• 1970 年 H.Temi 和 Dulbecco 发 现 致 癌 的 RNA病毒中存反转录酶，提出了原病毒 假设，认为RNA病毒通过反向转录和正 向转录以及与宿主细胞DNA发生交换或 重组，能形成癌基因。 • 1976年H.Evarmus和J.M.Bishop发现鸟类 肉瘤病毒中含有致癌基因。被命名为病 毒癌基因(Virus oncogene V-onc). • 80年代初通过很多实验证实了癌基因的 存在。
辐射
晚期： 引发细胞凋亡。
p53蛋白与 抑制有关 的各功能 区的活性
第三节 癌基因产物的结构，功 能和细胞癌变。
• 一 . src基因 • src的产物p60src具有TPK（酪氨酸蛋白激酶） 活性，与细胞的增殖和转化有关。Src蛋白有 四个结构域： （1）N端十四烷基化位点是和膜结合的位点 （2）SH2（src homology region-2）结构域。 (3) 416位Tyrh和自身磷酸化有关。 (4) 而527位Tyr的磷酸化位点。
RB E2F P
Phosphorylation of
Fig . 19- p21 and p27 inhebit assembly and activity of cdk4,6-cyclin D and cdk2-cyclinE by CAK. They also inhibit cycle progression independent of RB activity. P16 inhibits both assembly and activity of cdk4,6-cyclin D.
几种和G0/G1或G1/S期控制有关的蛋白是肿瘤抑制物
p16 , p21 , p27可结合cyclin-CDK复合物使其失活
P cdk4,6 cdk4,6 cyclin D cyclin D Assembly RB cdk 2 c cylinE cdk 2 cylinE p21,p27 p16 CAK P cdk 2 cylinE p21,p27 p21,p27 cdk4,6 P cyclin D p16 P
在细胞周期中Rb磷酸 化受到调控 G0/G1 去磷酸化， G1末至G2末被细胞周 期蛋白CDK复合物磷 酸化。
非磷酸化的Rb可 结合转录因子E2F及 许多肿瘤抗原。
肿瘤抗原(SV40T,Ad E1A)和Rb结合
RB
位于13q14，编 码视网膜母细胞瘤 蛋白 Rb，能结合肿 瘤抗原,（SV40 T抗 原）调控细胞周期， 抑制细胞增殖，最 早在视网膜母细胞 瘤的研究中被发现。
• 1987年Stanbridge等分离了人类13号染色 体，将它注入培养的成骨肉瘤细胞中， 结果导致了癌细胞逆转， • 同年李文华把Rb转化到培养的癌细胞中 使其逆转。 • 更进一步证明了Rb的抑癌作用。他克隆 了Rb全长的cDNA，发现其产物是一种长 928氨基酸，分子量为105Kda的蛋白质。
生长因子
分泌蛋白
癌 基 因 的 类 型
生长因子受体
各种受体激酶，受体
G-蛋白/ 信号传导
GTP结合蛋白
胞内Tyr激酶
膜结合蛋白，胞液蛋白
Ser/Thr激酶
胞液蛋白
信号分子
调节物
转录因子
Leu拉链蛋白，转录 因子，甲状腺激素受体
二．原癌基因
• 1、原癌基因产物及其分类 • 原癌基因指存在于细胞基因组中的在一 定条件下可以被激活改变了细胞原有的 遗传信息，使细胞发生了恶心转化的基 因。 • 根据原癌基因产物在细胞的位置分为 第一类是与膜结合的的蛋白，如 erbB,neu,fins,mas ,src基因产物。
• 第二类是可溶性蛋白，包括mos,sis,fps 基因产物。 第三类是核蛋白，如myc,ets,jun,myb等基因 的产物。
•
2，原癌基因的表达调控
• • • • •
点突变 LTR插入 基因重排 缺失 基因扩增
3、基因互作与癌基因表达
染色体构象对原癌基因表达的影响 原癌基因终产物对基因表达的影响 抑癌基因产物对对原癌基因表达的影响 外源信号对原癌基因表达的影响
P53
p53蛋白是一种肿瘤抑制 物，一半以上的癌变都与P53的 缺失或突变有关。 p53蛋白是四 聚体， 突变具有显性失活的效应
• p53的功能: （1）一种可能是野生型p53与细胞中某些T抗 原的类似物结合，抑制了它们的活性; （2）p53也是一种DNA结合蛋白，它能识别长 10bp两侧对称的模体，并激活含多拷贝这 种基序的启动子的转录。 (3)在有的座位上它可能阻遏其靶基因。 (4) p53通过调节基因的表达来控制细胞周 期，缺乏这种调节就会导致细胞无限制生 长。 (5) p53突变具有显性失活的效应。
DNA肿瘤病毒
• 转化病毒:SV40的T抗原; 人乳头瘤病毒 (human papillomavirus ，HPV) 的E6E7; 腺病毒的E1A，E1B • 转化病毒带有癌基因其产物可使肿瘤抑制物 失活。即减弱抗癌基因的功能
