分化
研究的里程碑
3，2002年Exp Hematol和blood 发表文章，首次 证明MSC具有免疫抑制能力！
免疫调节
研究的里程碑
4，2006年国际细胞治疗协会（ISCT）颁布了间 充质干细胞的定义（最低鉴定标准）。
统一的标准
研究的里程碑
5，2012年Osiris公司申报MSC作为药品上市得到 加拿大FDA的批准，MSC的临床应用达到一个历 史性高度！
脐带MSC和骨髓MSC（细胞因子表达）
Cytokine IL-6 LIF IL-3
GM-CSF G-CSF SDF-1 M-CSF VEGF FLt-3
SCF β2MG
UC-MSC ++ + ++ + + + ++ + ++ ++
BM-MSC + + ++ + ++ + ++ ++
我们的结果: Haematologica. 2006 ;91:1017-26
J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150.
风险控制
稳定性评价
生产工艺
稳定性评价
P14
P18 Array-CGH and cytogenetic analyses showed that BM-MSCs expanded in vitro did not show chromosomal abnormalities. Telomerase activity and hTERT transcripts were not expressed in any of the examined cultures and telomeres shortened during the culture period. (Cancer Res 2007;67(19):9142-9149)
Annu Rev Pathol 2011;6457-478
无处不在
牙髓
外周血
脐带
MSC
胸腺 羊膜
骨髓
脂肪
脐带血
富含MSC的人体组织
图片来自网络
年龄与骨髓MSC含量的变化
研究的里程碑
1，1995年间充质干细胞首次应用于临床治疗， 评价血液肿瘤患者使用后的安全性和有效性。
安全
研究的里程碑
2，1999年science发表文章，首次证明MSC的多 向分化能力！
endogenous: Hsp, DNA, RNA, TNF,CD40L exogenous: unmethylated CpG sequences in microbial
?? Safe signals
意义：能够解释更多免疫学现象，成功地解释了坏死细胞为何能诱导免疫应答反应。
chronic phase acute pቤተ መጻሕፍቲ ባይዱase
生产工艺管理要求
《干细胞制剂质量控制及临床前研究指导原则（试行）——干 细胞制剂的质量控制》明确提出要求： “应制定干细胞采集、分离和干细胞（系）建立的标准操作及 管理程序，并在符合GMP要求基础上严格执行。”
GMP级车间
欧盟GMP关键点（Cytotherapy 2015;17(2):128-139）
MSC在免疫中的作用
MSCs是免疫系统“安全信号”的来源
应用受限
self-MSCs
safe signals
Cell Immunol. 2012;272(2):112-6
思考
2#
间充质干细胞 安全性评价
“成瘤性/致癌”的担忧和恐惧是干细胞临床应用的最大障碍！
担忧和恐惧的最早来源是胚胎干细胞的强致癌性，包括后来的iPS。 What about mesenchymal stem cell (间充质干细胞)？ Think about hemopoietic stem cell (造血干细胞)！ 不是所有的干细胞都具有成瘤性/癌变！
安全性评价
临床使用安全性报道：
------ Stem Cells Dev 2013;22(24):3192-3202
------ J Tissue Eng Regen Med 2011;5(2):146-150
安全性评价
临床使用安全性报道：
8个随机对照临床试验（RCTs）发现MSC治疗组和对照 组的感染率没有差异，明确提出MSC治疗不会增加感染的风 险，MSC治疗组和对照组在恶液质和成瘤方面没有差异。
间充质干细胞 功能及临床应用
1#
间充质干细胞 简介
间充质干细胞
间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC），来源 于发育早期的中胚层，1968年MSC在骨髓中发现，后发现其具 有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自 我复制等特点而日益受到人们的关注。
BM-MSC接种在珊瑚状羟基磷灰石微载体（3小时后的扫描电镜500X） ——Tissue Eng 2002;8(6):911-920
J Invasive Cardiol 18: 552–556；Chin Med J (Engl) 117: 1443–1448； J Am Coll Cardiol 54: 2277–2286；Stem Cells 28: 1099–1106； Clin Pharmacol Ther 83: 723–730；Leukemia 22: 593–599； Zhonghua Xin Xue Guan Bing Za Zhi 34: 107–110(Chinese)； Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research 11: 1277–1279 (Chinese)
MSC的新理解
MSC是机体免疫系统安全信号的来源！
Cell Immunol 2012;272(2):112-116
Danger Model
1994年Matzinger提出“danger model ”
核心：免疫系统只关心其是否受到损坏来启动免疫反应或诱导免疫耐受
signals
血液病
受到损坏（dangerous） 未受到损坏（not dangerous ）
MSC药物
负面消息（包括无效）的特点
1，活性差、功能低的间充质干细胞（自体骨髓间充质干细胞） 2，脐血单个核细胞（mononuclear cell，不是monocytes）冒充间充质干细胞 （部分医院和企业） 3，干细胞制剂里添加各种药物（激素） 4，治疗方案没有经过优化 5，各种忽悠的干细胞类型，比如：外周血干细胞（外周血含有少量的间充质 干细胞，但目前无法扩增到临床所需的细胞数）、母乳干细胞（退一步说，即 使母乳里含有干细胞，但经过胃酸和肠道消化，早就死翘翘了）、植物干细胞、 心脏干细胞（专业上有心肌干细胞）等
间充质干细胞
临床试验：全球（554+115项）2015-11-1
结果
搜索词
间充质干细胞
临床试验：中国（109+9项）2015-11-1
结果
搜索词
全球分布（区域）
MSC的全球clinicaltrials项目
Control Nude NOD/SCID Nude Balb/c Balb/c
MSC
Fibroblast MSC Fibroblast
Cytotherapy 2015;
肺部有损伤
肺部没有损伤
Circulation 2005; 112(10):1451-1461
Circulation 2005;112(10):1451-1461
间充质干细胞
长满 4X
没满 4X
间充质干细胞
鉴定标准（最低标准）：
• 贴壁生长 • 特定表面标志
阳性 (≧95%)
阴性 (≦2%)
CD105
CD45
CD73
CD34
CD90
CD14 or CD11b
CD79 or CD19
HLA-DR
• 多向分化潜能
体外分化能力: 软骨，成骨，脂肪
The International Society For Cell Therapy Cytotherapy, 8:315-317, 2006
值得反思的三点
1，间充质干细胞广泛存在于人体中，包括外周血、骨髓、脂肪、所有组 织器官的基质（ Ann Med 2005;37(7):469-479 ）。 如果间充质干细胞具有成瘤性，那么肿瘤一定伴随着每个人的完整人生！
2，每次患者输血或造血干细胞移植（骨髓移植），都伴随着输入少量的 间充质干细胞。 但从来没有证据证明输血和造血干细胞移植能导致肿瘤的出现！
VEGF165、FGF-2、EGF、 PDGF-AA、PDGF-BB、 Stem Cells 2015;33(6):1878-1891
影响MSC的质量的因素
脐带>脂肪>骨髓
空气洁净度 培养营养
健康>患者 年青>年老
活率越高越好
概念的差异
临床研究：clinical study 是以人体疾病的诊断、治疗、预后、病因和预防为主要研究内容。
活化APC
活化T-cell
诱导免疫耐受
遗憾：当时没有明确涉及dangerous signals和safe signals的定义和内涵。
Danger Model
2001年Matzinger提出具体的“dangerous 应sig用n受al限s”
Signals
Dangerous siganls
（2001年）
3#
间充质干细胞 功能及应用
间充质干细胞
多向分化
软骨损伤/缺损、血管新生