吖啶酯化学发光系统
CH3
CH3
CH3
N+
N
N
吖
OH-
H2O2
H+
+ H2O
啶
C=O
HO C=O
HOO C=O
酯
O
O
O
化
学
发
R
R
R
光
系 统
CH3
CH3
OH
N
N
光子 + CO2 +
+
O
O C=O
R
O
碱性磷酸酶化学发光系统
金钢烷（发光底物）及其衍生物的增敏化学发光系统
O
O OCH3
AP
O
O OCH3
OPO32-
免疫学检测
免疫学检测是应用免疫学理论设计的一系列测定 抗原、抗体、免疫细胞及其分泌的细胞因子的实 验手段及分子生物学技术在免疫学研究中的应用 。它包括：
抗原抗体的检测技术 免疫细胞的检测 细胞因子的检测 免疫相关基因分析 免疫标记技术 免疫PCR(IM-PCR)技术 杂交瘤技术与T细胞克隆技术
直接化学发光
直接化学发光：以化学 物质,如异鲁米诺、吖啶 酯等直接标记抗原或抗 体，免疫反应后，直接 引发化学发光反应进行 检测。
产品： 吖啶酯标记 : 西门子Siemens Centaur XP CP 雅培Abbott Architect i2000 异鲁米诺标记 ：索林DiaSoin Liaison 新产业
免疫分析
免疫反应：
抗原进入机体，刺激机体的免疫系统，使 之产生免疫应答，这种反应叫免疫反应。免 疫反应应答包括对抗原物质的感应、反应、 效应三个连续的阶段。
免疫分析（immunoassay，IA）：
在临床检验中，基于抗原与其配对抗体能 够发生特异反应，用已知的抗原或抗体检测 分析体液中的抗体或抗原性物质。
发光底物 （或发光剂）
仪器检测
反应0-5分钟
鲁米诺化学发光系统
鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统 O
H2O2+
NH HRPNHΒιβλιοθήκη OH-N2NH2 O
增强剂（Enhancer）
CO2+Photon (425nm)
CO2NH2
OH
N
R
B
R
OH
OH
OH
R
S
鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物
美国临床化学会议规定：凡是通过测量光子计数的方法都是化学发光，包括通过 酶促luminol发光。
化学发光免疫分析1980’s进入体外诊断领域，第一台全自动检测仪1993年诞生。
发光免疫分析基本操作步骤(一步 法)
待测样品
标记抗体或抗原
包被抗体或抗原的磁珠或反应管 反应15-60分钟
洗涤去除未结合的反应物
直接标记：吖叮酯标记 间接标记：碱性磷酸酶-金刚烷系统 电化学发光：三联砒啶钌
国际主流免疫诊断公司均采用第二代化学发光标记物： 吖啶酯（雅培、西门子）、碱性磷酸酶-金刚烷（贝克曼、西门子）、三 联砒啶钌（罗氏）。
化学发光的检测方式
化学发光按检测方式分为： 随机处理模式：管式化学发光（磁微粒分离） 批处理模式： 板式化学发光（物理吸附）
1977年诺贝尔生理学或医学奖得主雅洛
Yalow
雅洛1921年出生于纽约， 1945年获得核物理学博士学位 ，1975年当选美国科学院院士
。因为发明了放射性免疫分析 法，雅洛获得1976年的拉斯克
基础医学奖，成为历史上第一 位获得该奖的女性科学家。次 年，她因为与同事合作开发了“
针对多肽类激素的放射性免疫 分析法”而成为诺贝尔生理学或
板式化学发光
适合流行病调查、疾病预防与控 制、体检中心，以及医院血站等 大样本检测项目的使用（比如HIV 、TP、HCV和乙肝两对半等）。
通常采用96孔白色不透明微孔板进 行包被，不方便随到随测和医院急 诊；
对于定量检国测内需厂要家做主标要准是曲板线式。化学发光系统
管式化学发光
采用管式或微粒子发光，测定快速、准 确；
电化学发光
电化学发光：一种在电极 表面由电化学引发的特异 性化学发光反应，直接由 三联吡啶钌 [Ru(bpy)3]2+ 标记抗体，反应时标记物 直接发光。
产品： Roche：Elecsys2010、COBAS e411、COBAS e601
化学发光的发展史
第一代：鲁米诺及其衍生物 第二代：
碱性磷酸酶及其衍生物的化 学发光系统
O-
O
OCH3 O
*
+
光子(477nm)
O-
化学发光的检测类型
化学发光按化学反应类型分为： 直接化学发光（非酶促化学发光）
吖啶酯系统 异鲁米诺系统 间接化学发光（酶促化学发光） 辣根过氧化物酶—鲁米诺系统（HRP系统） 碱性磷酸酶—金刚烷系统（AP系统） 其它 电化学发光
医学奖史上第二位女性获奖者 。
免疫分析标记技术的发展
放免
60年代
酶免
70年代
发光
90年代
化学发光
化学发光：由于化学反应（通常是氧化）底物从基态跃迁为激 发态，激发态返回基态时，跃迁能量以光子形式释放的现象。
吸收光谱
物质激发态
吸
放
能
能
物质基态 光谱产生过程基本原理
发射光谱
化学发光免疫分析技术
化学发光免疫分析技术是将化学发光体系与免疫反应相结合，用于检测微量抗原 或抗体的一种新型标记免疫测定技术。
抗原抗体免疫反应特点
高特异性
抗原抗体的结合实质上只发生在抗原的抗原决定簇与抗 体的抗原结合位点之间。由于两者在化学结构和空间构型 上呈互补关系，所以抗原抗体反应具有高度的特异性。抗 原抗体反应的高特异性是免疫学检测的基础。
高亲和性
抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态 平衡，其反应式为：Ag+Ab→Ag·Ab。高亲和力抗体的抗原 结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合，两者结合 牢固，不易解离。
可以随到随测，适用于医院急诊； 定量检测的标准曲线存储在试剂条形码
中，可在2-4周内直接使用。
国外厂家全部是管式化学发光系统
磁微粒分离技术
磁微粒示意 磁微图粒分离技术特点： 较微孔板扩大抗原抗体结合表
间接化学发光
以碱性磷酸酶系统为例
间接化学发光：用参与发 光反应的酶来标记抗原或 抗体，免疫反应后，加入 发光底物，测定发光体系 的发光强度来进行抗原或 抗体的检测。
两大反应体系：
辣根过氧化物酶（HRP）系统：氧化还原反应，稳定性差 源德、科美、安图
碱性磷酸酶（AP）系统：水解反应，灵敏度较高 贝克曼：Access 1、Access 2，DXI600、DXI800 西门子：Immulite1000 , Immulite 2000 达成生物：AULIN200