不同加工方法对延胡索3种生物碱含量的影响目的比较不同加工方法对延胡索药材中有效成分的影响。

方法采用HPLC 测定延胡索中原阿片碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素的含量。

色谱柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺调pH 5.3）=26∶74；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：280 nm；进样量：10 μL。

在上述色谱条件下，3种成分均得到很好分离，各成分质量与峰面积在相应范围内线性关系良好（r2≥0.999 6），平均加样回收率分别为100.31%、99.34%、99.34%（RSD≤2.70%）。

结果大号规格（鲜品直径2.0～3.0 cm）煮制时间5～6 min、中号规格（鲜品直径1.5～1.9 cm）煮制时间2～4 min、小号规格（鲜品直径0.7～1.4 cm）煮制时间1～2 min者中原阿片碱、去氢紫堇碱、延胡索乙素的含量及3种生物碱总含量比各组其他样品高，经煮制加工的延胡索药材样品中3种生物碱的含量总体低于蒸制加工所得的延胡索药材。

结论本研究为延胡索药材产地加工工艺的确定提供了依据。

Abstract：Objective To explore the effects of different processes on the contents of three alkaloid ingredients in Coridalis Rhizoma. Methods The contents of three alkaloid ingredients （protopine，dehydrocorydaline，tetrahydropalmatine）were determined by HPLC. Agilent HC-C18（2）column （4.6 mm × 250 mm，5 μm）was set at 35 ℃；acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution （triethylamine adjusted pH 5.3）（26：74）was set as mobile phase；the flow rate was 1.0 mL/min and detection wavelength was set at 280 nm；the inje ction volume was 10 μL. The three components were separated well under these chromatographic conditions. The linear relationship between the mass of each component and the peak area was good （r2≥0.999 6）. The average recoveries were 100.31%，99.34%，and 99.34%，respectively （RSD≤2.70%）. Results The contents of protopine，dehydrocorydaline，tetrahydropalmatine and the total contents of three alkaloids were higher than other groups in large size samples （diameter of fresh products was 2.0–3.0 cm）which were boiled 5–6 minutes，the medium size samples （diameter of fresh products was 1.5–1.9 cm）which were boiled 2–4 minutes and the small size samples （diameter of fresh products was 0.7–1.4 cm）which were boiled 1–2 minutes. The contents of alkaloid in boiled process were lower than steamed process. Conclusion The results of study provide an experimental basis for origin processing of Coridalis Rhizoma.Key words：Coridalis Rhizoma；steaming process；boiling process；alkaloids；HPLC延胡索為罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的干燥块茎，具有显著的镇痛、镇静、催眠作用，对冠心病、心律失常、胃溃疡等多种疾病有较好的治疗效果[1]。

《中华人民共和国药典》收载的产地加工方法为“置沸水中煮至恰无白心时，取出，晒干”[2]。

延胡索主产于浙江东阳、磐安等地，陕西、安徽、江苏、湖北、湖南等地也产[3]。

产地加工传统习惯上主要依据药材大小掌握不同的煮制时间，煮至中心有一小白点时即可[4]。

查阅文献发现，有研究者以延胡索乙素为考察指标，分析了不同采收期及不同加工方法对延胡索药材的影响，结果以蒸制加工延胡索乙素含量高[5]；张丽宏等[6]以延胡索乙素、原阿片碱为指标的研究，认为微波法比煮法为好；孙乙铭等[7]同样以延胡索乙素、原阿片碱为指标对产地加工工艺进行研究。

中药以多成分起效为其作用特点，延胡索中所含延胡索甲素、延胡索乙素、延胡索丙素（原阿片碱）等生物碱类化学成分[8-9]具有很强的镇痛、镇静和抗心律失常等多种生理活性[1]。

本研究在对延胡索产地加工方法进行实地调研的基础上，结合生产实际情况，通过测定不同加工方法的延胡索药材中去氢紫堇碱、延胡索乙素、原阿片碱3种生物碱成分的含量，对其产地加工方法进行全面考察和探讨，更加客观、全面地评价产地不同加工方法对延胡索药材质量的影响。

1 仪器与试药Agilent 1260高效液相色谱检测仪（包括G1322A在线脱气机、G1312B二元梯度泵、G1329B自动进样器、G1316A柱温箱、G4212B DAD检测器、Agilent 1260色谱工作站），Agilent HC-C18（2）色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm，NO.588905-902），DV215CD十万分之一电子分析天平（美国OHAUS），JK-250DB 型超声波清洗器（合肥金尼机械制造有限公司）。

