多种雷公藤甲素的递送系统已经开发出来，包括纳米粒子的聚合物胶束的[ 21 ]，[ 22 ]，[ 23 ] hydrogelthickened微乳液或溶菌酶结合物[ 24 ]。

但据我们所知，有没有研究文献中，对于一个以β-环糊精雷公藤甲素输送系统（CD）作为宿主分子。

一些萜类化合物的分辨率已经由CD的LC分离[ 25 ]流动相中添加改进。

事实上，环糊精是典型的主机分子在超分子化学的研究。

CD和d-glucopyrannose和1 macrolytic化合物，4-glycosodic债券，α-，β-gamma-CDs，自然cd分别包括6，7和8的葡萄糖单元，有几种多功能的CD衍生物可用来修改主机分子的理化性质。

例如，氨基酸的羧基CD，CD或硫酸镉是有用的工具分析研究。

通过分子间弱相互作用的宿主–客体包合物的形成，被描述为多种客体分子[ 26 ]。

在本研究中，我们研究了雷公藤内酯醇及其酯衍生物络合镉。

初步CE实验已经进行了描述两种化合物的电泳行为。

优化分离使用电离CD作为背景电解质修饰符允许定性分析雷公藤内酯醇（pg490）及阴离子琥珀酸模拟（pg490-88na）。

分子复合物的形成pg490或pg490-88na 和环糊精之间进行分离（CE），热力学（等温滴定量热法）和光谱（1D和2D NMR）在pH值接近生理pH技术。

使用这三个技术测定的两种化合物与中性的结合常数和电离的环糊精。

接下来，更先进的表明pg490-88na /氨基酸--CD复杂——表现最明显的结合常数——是通过核磁共振。

建立了化学计量学连续变异的方法[ 27 ] using1D核磁共振测量工作。

使用一维的选择性和2D ROESY实验研究了复杂的超分子结构的特点。

结果更精确地描述化合物和确定主机分子插入到环糊精空腔化工集团。

据我们所知，这是第一个广泛分析CD-triptolide复合物的表证。

2。

实验2.1。

化学品triptolide (PG490)和琥珀酸钠衍生物(PG490-88Na)是从皮埃尔·法布尔药剂实验室（位于法国兹）。

α-CD，γ-CD和羟丙基γ-CD（HP-γ-CD）购买来自瓦克Chimie（法国里昂），HP-α-CD和羧甲基β-CD(CM--CD)从Cyclolab和6-monodeoxy-6-monoamino-β-CD (amino-β-CD)Sigma–Aldrich (圣昆叮 Fallavier,法国). β-CD and HP--CD是馈赠罗盖特实验室（lestrem，法国）。

羟丙基化改性的环糊精代表的多组分混合物的平均摩尔取代度（MS）对C2, C3 和C6 3–4.8, 5.25–6.65, 4–6.4每CDmoleculeHP-α-CD, HP-β-CD和HP-γ-CD。

CM--CD提供了一个平均的MS 3，主要在C2。

他们的摩尔浓度的计算考虑到平均分子量。

氨基CD单取代对C6和MS 1／CD分子。

三（羟甲基）氨基甲烷（Tris），氢氧化钠和硼砂均购自默克（马恩河畔诺让，法国）。

硼酸，丙酮和DMSO的∑-–购买奥德里奇（圣昆廷fallavier，法国）。

磷酸（85%，W / W）购自贝克（德，荷兰）。

氧化氘（100%）和氘代甲醇分别从euriso 上购买（GIF河畔伊维特，法国）和奥德里奇（里昂，法国）。

2.2。

毛细管电泳ACE实验were performed我们贝克曼P / ACE MDQ毛细管电泳系统，包括我们diodearray 年柱紫外光探测器。

整个系统是由一台个人电脑，32开的软件包系统控制数据采集和分析（贝克曼Coulter，维勒班，法国）。

这是配备了一个50.2cm（40cm有效长度）× 50 m I.D.治疗fused-silica毛细管（复合金属服务，克雷，英国）毛细管是分别安装在恒温在298 K ±0.1 K◦一个盒和和应用电压是10伏或15伏的分析离子或中性的CD。

进行水动力注射用5s在1.0psi的压力。

检测波长为214 nm pg490和pg490-88na。

两个缓冲器被用来作为背景电解质（BGE）：硼酸盐缓冲液（100毫米，pH值7.7）和Tris缓冲液（25毫米，pH值7.7）。

新的毛细血管冲洗20分钟和0.1 M氢氧化钠（NaOH）（P = 20磅）和5分钟的水（P = 20磅）。

每一天的毛细管被先后用NaOH（5分钟，20磅），水（1分钟，20磅），然后与BGE（3分钟，20磅）。

每次运行之间，水处理（1分钟，20psi）和2分钟，20psi）。

示例解决方案在乙醇/硼酸缓冲50uM(5/95, v/v)是植物1mM乙醇的解决方案。

使用乙醇作为标记物测定的电渗迁移率。

对于中性pg490化合物，明显的和平均的结合常数K只能计算带电氨基酸-β-CD 和CM-β-CD.对电离pg490-88na化合物，它们分别计算中性和带电CDs(α-CD, β-CD, γ-CD, HP-α-CD, HP-β-CD, HP-γ-CD, amino-β-CD 和CM-β-CD). 加入BGE CD的增加量进行了表观结合常数的测定：从 0到 12 mM for the α-CD, β-CD, γ-CD, HP-α-CD and HP-γ-CD; 从0 到 50 mM HP-β-CD; 从0 到 16 mM 的氨基酸β-CD 和从 0 到 20 mM CM-β-CD.2.3。

