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2. PCR-SSO分型法
序 列 特 异 性 寡 核 苷 酸 - 聚 合 酶 链 反 应 （ PCRsequence specific oligonucleotide, PCR-SSO）是以 PCR为基础，将凝胶上扩增的HLA基因DNA转移 至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、 地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之 进行杂交，从而对扩增产物作出HLA型别判断。
本法不能判断型别，只能说明供、受体HLA抗原配合程度
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（三）分子生物学分型法
分子生物学技术的迅速发展，使得HLA的 DNA分型技术应运而生，并在开展DNA限制性 片段长度多态性分析、DNA指纹图、等位基因特 异性寡核苷酸杂交等基础上，引入多聚酶链反应 技术，使HLA分型得以在更精密的水平上进行。
一、器官和组织移植的一般规律
1.移植器官或组织的抗原性异物属性
2.排斥移植物的记忆特性
3.负向免疫调节的必要性
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二、HLA是诱导排斥反应最强的靶抗原
主要组织相容性复合体（major histocompatibility complex,MHC）编码的人类白细胞抗原（human leukocyte antigen,HLA），是不同个体间进行器官或组织 细胞移植时发生排斥反应的主要成分，这种代表个体特异 性的同种抗原又称组织相容性抗原(histocompatibility)或 移植抗原(transplantation antigen)。
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HLA的遗传特征
HLA是人体多态性最丰富的基因系统。
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HLA分型要比ABO血型复杂的多，每个人不是从父母分别得到一个 基因，而是得到一串基因(HLA单倍型)。每人遗传到二串“冰糖葫芦 ，其上的“红果”(基因)以A、B、C、D、DR、DQ和DP为序。 A有28种红果(分别记为A1、、A2、A3、A9...)， B有61种(记为B5、B7、B8、B12...)， DR有24种(记为DR1、DR2、DR3、DR4...)等。 七彩红果共有164种编号，如不同遗传排列的红果随机组合，按理论推 算，“冰糖葫芦”有五亿多种变化，能组合33亿多种HLA分型。 理论推测的HLA分型数量巨大，但对一个具体的民族来说并非如此。
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1. RFLP与PCR-RFLP分型法
➢限制性片断长度多态性（restriction fragment length polymorphism, RFLP）分析：最早建立 的研究HLA多态性的DNA分型技术
➢PCR-RFLP 分 型 法 ： 对 DNA 片 段 进 行 体 外 扩 增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可 使限制性长度分析的敏感度大大增加
1．阴性分型法 根据选用的刺激细胞类型分为：
2．阳性分型法
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2. 双向MLC
遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养 时，由于两者HLA不同，能相互刺激导致对方淋巴 细胞增殖，故称双向MLC。在此试验中，各自的 淋巴细胞既是刺激细胞，又是反应细胞，反应后形 态上呈现的细胞转化和分裂现象，可通过形态法计 数转化细胞 。
异种动物间
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人的单卵双生子间的器官移植 同品系小鼠的皮片移植
人与人之间的肾移植 不同品系小鼠间的皮片移植
狗的器官移植给猩猩 猪的器官移植给狗
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第一节 器官移植与移植免疫的特点
移植手术后移植物能否存活取决于： 1.移植器官在移植过程中活力的保存； 2.手术时血管吻合和血液循环重建的质量； 3.移植排斥反应的控制。
MLC分为单向MLC和双向MLC
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1. 单向MLC
将已知HLA型别的分型细胞用丝裂霉素C或X线照射预处 理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能 力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养 时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用3H-TdR掺 入法测定细胞增殖强度，从而判断受检细胞的HLA型别。
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➢耗时长 ➢不同批号抗血清结果 常有不同
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用于HLA分型的微量细胞毒试验
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微量细胞毒试验判定标准
死（着染）细胞（%）
0～10 11～20 21～50 51～80
>80
记分
结果判断
1
阴性
2
可疑阴性
4
弱阳性
6
阳性
8
强阳性
0
未试验或不能读数
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（二）细胞学分型法
以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte culture, MLC）或称混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction, MLR）为基本技术的HLA分 型法。能用本法测定的抗原称为LD抗原 （lymphocyte defined antigen）,包括HLA-D、-DP。
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移植的类型
自体移植
根据移植物来源同分系类移植
同种异体移植 异种移植
原位移植
根据移植部位分类
异位移植
器官移植
移植物种类分类 支架组织移植
细胞移植
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移植种类和命名
移植名称
自体移植
供者、受者关系
同一个体
举例
自体皮片移植
同系或同基因移植 同种异基因移植 异种移植
同系或同基因 的个体间
同种不同基因 的个体间
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在三类HLA分子中，Ⅰ、Ⅱ类分子是触发移植排斥 反应的首要抗原，尤其是HLA-DR位点的抗原分子
HLA发挥双重作用： ➢介导宿主抗移植物反应(HVGR); ➢参与移植物抗宿主反应(GVHR)。
HLA的识别方式： ➢直接识别 ➢间接识别
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第二节 HLA配型与应用分析
一、HLA配型
第二十六章 移植免疫及其免疫检测
移植（transplantation）是指将健康细胞、组织 或器官从其原部位移植到自体或异体的一定部位、 用以替代或补偿机体所丧失的结构和（或）功能的 现代医疗手段。被移植的细胞、组织或器官称移植 物（graft），提供移植物的个体称为供体(donor)， 接受移植物的个体称为受体（recipient）。
HLA分型方法的改进和不断完善，使得HLA 复杂的多态性更加显现，亦推动了HLA与群体 及自然选择关系的研究，更促进了人们对疾病 本质的认识。
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（一）血清学分型法
应用一系列已知抗HLA的特异性标准分 型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体的 生物学作用介导细胞裂解的细胞毒试验。
➢操作简便易行 ➢节约试剂、结果可靠、重复性好 ➢无需特殊设备