延胡索乙素对照品（批号CFN99553，纯度98%）、去氢紫堇碱对照品（批号CFN90330，纯度98%）、原阿片碱对照品（批号CFN99399，纯度98%），武汉天植生物技术有限公司；乙腈（色谱纯），天津市大茂化学试剂厂，娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 样品采集与制备延胡索鲜药材于2014年5月5日采自安徽省芜湖县花桥镇，不同大小规格的样品均采自同一块药田，全部样品经本校中药生药教研室汪荣斌副教授鉴定为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuo W.T.Wang的块茎。

延胡索鲜药材经淘洗，净选，除去外皮等非药用部分，略晾干多余水分，按大小对药材进行分档，大、中、小规格分别编号为A、B、C，依据传统经验，鲜品直径大号为2.0～3.0 cm，中号为1.5～1.9 cm，小号为0.7～1.4 cm。

根据传统加工方法调研情况，取不同档样品（每份500 g）分别进行蒸、煮制备，取出，继续晒至干。

晒干的成品呈不规则扁球形，表面黄色或黄褐色，具不规则网状皱纹。

晒至药材不再減失质量，判断为药材已晒干，计算折干率。

折干率（%）=晒干后成品质量÷鲜药材质量×100%。

样品加工方法、加工后性状、折干率、含水量见表1（f为加工前放置2周样品）。

3 方法与结果3.1 色谱条件色谱柱：Agilent HC-C18（2）柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：乙腈∶0.1%磷酸水溶液（三乙胺调pH 5.3）=26∶74；流速：1.0 mL/min；柱温：35 ℃；检测波长：280 nm；自动进样，进样量10 μL。

在此条件下，理论塔板数按延胡索乙素峰、原阿片碱峰和去氢紫堇碱峰计算均不低于3000[10]。

空白溶剂色谱图中在与延胡索乙素、去氢紫堇碱、原阿片碱色谱峰相应位置上无峰，说明此系统条件无干扰。

色谱图见图1。

3.2 对照品溶液制备精密称取原阿片碱对照品1.46 mg、去氢紫堇碱对照品2.09 mg、延胡索乙素对照品3.36 mg，置于1000 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，溶解，即得对照品溶液。

3.3 供试品溶液制备精密称取样品粉末0.5 g，加水25 mL，超声提取2次，30 min/次，过滤，合并滤液，定容至100 mL容量瓶中，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

3.4 线性关系考察取3种对照品溶液，按“3.1”项下色谱条件分别依次进样2.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、30.0 μL，测定峰面积。

以对照品进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程。

原阿片碱Y=1270.8X+0.004 3，r2=0.999 9，在0.002 92～0.043 8 μg范围内线性关系良好；去氢紫堇碱Y=2108.2X-1.847 2，r2=0.999 6，在0.004 18～0.062 7 μg范围内线性关系良好；延胡索乙素Y=906.56X-1.421 2，r2=0.999 6，在0.006 72～0.100 8 μg范围内线性关系良好。

3.5 精密度试验精密吸取同一供试品溶液，重复进样6次，结果原阿片碱峰面积RSD=2.71%，去氢紫堇碱峰面积RSD=1.70%，延胡索乙素峰面积RSD=2.70%，表明精密度良好。

3.6 重复性试验取同一批号样品，按“3.3”项下方法分别制备6份供试品溶液，原阿片碱、去氢紫堇碱和延胡索乙素平均含量分别为1.87、0.33、0.56 mg/g，RSD分别为2.19%、2.17%、2.18%，表明方法重复性良好。

3.7 稳定性试验取同一供试品溶液，在0、1、2、3、4、5、6、7、8 h进样测定，原阿片碱峰面积RSD=4.04%，去氢紫堇碱峰面积RSD=1.56%，延胡索乙素峰面积RSD=1.79%，表明供试品溶液在8 h内稳定。

3.8 加样回收率试验精密称取6份已知含量的样品各0.25 g，添加各对照品溶液适量，按样品含量测定项下方法操作，测得原阿片碱、去氢紫堇碱和延胡索乙素平均加样回收率分别为100.31%、99.34%、99.34%，RSD分别为1.60%、2.27%、2.70%，见表2。