分离纯化后的干细胞/祖细胞建议立即使用，不能立即使用则 必须保存-196度。
▲能有效保留全部的干细胞、祖细胞。 ▲细胞表面没有任何标记物，不改变干细胞生物活性。 ▲分离程序合理，没有明显污染过程、分离成本低， 细胞表面有抗体标记，而且不是所有人用同一管道分离无污染过程。
▲试剂盒设计符合干细胞生物学的要求，试剂盒要求新鲜骨髓和新鲜脐带 血，从采集到分离使用不许超过12小时。以保证干细胞的生物学活性 不发生改变。
选择哪种干细胞？
• 自体骨髓来源的干细胞。 • 异基因骨髓来源的干细胞，由捐赠者提供。 • 异基因脐带血来源的干细胞。
骨髓、脐带血、外周血的比较
脐带血
骨髓
粒单系集落生成细胞 集落数量( CFV-GM )
培养集落出现 时间 集落构成特点
对CSF的反应
48±6 4-5天
单核巨噬细胞为主
敏感
112±4 4-6天
通常情况下成体干细胞离开人体环境后，会很快分化为与其组织来源一 致的组织细胞。
▲投资成本低廉。 ▲不要求特殊设备。 ▲操作简单。
干细胞治疗肝炎肝硬化的治疗途径？
• 肝动脉途径 • 门静脉途径 • 经皮肤穿刺将干细胞直接注射到肝脏。 • 静脉输入法，该方法主要用于一般情况很差，
不能耐受介入或经腹部穿刺直接注射的，而且 是采用异基因脐带血来源的干细胞。
干细胞治疗重症肝炎肝硬化
药物治疗
无特效药
成体干细胞的生物学特性为开展细胞治 疗奠定了基础
1、长期存活、不断的自我繁殖 2、可以跨系、跨胚层分化,具有强大的可塑性 3、化学趋向性
成体干细胞在临床细胞治疗中的运用
干细胞治疗肝炎肝硬化解决什么问题？
• 干细胞移植治疗肝炎、肝硬化是指医生可以用 结构和功能正常的细胞作为“药物”输给患者， 以修复受损硬化的肝组织，改善肝功能，达到 改善病人一般状况的目的，起到临床治疗疾病 作用。
选择性的除去红细胞、血小 板、全部的血浆物质、成熟 的白细胞、淋巴细胞。保留 Lin-细胞
无
除去所有未标记的细胞 有
除去所有未标记的细胞 有
除去大部分红细胞、血小板。 除去密度≥1.077的有形成 分
无
无
能收集所有Lin干细胞/祖细胞
0.5ml 不需要
无 骨髓、脐带血 ≥85%
≥98%
选择性的收集CD34、CD133、 C-Kit、Sca-1等
选择性的收集CD34、CD133、 C-Kit、Sca-1等
95%是中性粒细胞。干细胞/ 祖细胞数量很少，还残留一些 淋巴细胞、红细胞
保留所有的单核白细胞、 淋巴细胞、干细胞、祖细 胞
1.0ml 不需要
有 骨髓、脐带血、外周血 依据抗体含量决定，抗体含量 足，回收率可达到99%
10ml
有 骨髓、脐带血、外周血 依据抗体含量决定，抗体含量 足，回收率可达到99%
粒单混合
中度敏感
CD34+
57%±16%
9.6%±7.8%
CD38-
24%±7.3%
4.6%±3.2%
CFV-GM粒单系集落生成细胞
CSF集落刺激因子
外周血 12±2 7天以上
嗜酸性粒细胞为主
中度敏感 9%±4.9% 9.1%±4%
• 骨髓中的干细胞比外周血的干细胞原始。
• 脐带血比骨髓更为原始。
3、脐带血干细胞在作移植时，也是必须做HLA配型。HLA半 相合移植成功率远高于骨髓。 原因： ①脐带血干细胞比骨髓更原始。 ②脐带血干细胞表面抗原性远比骨髓弱。
4、脐带血干细胞在用做细胞治疗时可以忽略HLA配型问题， 就如同临床上输血一样，不用HLA配型。 ①脐带血干细胞的表面抗原性很弱，弱到不被 受体的免疫系统识别。 ②用于细胞治疗的脐血干细胞不替代原有的 组织器官，原有的组织器官还在起作用。
50-100ml
必须 动员剂使用风险很大WBC 可以达到5-10万
有
外周血
≤70%
ห้องสมุดไป่ตู้
1.0ml
无 骨髓、脐带血、外周血 ≤60%
≤90%
≤95%
≥98%
≥98%
≤10万元 7000-10000元左右
≥60万元 视抗体种类而定至少7000元
≥10万元 视抗体种类而定至少7000元
≥30万元 3000元左右
• 外院查肝功能“ALT 112U/L,AST 134U/L,ALB 28g/L,TBIL 90umol/L,DBIL 42umol/L”,血常规报“血 小板 82*109/L”。
免疫磁珠分选法
3、单抗贴壁铺展法 4、脐带血细胞分选仪 5、淋巴细胞分离液
负收集混合法
各种分离提取方法比较
流式细胞仪法
磁珠法
外周血细胞分选仪法
Ficll 法
分离的 原理
靶细胞表 面标记物 收集的靶 细胞种类
最小体积 动员剂
血浆残留 分选对象 细胞 回收率 细胞 存活率 投资成本 每分离一 份标本的 成本
• 脐带血的干细胞自我繁殖能力最强。繁殖速 度最快。骨髓次之。
• 脐带血中干细胞的比率最大，骨髓次之。
• 外周血中的干细胞更接近终端细胞或叫祖细 胞或前体细胞 。
HLA配型的探讨
1、异体骨髓移植必须做HLA配型。2个位点不合和3个位点不 合成功移植的报导都很多。
2、异体骨髓做局部细胞治疗时，有不做HLA配型，也有作的 报道。
病例介绍
• 男性，69岁，因“进行性腹胀1月”收入院。入院时患 者情绪差，全身烦热，烦躁不安，手心、脚心均觉烦 热明显，不能久卧及睡眠，每日睡眠不足1小时。
• 入院查体：生命征平稳，一般情况较差，慢性病容， 皮肤粘膜黄染，烦躁不安，情绪差，应答可。心肺正 常。腹部膨隆，腹围增加，紧张力稍高。触软，无压 痛、反跳痛，肝脾肋下未触及，液波震颤及移动性浊 音阳性，肠鸣音正常。
骨髓采集
• 骨髓采集多选择髂后上 脊
• 选择选择多孔采髓针 • 采集量视需要而确定 • 一般采集200ml • 保存在含有橘缘酸钠的
血袋中，周转、传递。 • 血袋必须用塑封机封好
骨髓、脐带血干细胞筛选方法？
• 免疫磁珠分选法 • 流式细胞仪分选法 • 单抗贴壁铺展法 • 外周血细胞分选仪 • 淋巴细胞分离液
≤10万元 1000元左右
《骨髓、脐带血有核细胞体外分离试剂盒》介绍
《试剂盒》是专门用于临床分离骨髓和脐带血中的有核细胞 的，一个试剂盒设计分离200ml骨髓或200ml脐带血。分离方 法简单。正常按说明操作能有效全部除去红细胞、血小板、及 去全部血浆物质，只回收有核细胞，分离时如操作熟练，有核 细胞回收率85%以上。细胞存活率96%以上，不损伤干细胞， 干细胞表面无任何标记物，不改变干细胞的生物活性。