等温滴定量热法等温量热仪（itc200，Microcal Inc.，USA）进行同时测定和研究形成常数和包括焓和熵的复合物。

采用滴定协议：204.5 L PG490 或 PG490-88Na脱气解决方案(Tris buffer, 25 mM, pH 7.7)在298k与某种特定的HP-β-CD的解决方案（缓冲区）40L注射器。

环糊精浓度等于5mmHP- β-CD和氨基-β-CD ，而pg490和pg490-88na浓度分别为0.2mm和0.5mm。

加入0.4·L的初始等分试样后，6个等分试样的6.3·L的环糊精溶液的交付（超过12.6对于每次注射）。

相应的热流量被记录作为时间的函数。

连续两次注射之间的时间间隔为120秒，搅拌速度为1000 rpm的全部实验。

此外，热环糊精稀释连续被eliminatedby进行空白滴定。

每次注射后（由原信号进行积分得到）的峰下面积，表示为每摩尔添加环糊精的热效应。

利用Microcal Origin 7软件包内使用内建的结合模式和结合等温线的非线性回归分析，最终确定结合常数和夹杂物的焓（Microcal，北安普顿，MA）。

化学计量被认为是1:1，每个环糊精分子可用网站N个被固定在1。

每个滴定实验为了确保结果，可重复性进行了三次。

2.4。

核磁共振波谱一维（1D）核磁共振光谱进行了实验，在Bruker的Avance300光谱仪工作在300.09 MHz 的质子，并配备了BBI探头。

二维（2D）和选择性1D NMR光谱实验在BrukerAvance500与500.13 MHz的碳质子和125.8 MHz操作TXI探头实现。

500·L的溶液引入一个标准5毫米的NMR管中，在300 K进行实验。

分析物（PG490和PG490-88Na）和取代CD的1H信号的由NMR实验实现：同核双标量的相关性1H-1H COSY带（相关光谱）和1D选择性TOCSY（全相关谱）实验中使用的为80毫秒，异核相关1H-13C HSQC与混合时间的布鲁克脉冲程序库中找到的标准脉冲序列（异核单量子相干性）。

对于同核偶极correlations1H-1H，ROESY2D 和1D选择性实验与500 ms的混合时间的记录。

利用连续变化法在Tris缓冲液pH值7.7，确定了pg490-88na /氨基 -镉配合物的化学计量比。

相互作用的物种的总浓度保持恒定在2.5毫米。

摩尔分数R（R =[分析]/（[分析]+[CD]或R=[CD]/（[分析]+[CD]））变化范围在0-1之间。

对于表观结合常数，要按照斯科特的模型，并考虑到CD的平衡摩尔浓度等于总共推出了CD的浓度，在复合形式的CD浓度的测定必须是微不足道。

该[CD] / [分析物]比率从5到30的递增。

表观结合常数分别为HP-β-CD 或氨基-β-CD PG490或PG490-88Na之间形成的复合物。

由于PG490的水溶性不足，其络合CD是研究了在25毫摩尔Tris缓冲液pH 7.7中加入氘代甲醇中的25％。

选择性1D和2D ROESY实验实现使用等摩尔浓度分析物和CD（2.5mm的25mm的Tris缓冲液pH7.7）的PG490-88Na/amino-β-CD复合物。

3。

结果与讨论3.1。

通过CE的pKa值的测定合成的化合物的电离常数的知识来理解和预测的溶质CE迁移行为是必要的。

因此，对PG490-88Na的pKa的计算之前测量的相互作用实现的。

由于CE PKA，被公认为是一个方便和精确的技术[ 28,29 ]，用3乙酸盐缓冲液的pH值为6.5（离子强度0.01米）。

pKa值为4.8（正如所料，这个值接近乙酸的pKa值）。

因此，在我们的电泳条件，在pH值为7.7，pg490-88na完全是在游离形式。

3.2。

的pg490和pg490-88na CD分析这两种化合物的分析是第一个使用中性的CDS进行(α-CD, β-CD, γ-CD, HP-α-CD, HP-β-CD and HP-γ-CD)。

正如预期的那样，在中性PG490的流动性是通过加入中性的CD （与乙醇标记共同迁移）的改变。

然而，在BGE中性CD除了涉及减少的阴离子PG 490-88 Na 迁移时间（由于在EOF的相对感增加其自身的流动性）。

如该图所示。

2 forβ-CD 和 HP-β-CD,theneutral CD浓度的增加涉及最低的迁移时间。

阻滞因素（在存在和不存在的CdS 的迁移时间比）在 2 mm存在计算的，分别是α-CD，β-CD，γ-CD，HP-α-CD，HP-β-CD 和HP-γ-CD是0.95，0.91，0.93，0.87，0.91和0.89。

这些结果表明，络合与雷公藤甲素PG490-88那应该是大致相当的任何性质的CdS（见3.3节）。

然后，使用离子型CD进行了PG490和PG490-88Na由CE在pH7.7的同步分析。

值得一提的是，使用带电的CD应该具有极大的兴趣，以解决这两个EOF和PG490信号。

阴离子CM-β-CD或阳离子氨基-β-CD进行研究。

首先，不同操作参数进行优化，提供最佳的检测信号（高度），分析时间和分辨率。

最佳的电泳条件在实验section.The阴离子CM-β-CD所述的第一个研究用浓度递增，从1到20毫米。