第三章 酶的生物合成法生产
逆转录酶的作用下,生成DNA的过程。
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(一)RNA的生物合成--转录(transcription)
1.细胞内RNA的生物功能
(1) 在某些RNA病毒中,其所含的双链RNA作为遗传信息
的载体。
(2) 在蛋白质的生物合成过程中,tRNA作为氨基酸载体, 并由其上的反密码子识别mRNA分子上的密码子;
.
终
UAC AUG UAA 5’ 3’
25
26
蛋白质前体的加工
N端fMet或Met的切除 二硫键的形成 特定氨基酸的修饰 切除新生肽链中的非功能片段 肽链的折叠 亚基的聚合
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二、酶生物合成的调节
定义:通过调节酶合成的量来控制微生物
代谢速度的调节机制,是在基因转录水平上
进行的。
用下,生成与亲代相同的子代DNA或RNA的过程。
Transcription 转录:以DNA为模板,按照碱基配
对原则将其所含的遗传信息传给RNA,形成一条与DNA
链互补的RNA的过程。
Translation 翻译:以mRNA为模板,将mRNA的密码
解读成蛋白质的AA顺序的过程。
Reverse translation 逆转录:以RNA为模板,在
体生长的经济原则:不需要就不合成。
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色氨酸操纵子——酶的阻遏
结构基因 调节基因 操纵基因 调节基因
操纵基因
结构基因
mRNA 酶蛋白
辅阻遏物
阻遏蛋白不能与操纵基因结合, 结构基因表达
代谢产物与阻遏蛋白结 合,使之构象发生变化 与操纵基因结合,结构基 因不能表达 39
酶 的 诱 导 和 阻 遏 操 纵 子 模 型
R P O S DNA
C R P -cA M P 复 合 物
C R P + cA M P
cAMP-CRP复合物的作用示意图
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操纵基因(Operater gene):
位于启动基因和结构基因之间的一段碱 基顺序,能特异性地与调节基因产生的变构 蛋白结合,操纵酶合成的时机与速度。
结构基因(Structural gene):
导蛋白质的合成的过程.
翻译 mRNA 各种信息 蛋白质 各种蛋白质
(核苷酸排列顺序) (氨基酸排列顺序)
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蛋白质的合成过程
(大肠杆菌)
氨基酸的活化 肽链合成的起始 肽链的延伸 肽链合成的终止与释放 蛋白质前体的加工
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氨基酸的活化与转运
反应式:
AA
+ tRNA
+ ATP
氨酰-tRNA合成酶
有重要作用。
2.转录:
以DNA为模板,以核苷三磷酸为底物,在RNA聚合 酶(转录酶)的作用下,生成RNA分子的过程。
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转录模板
模板链(template strand) 反意义链(antisense strand)
启动子(promotor) 终止子(terminator)
3´ 5´
5´ 3´
DNA
编码链 (coding strand) 有意义链(sense strand)
起始因子
σ
全 酶 ( h o lo e n z y m e )
核 心 酶 ( core en zy m e)
β ' α β
σ
β ' α α β
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α
RNA合成过程
起始 双链DNA 局部解开 磷酸二酯 键形成
启动子(promotor)
RNA聚合酶
终止子 (terminator)
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离开
有义链 coding strand(编码链,正链):在
RNA的转录中,不作为模板的DNA链称为有义链。
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(2)转录所需酶:依赖DNA的RNA聚合酶又称为转 录酶,是以DNA为模板的一类RNA聚合酶。在原
核生物和真核生物中,转录酶有所不同。原核
生物的转录酶比较简单,由1种RNA聚合酶催化 所有RNA的生物合成。而在真核生物中RNA聚合 酶有3种,分别为RNA聚合酶Ⅰ、RNA聚合酶Ⅱ和 RNA聚合酶Ⅲ,它们都属于寡聚酶,酶的亚基数
(1)30 S亚基与起始因子IF3 结合; (2)30 S亚基与mRNA结合,形成30 S-IF3-mRNA复合物;
(3)fMet- tRNAF 与起始因子IF2以及GTP结合,生成 fMet- tRNAF -IF2-GTP;
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(4)在起始因子IF1的参与下,fMet- tRNAF-IF2-GTP
Amylase from Bacillus Protease from Bacillus Phosphatase from Bacillus Glucoamylase from Aspergillus …… Plant cell culture Animal cell culture
Few example
