1、与本课题有关的，前期研究工作积累和已取得的研究工作成绩
已于2008年1-3月进行了与本研究课题相关的准备工作，包括文献检索等。
2、已具备的实验条件，尚缺少的实验条件和拟解决的途径
宁夏医学院附属医院病源充足，消化内科、肝胆外科、肿瘤内外科等可以提供足够的研究病例，中心实验室和病理科能够提供相应的实验条件。
[6]Sedivy R,Peters K,Kloppel G. Osteopontin expression in ductal adenocarcinomas and undifferentiated carcinomas of the pancreas.Virchows Arch. 2005;446(1):41-5.
[4]Angelucci A，Festuccia C，Gravina GL，et al.osteopontin enhances the cell proliferation induced by the epidermal growth factor in human Prostate cancer cells [J] Prostate，2004，59(2):157
（可续页）
二、研究方案
1、研究目标、研究内容和拟解决的关键问题
（1）研究目标
1．检测胰腺癌中骨桥蛋白的表达及分布情况。
2.分析胰腺癌组织中OPN表达阳性率与肿瘤临床病理特征之间的关系。
3.初步探讨OPN在胰腺癌侵袭转移中的作用及其在胰腺癌预后预测中的价值。
（2）研究内容和拟解决的关键问题
1.采用免疫组织化学SABC法检测实验组及对照组胰腺组织中OPN的阳性表达情况。
2.分析OPN与患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、有无胰腺外器官转移、分化程度（高中低）等指标之间的关系。
3.根据研究结果讨论骨桥蛋白在胰腺癌侵袭转移中的作用及其在胰腺癌预后预测中的价值。
2、拟采取的研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析
（1）研究方法
本课题系病例对照的回顾性研究
(2)技术路线
一、立论依据
（包括研究意义、国内外研究现状分析，并附主要参考文献及出处）
对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述本课题的科学意义；
对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述其应用情景。
1研究意义：
流行病学调查显示近年来国内外胰腺癌的发病率均呈上升趋势，胰腺癌作为恶性度极高的消化系统肿瘤，其5年生存率低于5%，预后差的原因主要与肿瘤的浸润性生长和早期转移有关。胰腺癌的治疗手段主要依靠手术切除，而目前胰腺癌手术中对于患者的预后判断尚无明确的参考指标，而且缺乏有效的胰腺癌转移标志物。这对临床上制定个体化治疗方案，准确判断预后造成了困难。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种具有多种功能的分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，存在于人的尿液、血液中以及胃肠道、胰腺、肺等组织中，它是一种与肿瘤细胞的转化、浸润和转移有关的蛋白质。目前研究认为，OPN与胰腺癌的发生、发展、浸润、转移有关，其表达是影响胰腺癌预后有意义的风险因素。本研究拟采用免疫组化SABC法检测骨桥蛋白(OPN)在胰腺癌组织中的表达及分布状况，分析其与胰腺癌临床病理特征及预后的关系，一方面，探讨其与胰腺癌临床病理特征的关系，能更全面地反映胰腺癌侵袭性的恶性生物学特性，为寻找胰腺癌转移标志物及新的抗肿瘤药物提供资料与线索。另一方面，如能证实骨桥蛋白在胰腺癌组织中的表达增强，且OPN呈阳性表达的胰腺癌预后较差，其检测结果可作为判断胰腺癌预后的预侧因子，则可为临床评价预后提供一个有效的参考指标，对临床治疗方法的选择和科学合理利用社会医疗卫生资源有重要意义。
收集制备标本—→免疫组织化学SABC法—→判定OPN表达结果—→统计分析
(3)实验方案
收集胰腺癌手术切除标本30－50例左右，对照组标本20例左右，采用免疫组织化学SABC法检测胰腺癌组织与非癌组织中OPN表达及分布（具体根据试剂盒说明步骤进行）。记录入组患者的年龄、性别、肿瘤大小、有无淋巴结转移、有无胰腺外器官转移、分化程度（高中低）。采用统计学方法对结果进行分析。实验中1）实验组标本的入组标准为所有病例均需经病理诊断证实。所有病例术前均未行肿瘤的放射及化学治疗。对照组标本为正常胰腺组织或癌旁5cm以上的胰腺组织。2）OPN表达结果判定标准：细胞膜及细胞浆中见清晰棕黄色颗粒者为OPN阳性表达细胞。每例切片选5个高倍视野,按阳性细胞数占同类细胞的百分比,将免疫组化结果分为:阴性(-),<5%;弱阳性(+),5%~25%;中度阳性(++),25%~50%;强阳性(+++~++++),>50%。3）统计学处理方法：所有数据可经SPSS13.0进行统计学处理,计数资料的比较用χ2检验,组间比较采用独立样本t检验，采用Spearman等级相关分析分析胰腺癌组织中OPN表达阳性率与肿瘤临床病理特征之间的关系。用COX比例风险模型分析OPN与胰腺癌预后的关系。P< 0. 05为差异有统计学意义。
