(19)中华人民共和国国家知识产权局
(12)发明专利申请
(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910366992.2
(22)申请日 2019.05.05
(71)申请人 昆明理工大学
地址 650093 云南省昆明市五华区学府路
253号
(72)发明人 邓先余　邓征宇　韩煜　张棋麟　
林连兵　
(51)Int.Cl.
C12N 7/00(2006.01)
C12R 1/92(2006.01)
(54)发明名称
一种高通量分离噬菌体的方法
(57)摘要
发明公开了一种高通量分离噬菌体的方法，
该方法通过根据实际需要选择宿主菌或从环境
中分离宿主菌，将宿主菌置于液体生长培养基中
富集培养至对数生长期，获得宿主菌富集液，然
后采用考马斯亮蓝法通过检测蛋白含量变化在
96孔板中分离噬菌体；实验证明本发明方法能够
高效的分离检测各种环境如污泥和污水中对应
宿主菌的噬菌体，分离效率高且能对噬菌体的裂
解效果做评估；本方法具有操作简便、快速及价
格低廉等优点，因此，该方法将加速从环境中分
离新的噬菌体的速度，为噬菌体的应用提供帮
助。

权利要求书1页 说明书4页 附图2页CN 110172451 A 2019.08.27
C N 110172451
A
权　利　要　求　书1/1页CN 110172451 A
1.一种高通量分离噬菌体的方法，其特征在于步骤如下：
（1）根据实际需要选择宿主菌或从环境中分离宿主菌，将宿主菌置于液体生长培养基中富集培养至对数生长期，获得宿主菌富集液；
（2）采用96孔板分离噬菌体
①从环境中取样作为待测样品，若是固体，按1g添加5～20mL无菌水的比例，将固体放置于无菌水中混匀，离心，取上清液待用；若是液体样品，则直接离心，吸取上清液待用，上清液为待测样品液；
②将96孔板高压灭菌后冷却至常温；
③以500～600μL/孔的量，在96孔板中加入宿主菌富集液；以200～400μL/孔的量，在96孔板中加入待测样品液，作为实验组；同时设置对照组，对照组中添加与待测样品液等量的无菌水，混匀后培养12～15h；
④按每孔吸取500～600μL的量，从实验组和对照组中吸取培养后液体，离心收集上清液，按考马斯亮蓝使用说明，将上清液、考马斯亮蓝和无菌水按比例混合均匀后，在595nm下测量OD值；
⑤吸取相比于对照组OD值上升0.1～1的实验组液体，离心收集上清液，上清液使用
0.22μm滤膜过滤，获得对应宿主菌的噬菌体液。

2.根据权利要求1所述的高通量分离噬菌体的方法，其特征在于：离心是在4℃、8000～9000g下处理5～10min。

3.根据权利要求1所述的高通量分离噬菌体的方法，其特征在于：噬菌体的宿主菌为志贺氏菌属、沙门氏菌属、大肠杆菌属、葡萄球菌属、链球菌属、巴氏杆菌属中的一种或多种细菌菌株。

2。