氨酰-tRNA+AMP+PPi
对于E.coli而言,肽链合成时的第一 个氨基酸都是甲酰甲硫氨酸(fMet)。
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在核糖体上合成多肽(三阶段)
1、起始阶段 2、延伸阶段 3、终止阶段
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肽链合成的起始阶段
原核生物肽链合成的起始阶段是在GTP和起始因子
(Initiation Factor)的参与下,核糖体30 S亚基,fMettRNAF ,mRNA和50 S 亚基结合,组成起始复合物的过 程。主要包括5个步骤:
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A、乳糖操纵子的结构
诱 导 作 用
调节 基因 R
启 动 操纵 子 基因
P O LacZ
乳糖结构基因
LacY Laca
mRNA
基
阻遏蛋白 (有活性)
因
关
闭
B、乳糖酶的诱导
调节 基因
R mRNA
启 动 操纵 子 基因 P O
乳糖结构基因 LacZ LacY Laca
mRNAZ 乳糖 阻遏蛋白 (无活性) 阻遏蛋白 (有活性)
意义:通过阻止酶的过量合成,节约生物
合成的原料和能量。
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(一)基因调控理论
Jacob and Monod的操纵子学说(operon theory)
操纵子——基因表达的协同单位
结构基因(编码蛋白质, structural gene, S)
操纵子
控制部位
操纵基因(operator gene, O)
启动子(promotor gene, P)
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IF3
mRNA
IF3
AUG ACA 5’ 3’
小亚基
蛋氨酰tRNA
给位 受位
+GTP+IF2
蛋
大亚基
UAC AUG ACA 5’ 3’GDP+Pi
蛋
IF1
UAC AUG ACA 5’ 3’
肽链合成的起始阶段
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肽链合成的延伸阶段
1.进位:氨基酰-tRNA进入受位; 2.转肽:形成肽键,在转肽酶作用下,给位与
延长阶段 3 5 解链区到达 基因终点 5 终止阶段 5 RNA 3 5
3
3
RNA链的延伸图解
模板链(反义链) 有义链 复链 解链
3´
RNA-DNA杂交螺旋
新生RNA 聚合酶的移动方向 5´
延长部位
(二)蛋白质的生物合成--翻译(translation)
翻译: 以RNA中mRNA为模板,按照其 核苷酸顺序所组成的密码指
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(三)酶合成的调节机制 1. 酶合成的诱导
加进某种物质,使酶生物合成开始或加速进 行。 酶合成诱导的现象:
已知分解利用乳糖的酶有: -半乳糖苷酶; -半乳糖苷透过酶;硫代半乳糖苷转乙酰 酶。
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实验:(1)大肠杆菌生长在葡萄糖培养基 上时,细胞内无上述三种酶合成; (2)大肠杆菌生长在乳糖培养基上 时,细胞内有上述三种酶合成; (3)表明菌体生物合成的经济原则: 需要时才合成。
与30 S-IF3-mRNA结合生成30 S起始复合物。在此
30 S起始复合物中,fMet- tRNAF上的反密码子正好 与mRNA上的起始密码子AUG结合;
(5)50 S亚基与上述30 S起始复合物结合,形成完整的
70 S核糖体。同时放出IF1,IF2,IF3 ,并使GTP水 解生成GDP和Pi。在此70 S核糖体形成时,fMettRNAF 位于70 S核糖体的“P”位(肽酰基位),而 它的“A”位(氨酰基位)是空位。
反意义链:指导转录作用的一条DNA链 有意义链:无转录功能的一条DNA链.
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转录过程的特点
(1)转录的不对称性:在RNA的合成中,DNA的二 条链中仅有一条链可作为转录的模板,称为转录
的不对称性。
反义链 antisense strand(无意义链,负链): 在RNA的转录中,用作模板的DNA链称为反义链。
受位结合;
3.移位:核蛋白体向3’端移动一个密码子的
位置,空出受位,不断地进位、转肽、 移位,使肽链延长。
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苏 蛋
UGU UAC AUG ACA 5’ 3’ GTP GDP+Pi UAC UGU AUG ACA GUU 3’ 5’
蛋 苏
起始复合体
进位
蛋 苏
UGU AUG ACA GUU 5’ 3’ GDP+Pi
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启动基因(promotor gene)(启动子):
有两个位点: (1)RNA聚合酶的结合位点 (2)cAMP-CAP的结合位点。 CAP:分解代谢产物基因活化蛋白(catabolite gene activator protein),又称环腺苷酸受体蛋白(cAMP receptor protein,CRP)。 只有cAMP-CRP复合物结合到启动子的位点上,RNA 聚合酶才能结合到其在启动子的位点上,酶的合成才 能开始。