水中细菌总数的检测
一、实验的目的要求
1、学习并掌握水的细菌学检测方法
2、了解水质状况与细菌数量在饮用水检测中的重要性。

二、实验原理
细菌总数就是指1ml水样在营养琼脂培养基中,于37℃经24h培养后,所生长的细菌菌落的总数。

细菌总数就是评价水质污染程度的主要卫生指标。

我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750—85规定水样中细菌总数测定就是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数。

所测定的细菌总数增多说明水被生活废弃物污染,但不能说明污染的来源。

因此必须结合总大肠菌群数来判断水污染的来源与安全程度。

本实验应用平板计数技术测定水中细菌总数。

由于水中细菌种类繁多,它们对营养与其她生长条件的要求差别很大,不可能找到一种培养基在一种条件下,使水中所有的细菌均能生长繁殖,因此,以一定的培养基平板上生长出来的菌落,计算出来的水中细菌总数仅就是一种近似值。

目前一般就是采用普通牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

平板菌落计数法的优点:
能测出样品中的活菌数。

此法常用于某些成品与生物制品检定以及食品、水源的污染程度的检定等。

缺点:手续较繁,而且测定值常受各种因素的影响。

生活饮用水细菌卫生标准
我国饮用水卫生标准:
≤3个大肠菌群/1L饮水, ≤100个细菌总数/1ml饮水
三、实验仪器与材料
1、高压蒸汽灭菌锅、恒温箱、冰箱、无菌接种间。

2、消毒酒精、消毒水。

3、试管、三角瓶、平皿、刻度吸管、涂布器等(实验前包扎灭菌处理好备用)
4、培养基
蛋白胨10g 牛肉膏3g 氯化钠5g 琼脂10~20g 蒸馏水1000ml 制备方法:
按照实际的需要量,按上述配方称取各成分混合后,加热溶解,调整pH为
7、4~7、6,,分装于玻璃容器中,用高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min,倒制
成平板后储存于冷处备用。

5、水样: 自来水、中水。

四、实验内容:
(一)、培养基的制备:
实验前事先准备好培养基平板(方法见上),每小组2-4个平板。

(二)、取水样:
1、自来水的取样:先将自来水龙头用酒精棉擦拭,再用酒精灯火焰灭菌,
打开龙头放水1-2分钟,用无菌空三角瓶接取水样200毫升。

2、纯净水取样:用消毒酒精棉擦拭纯水机出口后,先放走部分水,再用无菌
空三角瓶接取水样200毫升。

3、池水、河水或湖水应取距水面10—15cm的深层水样,先将灭菌的带玻璃
塞瓶,瓶口向下浸入水中,然后翻转过来,除去玻璃塞,水即流入瓶中,盛
满后,将瓶塞盖好,再从水中取出,最好立即检查,否则需放入冰箱中保
存。

(三)、接种培养:(要求无菌操作)
用无菌吸管吸取1毫升水样,加入平板中(每个水样平行做两个平板),用无菌涂布器涂抹均匀,在培养皿侧面标注清楚后,置于37℃恒温箱内经24h-48小时培养后,统计细菌菌落的总数。

(四)、菌落记数:
菌落计数及报告方法
作平皿菌落计数时,可用眼睛直接观察,必要时用放大镜检查以防遗漏。

在记下各平皿的菌落数后,应求出同稀释度的平均菌落数,供下一步计算时应用。

在求同稀释度的平均数时,若其中一个平皿有较大片状菌落产生时,则不宜采用,而应以无片状菌落产生的平皿作为该稀释度的平均菌落数。

若片状菌落不到平皿的一半,而其余一半中菌落数分布又很均匀,则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。

然后再求该稀释度的平均菌落数。

五、实验注意事项
六、实验报告内容;
1、记录实验方法与步骤。

2、列表说明检测结果。

(1)自来水
(2)饮用水
3、思考题:
(1)从自来水的细菌总数结果来瞧,就是否合乎饮用水的标准？
(2)您所测的水样污秽程度。