五、附查新报告（医学院图书馆）
2.3OPN在胰腺癌侵袭转移中的作用及其在胰腺癌预后预测中的价值。
Coppola等[2]通过研究OPN在多种肿瘤类型以及在不同阶段的肿瘤病理分型的不同表达程度，说明OPN在肿瘤的侵袭与转移中起到一定作用。Angelucci等报道[4]当OPN的RGD序列被其受体整合素αvβ3识别或与CD44突变体结合后,能增加肿瘤细胞的黏附和癌细胞的迁移能力。OPN诱导的信号通路活化以及与生长因子受体通路相互作用,激活了与肿瘤转移相关基因的表达,导致肿瘤的侵袭转移。Denhardt等[5]认为,无论是肿瘤细胞还是基质细胞,它们产生的OPN都能提高肿瘤细胞的转移能力,无论是细胞、动物实验还是临床实体肿瘤研究,均发现OPN与肿瘤转移的关系十分密切。国内研究表明[8]，OPN可能通过激活NF一KB信号转导通路，使转移相关分子的转录活性增强，从而引起这些分子表
达的增多，导致癌细胞的侵袭、转移。对于OPN参与的信号通路及其参与的调节因子等诸多细节仍不十分清楚。目前国内外的研究均表明OPN与肝癌、胃癌的侵袭转移有关。Rudland PS等[7]用免疫组化检测了乳腺癌患者的组织片行回顾性分析发现OPN表达与患者预后差异显著相关(P<0.0001)。近年国外学者[1][3]开始关注OPN在胰腺癌发生发展中的作用，提出OPN与胰腺癌的侵袭转移以及预后关系密切。国内俞广进[9]、王维新[10]等对于胰腺癌的研究结果与其一致。
Pt 1):184-90.
[3]KoopermannJ,Fedarko,NS,Jain A.et al.Evaluation of osteopontin as biomarker forpancreatic adenocarcinoma.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2004 ;13(3):487-91
3主要参考文献及出处：
[1] Weber GF. The metastasis gene osteopontin: a candidate target for cancertherapy. Biochimica te Biophysica Acta, 2001,1552:61-85
[2] Coppola D,Szabo M,Boulware D,et al.Correlation of osteopontin protein expression and pathoogical stage across a wide variety of tumor histologies. Clin Cancer Res. 2004;10(1
2009年2月-----2009年3月整理实验结果，进行数据的统计学处理及论文撰写等工作。
5、预期研究成果
5.1证实OPN与胰腺癌侵袭转移密切相关，胰腺癌预后预测中的有效参考指标之一。
5.2初步探讨胰腺癌组织中OPN表达阳性率与肿瘤临床病理特征之间的关系。
5.3在相关学术刊物上发表论文1-2篇。
三、研究基础
尚缺少实验所用相关试剂，可与试剂公司联系订购。
3、近期已发表与本课题有关的主要论著目录
*论文：作者·题目·刊名·年份·卷（期）·页码
专著：作者·书名·出版者·年份
四、经费预算
支出科目
金额
（万元）
计算根据及理由
1.合计
OPN多克隆抗体
1680元/1ml
SABC（兔IgG）
490元/1盒
注:预算支出科目按下列顺序填写：1.科研业务费2.实验材料费3.仪器设备费4.协作费5.研究组织实施费
[5]Denhardt DT,Mistretta D,Chambers AF,et al.Transcriptional regulation of osteopontin and the metastatic phenotype: evidence for a Rasactivated enhancer in the human OPN promoter〔J〕.Clin Exp Metastasis,2003,20(1):77.
(4)可行性分析
国外文献已有相关报导，为本课题提供了理论依据。附属医院病源充足，消化内科、肝胆外科、肿瘤
内外科等可以提供足够的研究病例，中心实验室和病理科能够提供相应的试验条件。
3、本课题的创新之处
国外关于骨桥蛋白的研究报道较多，目前国内对于骨桥蛋白的研究主要集中于乳腺癌、肝癌、胃癌等方面，胰腺癌相关报道较少。本课题不仅检测胰腺癌中骨桥蛋白的表达及分布情况而且进一步分析了
[7] Rudland P S, Platt-higgins A, El-tanani M, et al. Prognostic significance of the metastasis associated protein osteopontin in human breast cancer〔J〕.Cancer Res,2002,62(12):3417