分光光度法测定元胡止痛片中延胡索总生物碱的含量
目的 采用分光光度法测定元胡止痛片中延胡索总生物碱的含量，确定最佳
的提取及测定方法。方法 用溴甲酚绿与生物碱结合成有机络合物，以定量的有
机溶剂提取，用分光光度法在波长413 nm处测定。结果 平均回收率为100.9%，
RSD为0.53%。结论 本方法准确、可靠、重复性好，可作为元胡止痛片的质量
控制标准。
[Abstract] Objective Determine the content of total corydalis alkaloid by
spectrophotometry in Yuanhuzhitong tablet， Identify the optimal extraction and
determination. Methods Use bromocresol green combined with alkaloids into organic
complex，extraction with a certain amount of organic solvent, measured at a
wavelength of 413nm by spectrophotometry.Results Average recovery was 100.9%,
RSD 0.53%. Conclusion This method is accurate， reliable， reproducible and can be
used as quality control standards of Yuan hu zhi tong Tablet.
[Key words] Yuanhuzhitong tablet; Total Corydalis Alkaloid; Spectrophotometry
元胡止痛片由延胡索与白芷两味药材组成，主治由气滞血瘀引起的胃痛、胁
痛、头痛及痛经，效果确切。药理实验证明，延胡索中所含的生物碱类物质为主
要的镇痛成分。处方中所用延胡索多经过醋制，因为游离的生物碱较难溶于水，
经醋制后生成醋酸盐而易溶于水。本研究通过分光光度法测定元胡止痛片中总生
物碱含量可有效控制元胡止痛片生产投料，确保药品质量。
1仪器与试药
梅特勒-托利多XS-43；TU-1800SPC紫外可见光分光光度计，SBC-100超声
波处理器（济宁市超声波仪器厂），所用试剂均为分析纯。元胡止痛片（市售品）；
延胡索乙素（中国药品生物制品检定所，批号：110726-200610）。
2方法与结果
2.1供试品溶液制备
取本品20片，糖衣片除去糖衣，精密称定，研细，取约1 g，精密称定，
用石油醚（60～90℃）脱脂1 h。取药渣，挥干溶剂后，加1.5%盐酸溶液50 mL，
超声处理30 min，滤过，取滤液2 mL，置于分液漏斗中，加醋酸-醋酸钠缓冲液
（pH=5.2）20 mL，加溴甲酚绿显色剂2.0 mL，用氯仿15 mL萃取，待静置分层
后，分取氯仿层作为供试品溶液。
2.2阴性供试品溶液制备
精密称取白芷细粉0.5 g，按供试品溶液制备方法制得阴性供试品溶液。
2.3对照品溶液制备
精密称取延胡索乙素对照品适量，加1.5%盐酸溶液溶解，配制成每1毫升
含0.234 mg的溶液。
2.4线性关系考察
精密吸取对照品溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分别置于分液漏斗
中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH=5.2）20 mL，加溴甲酚绿显色剂2.0 mL，用三
氯甲烷15 mL萃取，待静置分层后，分取三氯甲烷层，以三氯甲烷为空白，于
413 nm测定吸光度。以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，
回归方程为A=2.612 9C+0.001 952（r=0.999 7），线性范围为0～0.234 mg。结果
在线性范围内的对照品浓度与吸收度呈良好线性关系。
2.5精密度试验
对同一供试品（批号：070801），按照供试品的提取方法操作，连续测定6
次，测得吸光度值为0.553、0.553、0.553、0.552、0.552、0.552，RSD为0.10%
（n=6），表明该方法精密度良好。
2.6重复性试验
取同一供试品5份，每份约1 g，分别进行测定，结果平均含量为17.37 mg/
片，RSD为0.13%（n=5）。
2.7稳定性试验
取供试品溶液，在室温下放置不同时间（h），分别在0、0.5、1.0、2.0、4.0、
6.0定吸光度，观察放置时间对吸光度的影响。测定结果（A）分别为0.241、0.241、
0.242、0.243、0.243、0.245，RSD为0.63%（n=6），说明萃取液在6 h内吸光度
基本无变化。
2.8准确度测定
采用加样回收法，取已知含量的供试品（批号：071002），分别加入一定量
对照品，按上述方法测定，结果平均回收率为100.96%，RSD为0.53%。
表1 回收率试验结果
取样量
（mg） 样品含量（mg） 加入量（mg） 测得总量
（mg） 回收率
（%） 平均回收率（%） RSD（%）
511.2 4.348 2 2.512 5 6.897 5 100.536 4 100.96
0.53
504.8 4.861 9 2.512 5 7.452 1 101.053 6
521.9 4.860 4 2.512 5 7.492 7 101.624 9
519.2 5.001 7 2.512 5 7.610 4 101.280 2
505.4 4.894 7 2.512 5 7.431 5 100.328 1
2.9样品测定
取不同批次样品，按上述方法进行测定，计算样品中延胡索乙素的含量，结
果见表2。
表2 样品含量测定结果（n=2）
批号 070901 060920 080201 070818 090101 080401
含量（mg/片） 11.74 6.96 20.61 13.02 12.64 7.31
3讨论
3.1提取方法的选择
取供试品及阴性供试品各1 g，分别以石油醚（60～90℃）与乙醚脱脂，弃
去石油醚，取药渣， 结果表明以石油醚（60～90℃）脱脂可以去除白芷对试验
的干扰。
3.2不同酸度的影响
采用不同浓度（0.5%、1%、1.5%、2%）的盐酸溶液提取，对提取结果进行
比较，结果1.5%盐酸溶液提取效果更好。
3.3提取时间考察
取同一批号供试品（批号：080304）5份，每份约1 g，精密称定，分别以
石油醚（60～90℃）脱脂1 h，弃去石油醚，取药渣，挥干溶剂， 分别精密加入
1.5%盐酸溶液50 mL，再分别超声处理（功率300 W，频率40 kHz）10、30、60、
90、120 min，结果以超声处理30 min生物碱已经能够提取完全。
3.4显色剂的选择
参考有关文献[1-3]，选用溴甲酚绿显色剂与甲基橙进行试验，结果表明溴甲
酚绿测得的结果更稳定，采用溴甲酚绿为显色剂。
3.5缓冲溶液酸度的考察
分别取pH为5.6、5.4、5.2、5.0、4.8、4.2的醋酸-醋酸钠缓冲溶液进行试验，
结果证明pH=5.2的缓冲液更利于溴甲酚绿与生物碱结合成有机络合物。
3.6测定波长的确定
精密吸取对照品溶液1 mL，阴性供试品溶液和供试品溶液各2 mL，置分液
漏斗中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH=5.2）20 mL和溴甲酚绿显色剂2 mL，用氯
仿15 mL萃取，待静置分层后，分取氯仿层，于255～550 nm之间进行波长扫
描，结果表明对照品溶液、供试品溶液在413 nm处吸收最强，而阴性供试品溶
液在此处无吸收，最终选定413 nm为检测波长。
采用本方法测定元胡止痛片中总生物碱含量，操作简便，精密度及回收试验
结果良好，阴性供试品对结果无干扰，且不同厂家生产的元胡止痛片中总生物碱
含量差异明显。因此，增加元胡止痛片中总生物碱含量测定方法可有效控制元胡
止痛片的生产投料。
[参考文献]
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