硫代葡萄糖苷的检测
1 硫代葡萄糖苷的简介
硫代葡萄糖苷 ( 以下简称硫苷）是主要分布于十字花科和刺山柑植物中的含硫次生代谢产物。

由β- D- 硫葡萄糖基、硫化肟基团和来源于氨基酸的可变侧链 R 组成。

其生物合成途径分为三部分：前体氨基酸侧链延伸、核心结构形成及次级侧链的修饰。

硫苷以稳定化合物的形式分布于植物营养器官和生殖器官中，当植物组织受到破坏时，分布于细胞质的黑芥子酶将液泡中的硫苷分解成腈、异硫氰酸酯、硫氰酸酯、恶唑烷酮等多种降解产物，反应产物因硫苷种类、金属离子、pH 值等而不同，其过程十分复杂。

2 硫苷生理功能
2.1增强植物抗逆性
硫苷及其降解产物具有抵御草食动物、抗病虫及抗病原微生物能力，在植物的防卫反应中发挥重要的作用。

硫苷降解产物烯丙基异硫氰酸酯、2- 苯乙基异硫氰酸酯、n- 丁基异硫氰酸酯及 1-氰基 - 2- 苯乙烷对芸苔属专食性昆虫卵具有致死作用。

其中 2- 苯乙基异硫氰酸酯致死剂量最低，烯丙基异硫氰酸酯、n- 丁基异硫氰酸酯次之，1- 氰基- 2- 苯乙烷最高。

较适应寄主植物中异硫氰酸酯含量比适应寄主植物高，因而可推测硫苷组成及浓度对专食性昆虫有影响。

异硫氰酸酯对土传病虫害防治效果因其含量、病虫对其敏感性，在土壤中的释放速率及残留时间等而不同。

当植株中 2- 苯乙基硫苷含量增加时，蚜虫数量减少，植株抗虫性增强。

2.2诱虫作用
硫苷是黄曲条跳甲进行寄主选择的主要因素，同一蔬菜品种中硫苷含量与其选择性呈显著相关。

除此之外，硫苷还能刺激小菜蛾产卵，其产卵量与硫苷含量变化趋势基本相符。

因而，硫苷具有诱虫作用。

2.3致甲状腺肿大
硫苷是菜籽饼中最主要的抗营养因子，其降解产物异硫酸氰盐及恶唑烷酮能够引起畜禽甲状腺肿大，并且甲状腺受损存在种间差异。

2.4抗癌
吲哚族硫苷降解产物对 S180 小鼠具有抗肿瘤作用。

葡萄糖莱菔子苷（硫苷中一种）降解产物萝卜硫素是蔬菜抗癌效果最好的植物活性物质，诱导人或动物体内 Phase酶II (如谷光苷肽 - S- 转移酶、苯醌还原酶和UDP- 葡萄糖醛酸转移酶)数量的增加，抑制 Pha-seI 酶的产生，从而阻断致癌物产生的代谢途径，抑制癌细胞分裂和生长。

3 检测方法：
原子吸收法
本法可测定umol/g量的硫代荀萄糖普。

重量法、容量法、侧葡萄糖法、氯化肥法气相色谱法和液相色谱法.这些方法有的操作繁复，费时，所需样品量大，再现性差，
有的需要昂贵的酶试剂，而各种方法的结果又难以比较，正如Uppstrom[”在1985年国际油菜分析化学讨论会上指出的有关硫普总量的测定，需要解决的问题很多.将欲测的有机物直接(或将其转化为某种化合物后)与金属离子反应，再用原子吸收法测定反应产物中(或未反应的)过量金属离子，即可求得有机物的含量.这种方法既可扩大原子吸收法的应用范围，又可解决一些有机分析方法要用纯有机化合物做标准的困难.本文用这种方法测定了油菜籽中硫代葡萄搪普(以下简称硫普).硫普分子虽然复杂，但经酶解后，均能无例外地定量产生等摩尔的H2SO4，而测定so4-目前一般被认为是较可靠的方法，因此若用巳知量的钡离子溶液与其反应，然后用原子吸收法测量过量的钡离子，即可间接求得硫普的含量。

