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流动室与液流驱动系统
1.空气加压进样 2.蠕动泵精确定量进样
流动室，430×180um,鞘液
Injector Tip Sheath
fluid
Fluorescence signals
Focusedbleaasmer
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激光光源与光束成形系统
1.氩离子气体激光器，22×66um 2.固体激光器 405nm, 488nm,561nm,635nm
? FSC反映细胞体积的大小，FCM应用时常选取FSC设定阈值 。
5%
默认阈值
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32%
升高阈值后
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荧光信号
?细胞自发荧光 ?特异荧光素标记激发的荧光信号 ?荧光信号的线性测量和对数测量---光电倍增管
1）检测光子，转换成电信号 2）将电信号等比例的放大 ?荧光信号的面积、宽度和高度
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? 实验中，常利用FSC和SSC这两种参数的组合，区分不同的细 胞群体，去除碎片、死细胞和粘连细胞的干扰。
红细胞、死细胞和碎片
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粒细胞 单核细胞 淋巴细胞
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? 阈值：溶液中的杂质或者死细胞，很容易产生微小的干扰信 号，所以必须设置阈值，排除杂质、细胞碎片或体积较小的 死细胞。
? 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合 成微球等。
? 对生物颗粒的物理参数及生物学特性进行定性和定量 分析。
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流式细胞仪构造图
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流式细胞仪五大系统
? 流动室与液流驱动系统 ? 激光光源及光束成形系统 ? 光学系统 ? 信号检测与分析系统 ? 细胞分选系统
流式细胞术原理及应用
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一、什么是流式细胞术？ 流式细胞仪的构造
二、怎样设计流式实验？ 三、流式实验中涉及到的关键步骤 四、常见流式细胞术应用
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一、流式细胞术基本概念
? 流式细胞术（ Flow Cytometry ）是对于处在 快速直 线流动中的细胞和生物颗粒进行 多参数、快速的定量 分析和分选技术 .
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光学系统
透镜、滤光片、小孔； LP：long-pass filter BP：band-pass filter
460 500 540
SP：short-pass filter
LP 500Βιβλιοθήκη SP 500BP500/50
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信号检测与分析系统
物理参数 ?FSC：前向角散色光， 代表细胞大小 ?SSC：侧向角散色光，代表细胞颗粒度
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? 由于光信号比较弱，需将其等比例放大，方便计算机分析处理，一般信 号的放大可以使用线性或对数两种方式。
? 一般FSC和SSC变异范围较小，故使用线性放大；荧光信号变异范围较大 ，多使用对数放大。
?线性测量：DNA 含量、RNA 含量、总蛋白含
量
?对数测量：细胞膜表面抗原检测
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直方图（Distribution Histogram） 散点图（Dot Plot）
?横坐标：道数
?横坐标：某细胞参数
?纵坐标：细胞数
相对含量
?纵坐标：该细胞另一
参数含量
等高线图（Contour Plot）
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