四、操作技术
无黏合剂
分类
自制薄
含黏合剂
层板
10%～15%煅石膏
0.2%～0.5%羧甲基纤维 素钠水溶液
1．薄层 板制备
市售薄 层板
操作方法
普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基) 分类 高效薄层板（固定相粒径为5~7 u）m
操作方法
临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活 化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁
纸色谱上行展开
4．斑点定位
纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱法不能使用腐 蚀性显色剂，也不能在高温下显色。
运用纸色谱进行药物的鉴别、检查和含量测定的方法、要求与薄层色 谱法一致
二、薄层色谱参数
1．比移值 (1）定义 组分迁移的距离与展开 剂迁移的距离之比
(2)计算方法
原点到斑点中心的距离 R f 原点到溶剂前沿的距离
R f（A）
lA l0
R
f（B）
lB l0
2．相对比移值
(1）定义 指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比
(2）计算方法
Rr

R f (i) R f (s)
第3节 薄层色谱分离检测技术
薄层色谱法(thin layer chromatography，TLC) 将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上
形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法 可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等
一、分离原理
薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的 起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法中 又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同 组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢 ，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点
钾试液
多数有机化 合物
多数有机化 合物
醛等还原性 物质
氨基酸类
含酚羟基化 合物
喷雾加热 多数加热后呈 黑色
薰蒸
多数显黄棕色
喷雾烘干 蓝色
喷雾或浸 紫色或黄色 渍
喷雾或浸 红褐色或棕红
渍色喷雾瓶来自5．显色装置浸渍槽
蒸气熏蒸 ----双槽展开缸
紫外分析仪(三用)
6．检 视装置 摄像设备
薄层色谱扫描仪(CS9301型）
点样量---- ＜5
ul
3. 展开
（1）展开要求 查阅 A.何为边缘效应?何因？如何防止?
B.展开剂加入量?展开剂展开距离？
（2）展开方式
上行 近水平 双向 多次
上行展开
近水平展开
有色物质斑点----目光检视
4．检视
荧光检出法
五、检测技术
无色物质斑点 化学检出法
检测灵敏度
1．系统适用性试验 比移值
1．吸附剂
三、仪器与材料
粒径 5~40 m
硅胶
硅胶H 硅胶G 硅胶GF254 硅胶HF254
氧化铝 常用
硅藻土 聚酰胺 微晶纤维素
想一想 H、G、F各代表何种意思？试解释硅胶HF365？
2． 载 板
种类
玻璃板 塑料膜
厚度 2mm
规格
5cm×20cm 10cm×10cm 10cm×15cm
10cm×20cm
li ls
/ l0 / l0
li ls
(3）特点
消除系统误差， 值的重复性和可靠性都比 好
Rr
Rf
3．分离度
（1)定义 衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是 指相邻两斑点中心至原点的距离之差与 两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑 点沿着展开方向的宽度）的比值
(2）计算方法
R l2 l1 2(l2 l1 ) (W1 W2 ) / 2 W1 W2
操作方法
将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠 水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去 除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀， 或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上 平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为 0.2mm～0.3 mm)，取涂好的薄层板，置 水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30 分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用 。
二、仪器与材料 1．色谱滤纸
想一想:色谱滤纸如何选择?
2．展开剂
（1）纸色谱一般固定相是什么? （2）纸色谱展开剂如何选择?
3．展开容器 圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖且能密闭
下行纸色谱展开缸
三、操作技术
1．色谱滤纸的准备
（1）用于下行法的色谱滤纸 （2）用于上行法的色谱滤纸
2．点样 样品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用定量
毛细管或微量注射器吸取溶液，点于点样基线上，溶液宜分 次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或经温热气 流吹干，点样直径为2 mm～4mm，点样量取决于色谱滤纸的 薄厚程度和显色剂的灵敏度，一般几到几十微克。点间距离 约为1.5cm～2.0cm，样点通常为圆形，也可点成条形。
3．展开
纸色谱下行展开
金属箔
要求 表面光滑、平整清洁
玻板处理措施 清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用 蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用
定量毛细管
手动
3．点样器
平口微量注射器
全自动点样仪
3．展 开容器
平底色谱专用展开缸
双槽薄层色谱专用展开缸
4．显色剂
显色剂
适用范围
显色方法 斑点颜色
浓硫酸乙醇溶液 碘 磷钼酸乙醇溶液 茚三酮试液 三氯化铁-铁氰化
手动涂布器
2．点样
普通板 点样基线----距底边2.0cm 圆点状---- R≤3mm 条带状-----宽度5～10mm 点或条带间距----＜8mm
点样量---- ＜10
ul
高效板 点样基线----距底边0.8~1cm 圆点状---- R≤2mm 条带状-----宽度4～8mm 点或条带间距----＜5mm
分离效能
2． 鉴 别
等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽
等体积混合法----斑点单一、紧密 结构相似对比法-----Rf不同或两斑点
杂质对照品法 3．杂质检查 样品溶液的自身稀释对照法
二者合用法
4．定量方法
（1）目视比色法 -----半定量法（精度±10%） （2）斑点洗脱法
（3）薄层扫描法(正在减小使用)
第4节 纸色谱分离技术
一、分离原理(液-液萃取 ) 利用样品中不同组分在两相溶剂中溶解性（或分配系数）不
同，当流动相携带样品流经固定相（被吸附或固定在惰性材料 上的液体）时，各组分在两相间不断进行溶解、萃取、再溶解 、再萃取，……，样品经过多次反复分配后，造成分配系数稍 有差异的组分移行的距离不同面实现分离 .