实验项目号：80000039102 实验类型 ： 验证性
七．思考题： 通过本次实验，在防止微生物污染
与扩散方面，你学到了些什么？有何体 会？
微生物学实验201310
实验二 显微镜的使用和细菌基本形态的观察 （P40-47）
一．实验目的：
实验项目号：80000039101 实验类型： 验证性
1. 学习并掌握显微镜，特别是油镜的工作原 理和使用方法 ；
2. 熟练使用显微镜观察细菌的个体形态 。
微生物学实验
适用于生物科学、生物技术等专业
生物工程学系微生物学实验室
参考教材： 沈萍 陈向东 《微生物学实验》（第四版）
高等教育出版社
微生物学实验201310
实验一 环境微生物的检测（P5-8）
实验项目号：80000039101 实验类型： 验证性
一．实验目的：
1. 学习检测环境中微生物的方法； 2. 观察不同类群微生物的菌落形态特征，比
D区），洗手前后分别用手指在培养基表面轻按。（注意不要按碎培养基。） 盖好皿盖。
3.口气中的微生物：打开皿盖，对着培养基吹气。 4.实验台面的微生物：用灭菌棉签揩拭实验台面，再用此棉签在培养基表面滚动一
下，也可用同样方法检测你所感兴趣的其他地方或物品。
处理完成后，盖好皿盖，倒置培养皿，置于37℃温箱培养1-2天观察，记录实验结果。
部复原。
微生物学实验201310
显微镜保养和使用中的注意事项：
1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证光洁 度 3.观察标本时，必须依次用低、高倍镜，最后用油镜。当 目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可使用粗调节 器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯，以 免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不可单 手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而腐蚀 镜片。
微生物学实验201310
油镜使用的原理
1. 香柏油的折射率 与玻璃接近，提高 了视野的照明度。
2 . 提高了显微镜的 分辨率
微生物学实验201310
三． 实验材料：
❖ 玻片标本： 球状：四联球菌（Micrococcus tetragenus ） 杆状：枯草杆菌（ Bacillus subtilis ） 螺旋状：水弧菌（Vibrio aquatilis）
较不同环境中微生物的类型和数量； 3. 体会无菌操作的重要性。
微生物学实验201310
精品资料
二． 基本原理： 环境中的微生物在营养丰富的培养
基平板中经过培养即可长成肉眼可见的 菌落，从而可检测到环境中存在的微生 物的类型和数量。
三． 实验材料： 营养琼脂平板、 灭菌棉签、 恒温培养箱等
微生物学实验201310
菌名 拉丁学名 放大倍数
六．分析及讨论：
微生物学实验201310
七．思考题：（P47）
1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜 头之间滴加香柏油有什么作用？
2. 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，而不是 直接用高倍镜或油镜观察？
3. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？
微生物学实验201310
实验三 细菌简单染色及革兰氏染色
5. 油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，旋开高倍镜，
在标本中央滴一滴香柏油，转过油镜，使油镜镜头浸 入香柏油中，细调至看清物象为止。
6. 换片：另换新片，必须从“3”开始操作。
7. 标本片的清洁：
8. 用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去镜
头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量清洁剂擦去残留
的油，最后用擦镜纸擦去残留的清洁剂，后将镜体全
微生物学实验201310
五． 实验结果：
将实验结果记录于下表（P8）：
处理方法
菌落数量
菌落特征
（大小、形状、透明 度、颜色等）
简要说明
表1：微生物检测的结果记录表
（1）
（2）
（3）
（4）
菌落数量可用“+”和“-”来表示，从多到少依次表示为++++，+++，++，+，-
微生物学实验201310
六． 分析及讨论：
件.它起着支持 调节 固定
Hale Waihona Puke 等作用.微生物学实验201310
显微镜的放大倍数和分辨率
1. 放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
四． 实验方法和步骤：（P6-7）
每四个同学为一组，每个同学一个营养琼脂平板，每人各选取以下其 中一种处理方法（或你感兴趣的其他方法），写好标签：
1. 实验室空气中的微生物：比较培养基暴露于空气不同时间的区别：
❖ 打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中10min，盖好皿盖； ❖ 打开皿盖，把培养基平板暴露于空气中30min，盖好皿盖； 2. 比较洗手前后手指上微生物的区别：在培养皿底部用记号笔分四个区（A、B、C、
微生物学实验201310
细菌基本形态的观察
利用油镜，观察细菌的基本形态（球状、杆状和螺旋状），边观察边绘图。
四联球菌
链球菌
枯草杆菌
微生物学实验201310
水弧菌
五． 观察结果（绘图）P46
绘出在油镜下观察到的形态图，注意菌体的形态、大小比例、排列， 同时标明菌名(包括拉丁学名)和放大倍数（物镜的放大倍数×目镜的 放大倍数）
❖ 示范片：溶血链球菌（Streptococcus hemolyticus） ❖ 其他器材：显微镜、香柏油、清洁剂、擦镜纸
等
微生物学实验201310
四． 实验方法和步骤：（P44-45）
主要是油镜的使用
1. 用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。
2. 调节光亮度
3. 低倍镜观察：粗调、细调
4. 高倍观察 ：细调
微生物学实验201310
二．基本原理：
微生物的个体很小，必须要借助显微镜才能看清其形态。
显微镜的构造
1.光学部分:接目镜 、 接
物镜 、 照明装置(聚光镜、 虹彩光圈、 反光镜等). 它
使检视物放大,造成物象.
2.机械部分:镜座、镜
臂、镜筒、物镜转换器、
载物台、载物台转移器、
粗调节器、细调节器等部