T It 10Kbc I0
K 是k 和k ’ 合并常数
A lgT
lg It I0
Kbc
A为吸光度 B为光程的长度（cm)
c为溶质的浓度
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K：比例常数，与物质的性质、入射光波长等有关。
K c：mol / L
摩尔吸光系数 Molar Absorptivity
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特点：
（1）灵敏度高： 10-5~10-6，10-7~10-8，10-10 mol·L-1
（2）准确度高：
比色分析，相对误差5~10%， 分光光度法，2~5%，1~2%；
（3）应用广泛：
可测定绝大多数无机物和许多有机物；
（4）操作简便仪器设备易普及。
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二、光的基本性质
偏离。
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溶液a和b，ca＞cb，入射光为λ2~λ3一段 复合光，简化为λ1 λ2的复合光 。
吸光度产生负误差，浓度越 高，误差越大。
结论：用单色光纯度高仪器；选 最大吸收波长测定；用适当低的 浓度测定。
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复合光对比尔定律的影响
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2.由溶液本身的化学和物理因素引起的偏离 (1) 由于介质不均匀性引起的偏离 当被测试液是 胶体、乳浊液或悬浮物时，将对入射光产生散射 现象，导致吸光度增大，而引起正偏离(偏向吸光 度轴)。
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(2) 由于溶液中的化学反应引起的偏离 如吸光物质 的离解、缔合、形成新化合物或互变异构等。
Cr2O72-+H2O=2HCrO4-=2H++2CrO42-
橙色
黄色
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第三节 目视比色法及光度计的基本部件
一、目视比色法
用眼睛比较溶液颜色深浅以测定物质含量的方法。
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（4）检测器： 检测器的作用是接受从吸收池发出的透射光并 转换成电信号进行测量。 分为光电池、光电管、光电倍增管和光电二极 管阵列。
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显示装置：
检流计，数显，记录仪，CRT。
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分光光度计
单光束 双光束 双波长 光度计比较
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三、物质对光的选择性吸收
1、吸收光谱的产生：
原子外层电子
原子吸收光谱： 选择性吸收某
线光谱
吸收光谱
些波长电磁波
由价电子跃迁产
电子光谱 生的光谱，也称
分子吸收光谱：
紫外 — 可见光 谱
带光谱
分子振动能级：
振动—转 动光谱
由分子振动或 转动能级跃迁 引起的，也称 红外光谱
分子内部价电子运动，分子内原子振动和分子绕其重心的转动。
190(L g 1 cm1)
Ma 55.85190 1.1104(L mol1 cm1)
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二.偏离比尔定律的原因 1、非单色光引起的偏离
严格地说，比尔定律只适用于单色光。
设入射光由 1 和 2 两种波长组成，溶液的吸光 质点对两种波长的光的吸收均遵从吸收定律
第八章 吸光光度法
Spectrophotometry
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第一节 概 述
一、吸光光度法 基于物质对光的选择性吸收而建立起来的分析
方法。
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吸光光度法的分类 （1）根据所用仪器的不同：
目视比色法、光电比色法和分光光度法。 （2）根据所吸收的波长范围不同：
紫外分光光度法(波长200～400nm), 可见分光光度法(400～750nm) 红外光谱法(750～2500nm)
假定一辐射能通过光路后被吸收25%，再通过下一个 光路时被吸收0.75×25%，剩56.25%，依次类推，
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入射光 I0
透射光 It
T It 10kb lgT lg It kb
I0
I0
T 称为透光率 Transmittance
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T 取值为0.0 % ~ 100.0 %
I02 I02
10 λ 2bc
若： λ1 λ2 A 1bc 或 A 2bc
λ1 λ2 A 1bc 或 A 2bc
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非单色光引起的对吸光定律的偏离 对吸收光谱而言，b 和 c 固定，
A Ki
反映了 随波长变化的情况，单一波长， 固定；不 同波长， 不同。因此，非单色光将导致对吸光定律的
测定方法： 标准系列法。
标1
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标
标3 标4 标5
2
未知1 未知2
标准系列 未知样品
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3、优点：
设备简单，操作方便，不要求严格遵守比尔定律。
4、用途:
用在要求不高的常规分析中。
5、缺点： 准确度不高，标准系列制作麻烦，容易受干扰。
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二、分光光度法及光度计 1、分光光度法： 使用分光光度计进行测定的方法。 2、与比色法比较：
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3、光度计组成：
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3、光度计组成： 光源—单色器—吸收池—检测系统 (1)光源： 要求稳定，强度高. 常用6~12V钨丝灯或卤钨灯，2600~2870K, 发
320nm~2500nm的连续光谱
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物质的颜色
由于不同的物质结构不同具有不同量子化能级，产生 的吸收不同。其颜色和光的吸收、透过、反射有关。
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①互补色光： 把两种适当颜色的光按一定的强度比例混合， 成为白光，称为互补色光。
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②无色： 对光谱中各种色光透过程度相同。 ③有色： 物质的颜色由它透过或反射的光决定。 ④黑色: 几乎吸收所有的入射光。 ⑤白色: 几乎全部反射入射光。
练习题 1、人眼能感觉到的光称为可见光，其波长范围是
A. 400~780nm
B. 200~320nm
A
C. 200~780nm
D. 200~1000nm
2 、符合比尔定律的一有色溶液，当其浓度增大
时，最大吸收波长和吸光度分别是
A
A. 不变，增加 C. 增加，不变
B. 不变，减少 D. 减少，不变
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含吸光物质的最低含量，
其单位是μg·cm-2
s M

S在一定的温度和波长下是一常数。S越大， 则测定的灵敏度越低；S越小，灵敏度越高。
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A 和T 的关系:
T It
I0
A lgT lg 1 lg I0 bc
T
It
百分透光率
T% It % I0
A 2.00 lgT %
（1）是用仪器代替人眼进行测量，消除了人的主观误差， 提高了准确度； （2）待测溶液中有其它有色物质共存时，可以选择适当 的单色光和参比溶液来消除干扰，因而提高选择性；
（3）在分析大批试样时，使用标准曲线法可以简化手续， 加快分析速度。
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分光光度计
Agilent 6010紫外/可见分光光度计
A bc
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第四节 显色反应及显色条件的选择
显色反应 将待测组分转变为有色化合物的反应。
显色剂 与待测组分形成有色化合物的试剂。
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一、显色反应的选择 1、显色反应的类型
B. 入射光波长
C. 有色物质溶液的浓度 D. 入射光的强度
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5、某有色物质溶液，遵守比尔定律，当其浓度为c
时，用1.00cm比色皿测得其透光度为T，，当浓度
减小为0.50 c 时，，在同样条件下测定，其透光率
应为
C
A. T 2 B. 2T C. T 1/2
D. T / 2
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全部吸收 T = 0.0 %
全部透射 T = 100.0 %
Link
2、比尔定律(Beer’s Law): 1852 Beer and Bermard发现类似定律， T 和吸光物质的浓度有关：
T It 10k 'c I0
lgT lg It k 'c I0
LinK
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波长光的吸收能力越强，显色反应越灵敏，在最大吸收
波长处的摩尔吸光系数常以 max表示； （２）根据朗伯－比耳定律， ＝A/bc 由实验结果计 算，以总浓度代替吸光物质的浓度， 为表观摩尔吸收 系数， =Ma, M是摩尔质量；
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桑德尔（Sandell）灵敏度S
仪器检测限为A =0.001时，单位截面积(cm2) 光程内所