文章编号:1007-4287(2008)10-1244-03自然流产患者绒毛组织中肝素结合性表皮生长因子免疫组化分析李 巍1,岳 瑛2*,李 杰1,鲍俊兰1,丁丽秀1(1.吉林大学第四医院妇产科,吉林长春130011; 2.吉林大学第一医院妇产科)摘要:目的 研究肝素结合性表皮生长因子(HB E GF)在早孕人工流产(正常早孕)及早孕自然流产(早期流产)绒毛组织中的表达是否存在差异,并进一步探讨HB EGF在早期流产病因学中的作用。
方法 采用免疫组化链霉菌抗生物素 过氧化物酶(SP)连接法检测正常早孕妇女及早期流产患者绒毛组织中HB EGF的表达。
结果 正常早孕组与自然流产组绒毛组织内均有HB EGF表达,各组HB EGF均表达于绒毛组织滋养细胞细胞膜和细胞浆内。
灰度测定与对照组比较,自然流产组绒毛组织内HB EGF表达明显减弱(t=2.48,P=0.02)。
结论 绒毛组织产生的HB E GF 在正常早孕及自然流产患者绒毛的表达有明显差异,自然流产绒毛组织内HB EGF表达水平显著低于正常早孕,HB EGF在自然流产的发病及病理生理过程中有重要的作用,绒毛组织滋养细胞内HB E GF的减少有可能是发生自然流产的原因之一。
关键词:自然流产;肝素结合性表皮生长因子;免疫组化中图分类号:R714 21文献标识码:AAn imm uno histochemical analysis o f heparin binding growth factor in vilii of patients w ith spontaneous abortion LI Wei,YUE Yin g,LI Jie,et a l.(Depa rtment o f G ynecology an d Obstetrics,The Fourth Hospital o f Jilin Un iversit y,Chan gchun130011,China) Abstract:Objective To analyze the different expression of heparin binding epidermal growth factor(HB E GF)in chorionic villi of the i nduced abortion(normal pregnancy)and spontaneous abortion early pregnancy(early abortion),and to further discuss the role of HB E GF in the early abortion.Methods Immunohistochemistry streptavidin biotin peroxidase(SP)to detect HB EGF ex pression of villus tissue between normal pregnancy and early abortion with women.Results Both of normal pregnancy group and spontaneous aborti on group have HB EGF expression in chronic villi,HB EGF exp ress in villous trophoblastic cell membrane and the cytoplasm.Gray determination compared wi th the control group,HB EGF expression of villus tissue i n spontaneous abortion group was si gni ficantly decreased(t=2.48,P=0.02).Conclusion There is a significant di fference in HB EGF expression in chronic villi between the normal pregnancy group and spontaneous abortion group.The expression level of HB EGF in sp ontaneous abortion villus tissue was significantly lower than early pregnancy.The expressions of HB EGF play an important role in spontaneous abortion.The re duction of HB EGF in villous trophoblast cells organizations may be the one of the reasons of spontaneous abortion.Key words:spontaneous abortion;HB EGF;immunohistology(Chin J Lab Diagn,2008,12:1244)自然流产(spontaneous abortion)为妊娠于孕28周前自然终止者。