一些DNA病毒 感染宿主细胞后不发 生裂解， 而是潜伏 在细胞中，并整合到 宿主基因组中，表达 病毒癌蛋白， 引起 宿主细胞转化。如： 多瘤病毒家族 （SV40)，人乳头瘤 病毒家族，腺病毒家 族。
正常细胞与癌细胞比较
体外细胞培养
原代培养细胞（血清依赖,接触
极限(大部分细胞 死亡，少数存活) 确立细胞系 (永生化) 转化(失去血清依
赖、接触抑制；形 态改变、聚集，长 成病灶)
抑制 ,有限寿命）
生 长 转 化 过 程
转移癌细胞转移
到别的组织，产 生新的克隆
癌细胞
• 确立细胞系:
• （1）贴壁依赖性（Anchorage dependence）细 胞附着在固体基质或薄膜的表面。 • （2）血清（或生长因子）依赖性（serum or growth facto dependence）： • （3）密度制约抑制 （Density-dependent inhibition）： • (4） 细胞骨架的形成 （cytoskeletal organization）。细胞是扁平 的，而且延着附着基质的表面沿伸。
• Kundson早在1971年提出著名的 “ 二次突 变假设（two mutation hypothsis）”。 • 后来遗传学家发现家族性患儿的体细胞中13 号染色体存在缺失（13q14），表明该区域可 能存在与视网膜母细胞瘤发生有关的基因Rb。 • Sparkes(1980)将Rb基因定位于13q14。 • Benedict（1983）提出位于13q14的Rb的一对 等位基因均失活才会产生该肿瘤。表明Rb是 以隐性方式起作用。 • Stephe等（1986。
第十讲 基因与癌
产物活性改变 结构改变 产物失活 调控区的突变 癌基因 产物数量 染色体重排 的改变 扩增 均染区 易位－改变了调控 插入－插入致癌病毒，引入强启动子 缺失－缺失抗癌基因和负调控序列 双微体
第一节 肿瘤细胞的特点
1. 癌症
多细胞器官性的疾病，这些器官的细胞生长异常， 失去调节，并常伴有异常分化，形成瘤。在高等脊椎 动物中及植物中都有发现。癌细胞与正常细胞相比呈 现以下特征:
增加转录
•
病毒转染使正常原癌基因受病毒强启动 子调节，如c-moc, 或被整合在附近的反转录病 毒反式激活, 如 c-myc, c-myb , c-ref.
插入c-myc 基因不同位 置的 鸟类白血病病毒 (avian leukosis, ALV)通 过通读来打开编码的外 显子 病毒增强子偶尔 作为启动子，录转 编码区
1） 2） 3） 4） 5） 6） 7） 8）
无限繁殖 接触抑制现象丧失 癌细胞间粘着性减弱 易被凝集素凝集 粘壁性下降 细胞骨架结构紊乱 产生新的膜抗原 对生长因子需要量降低
(1)无限生长（Immortalization），此和生长 控制发生改变有关。 (2)转化（transformation），失去了生长的 正常抑制，例如不受生长因子的支配。 (3)转移（metastasis）
与RNA 病毒不同，DNA 病毒癌蛋白在细胞中没有对 应物。 它通过合成病毒癌蛋 白，作用并抑制宿主TSG蛋 白而引起细胞转化。 许多新的肿瘤抑制基因 是在病毒癌蛋白与TSG蛋白 相互作用的研究中被发现的。
RNA反转录病毒
• RNA反转录肿瘤病毒分为急性和漫性两种。 • 慢性肿瘤病毒是野生型反转录病毒，不 带有癌基因。 • 急性肿瘤病毒是缺陷型反转录病毒，在 其基因组中带有来源于动物的癌基因(v0nc)。需助病毒的存在才能复制与表达。 • V-onc的功能和突变的原癌基因相似。 • 漫性肿瘤病毒是依赖LTR中的强启动子作 用细胞癌基因，诱发癌变。
• (1)p53是一种DNA结合蛋白(转录因子)，可识 别10bp的回文模体，其第120-290位氨基酸的 区域负责这种与特定靶顺序的结合。 • (2)可激活含多拷贝模体启动子转录。p53还可 以阻遏某些不含有以上模体的基因，其机制不 明。 • (3) p53也 能和损 伤的 DNA结合 （第 310-390 位），此C-端的功能区可以识别单链DNA区。 • (4) p53是四聚体，其突变体具有的显性失活调 控的作用。
P53等位基因的缺失或突变 都可使细胞生长不受限制
野生型限制细胞 生长
缺乏p53细胞生长 不受控制
突变亚基因阻碍 四聚体功能，细 胞生长不受限制
DNA的损伤激活 p53,在细胞周期不同阶 段引起不同结果： 早期： 通过诱导p21
对CDK-cyclin 激酶的抑制， 激活限制点，阻止细胞周 期前进直到损伤修复。
• 接着又分离到一个30Kb的cDNA片段，用此 片段可检测到13q14带70Kb区域的基因。 • 同年眼科专家Dryja发现Rb失活时可以致瘤， 杂合子（Rb+/Rb-）易被诱变而失活； • 他还发现经眼球摘除手术能存活下来的患 儿长大后易患成骨肉瘤，乳腺癌和小细胞 肺癌。 • 1986年Friend将13q14位点的Rb经cDNA克 隆制成各种探针，检查很多例骨肉瘤和组 织肉瘤患者发现约50%的患者Rb基因纯合 缺失。