实验部分：
1仪器与试剂
zeeman原子吸收分光光度计，离心机，超级恒温槽.0.01000mol/L钡标准溶液:称取l.9734gBaCo:溶于20mL2mol/L的HCI中，用水稀释至IL，用时再稀释为1.00mmol/L.0.0l000mol/LSO三一标准溶液:称取1.4204gNa:50。

溶于少量水中，再稀释成1L,用时再稀释成1.00mmo1/L.油菜籽:江苏省农科院经作所提供.
2工作条件
用单纯型方法选定的最佳测定条件如下.波长:553.6nm，狭缝:1.3nm，灯电流:20mA，燃烧器高度7mm，乙炔流量2.5L/min.
3分析步骤
将一定体积含so4近中性试样溶液，移入已校正过的l0mL离心管中，加入2.00mLI.00mmol/L的Ba离子标准溶液，沸水浴5min，取出冷至室温，用水稀释至4.OmL，摇匀，在3500rPm.下离心lmin，用原子吸收法测定溶液中过量的Ba离子.
4样品分析
4.1工作曲线
往预先校正过的10mL离心试管中，分别加入1.00mol/L的so42-标准溶液。

0.00、0.40、0.80、1.20、l.60mL，再分别加入2.00mL的l.00mmol/L的Ba离子标准溶液，摇匀、沸水浴5min，取出冷至室温。

用水稀释至4.00mL，摇匀，在3500rPm下离心lmin.用原子吸收法测定溶液中过量的Ba离子.
5结果和讨论
5.1酸度试验结果表明，pH值为4一8时对测定无影响，故试样的测定酸度为pH5、7。

5.2加.热时间为改善BaSO4的沉淀晶形，.沉淀后，沸水浴加热5、60min，对结果无影响，故加热时间定为5、l0min.
5.3离心时间与速度为使BaSO4。

快速沉降，用不同的离心速度和时间进行试验，当转速为3500rPm时，离心lmin即可得到满意的结果.由此可说明，在所述条件下，可不用分离BaSO4。

，也能得到满意的结果。

甲醇回流提取法
原理：采用甲醇法提取西兰花中硫代葡萄糖苷, 利用重量法测定其中硫代葡萄糖苷的含量, 得出硫代葡萄糖苷最佳提取条件。

1 材料与设备
1.1 主要实验材料
新鲜西兰花（市售）、定量滤纸（中速）、瓷坩埚、牛津杯（内径 6mm、外径 8mm、高 10mm）、移液枪等。

无水甲醇、醋酸钡、氯化钡、浓盐酸、抗生素（硫酸链霉素）。

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、白葡萄球菌（white staphylococcus）、枯草芽孢杆菌（Bacil-lus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）（以上菌种来自于哈尔滨医科大学）。

1.2 主要实验设备
粉碎机、马福炉、电热恒温鼓风干燥箱、微电脑控制生化培养箱、电热恒温培养箱、立式自动电热压力蒸汽灭菌器、高压灭菌锅、无菌操作台。

2 实验方法
2.1 工艺流程
2.1.1 硫代葡萄糖苷的提取工艺流程西兰花→洗涤→切片→干燥→粉碎称重（西兰花蕾部位）→甲醇加热回流→加入 Pb(AC)2→静止→离心→滤液（硫代葡萄糖苷的粗提物）。

2.1.2 硫代葡萄糖苷的测定工艺流程（采用重量法测定，参考吴谋成[6]、褚庆华[7]的测定方法，略有改动）：上述滤液→加入 Ba(AC)2，过滤→除甲醇→加入 BaCl2、HCl→沸水浴→静止过夜→过滤→灰化至衡重→称重→计算硫代葡萄糖苷含量（同时做空白）。

操作要点如下：
（1）切片：切片厚度在 0.5cm 左右。

（2）加入 Ba（AC）2目的：除去样品液中游离硫酸根离子的干扰。

（3）加入 BaCl2、HCl：采用酸水解工艺将硫代葡萄糖苷水解为 ITCS，游离硫酸根与钡离子结合生成硫酸钡沉淀。

（4）过滤：采用定量滤纸。

2.2 测定方法。