如在孕12周前自然终止者称早期流产,在孕13-27周自然终止者为晚期流产。
自然流产病因复杂,尚有些不确定因素。
本研究探讨HB E GF在自然流产中的表达,有助于进一步认识HB EGF在自然流产发病及病理生理学中的作用,从而为自然流产的预测与治疗提供理论依据。
1 材料与方法1.1 材料1.1.1 试剂 山羊抗人重组HB EGF多克隆抗体为美国R&D公司产品,购自上海吉泰科技有限公司;SP超敏试剂盒、0.01M PB S(pH=7.4)及DAB 显色试剂盒购自福州迈新生物科技开发有限公司。
1.1.2 仪器 湖北省医用电子仪器厂生产的包埋机;德国LeicaR M2135轮转切片机:德国Leica HI 1210捞片机;南京实验仪器厂DG 5恒温箱;日本OLYMP US CK2光学显微镜。
1.1.3 研究对象 选择2007年1月至2007年12月在吉林大学第一医院妇产科正常早孕及早期流产的绒毛共28例,平均年龄(28 3 4.87)岁,平均孕周(9 32.8)周。
早期流产组:19例,平均年龄(28 3 5.37)岁,平均孕周(10 8 2.5)周。
正常早孕组:9例,为正常早孕妇女因社会因素行人工流产1244Chi n J Lab Diagn,October,2008,Vol12,No.10术者,平均年龄(28 1 3.91)岁,平均孕周(8 2 1 7)周。
两组孕妇均排除心脏病、糖尿病、肾病、肝炎、严重贫血等内科合并症,无吸烟和长期服药史,近期无急慢性感染的。
1.2 方法1.2.1 免疫组织化学SP 法 严格按试验步骤操作。
1.2.2 结果判定标准 阳性染色显示细胞浆内及细胞膜有浅黄至棕黄色着色颗粒,且其着色强度高于背景非特异性染色。
并进行灰度测定,应用Image Pro plus 软件定量分析。
1.2.3 统计学分析 所得实验数据采用平均值 标准差( x s )表示,经Excel 软件分析工具包进行方差分析和t 检验。
2 结果2.1 正常早孕组与早期流产组绒毛组织滋养细胞中均可见HB EGF 表达。
早期流产组与正常早孕组表达强度差异显著(P <0.05),详见表1。
表1 正常早孕组与自然流产组绒毛组织滋养细胞中HB EGF 表达情况比较分组例数灰度测定值正常早孕组94823263.9 1503326.7早期流产组192338285.9 1165362.9两组比较,t =2.48,P =0.022.2 正常早孕组与早期流产组绒毛组织中HB EGF 的表达均位于绒毛滋养细胞中,其它种类细胞中未见HB E GF 表达。
HB EGF 表达阳性的细胞中,阳性颗粒均位于细胞浆及细胞膜中,细胞核未见HB EGF 表达。
图1-6。
图1 正常早孕,HB EGF 阳性图2 正常早孕,HB EGF 强阳性图3 自然流产,HB EGF 弱阳性(++),DAB,10!10(+++),DAB,10!40(+),DAB,10!10图4 自然流产,HB EGF 阳性 图5 正常早孕,灰度测定 图6 自然流产,灰度测定(++),DAB,10!403 讨论3.1 HB EGF 的结构特点及生理特性表皮生长因子家族(epidermal gro wth fac tor family)是一组与表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)结构及生物学功能相近的糖蛋白,它由表皮生长因子(EGF)、转化生长因子 (transforming growth factor ,TGF )、肝素结合性表皮生长因子(heparin binding EGF like growth factor,HB EGF)、两性调节蛋白(am phiregulin,AR)、 细胞调节素(betacellulin,B TC)等生基,通过与EGF 受体家族结合,并激活EGFR 后发挥生物学作用。
HB E GF 基因定位于第5号染色体,长度为14kb,含有6个外显子和5个内含子[1]。
等电点在7.2-7.8[2]。
其分子量为19-23kDa 。
HB EGF的前体蛋白(pro HB EGF)含208个氨基酸,为跨膜蛋白结构,包括6个结构域。
成熟的可溶型HB EGF(s HB EGF)为含86个氨基酸的糖基化蛋白质,由pro HB EGF 裂解而来,包括一个位于氨基端的肝素结合区和一个位于梭基端的EGF 样区。
前者富含精氨1245 中国实验诊断学 2008年10月 第12卷 第10期基酸具高度保守性;后者约35%的氨基酸与EGF同源,有一个含6个半肤氨酸的保守序列,相互间形成3个双硫键。
Pro HB EGF还包括信号肽、前肽、近膜区、跨膜区和胞浆区[3]。
3.2 绒毛组织HB EGF的表达在与生殖方面有关的研究证实HB EGF在人和动物子宫内膜细胞和胎盘组织上均有表达,调节甾体激素对子宫内膜上皮细胞和间质细胞的有丝分裂增殖作用,促进子宫内膜从增殖期向分泌期转化,并介导胚胎着床,促进胎盘形成和生长。
目前认为白血病抑制因子(LIF),HB EGF、白介素1 (IL 1 )和集落刺激因子 1(CSF 1)为着床期间必不可少的四种细胞因子,对胚泡着床有直接调节作用。
在子宫内膜、绒毛、蜕膜、胎盘和胚泡中已证实存在HB EGF及其受体,并以旁分泌、自分泌方式与受体结合后发挥其生物学作用。