个 基 因 ，其 中 ３ １ 个 上 调 表 达 ，另 外 ２个 下 调 表 达 ，上 调 表 达 的 包 括 丝 氨 酸 蛋 白 酶 抑 制 剂 、分 子 伴 侣 、
Ｓ ＮＡＰ ２ ５ 、微 管蛋 白、锌 指蛋 白、细 胞 内脂肪 酸 结 合蛋 白、细 胞外 超 氧 化 物歧 化 酶 前体 、精 氨酸 激 酶 、 热休克 蛋 白 ７ （ ］ 和Ｂ ａ ｘ抑制剂 １ ，所有 发现 的病毒 诱 导 的免 疫 相关 基 因为 对 虾 固有 免疫 系统 提 供 了全 的观点 。Ｊ ａ ｍｅ ｓ 等 采 用 Ｓ Ｓ Ｈ 技术 构建 感染 白斑 病毒 的印度 明对虾 （ Ｆ ｇ ” ， 一 ０ 声 ｅ ａ “ ｉ ｎ ｄ ｉ ｃ ｕ ｓ ）肝 胰 腺
抑 制性 消减 杂 交技 术 在 甲壳 动 物 中 的应 用研 究 进 展
郜 卫 华 谭 北 平
（ 长 江 大 学 动物 科学 学 院 ，湖 北 荆 州 ４ ３ ４ ０ ２ ５ ） （ 厂 东 海 洋 大 学 水产 学院 ，广 东 湛 江 ５ ２ ４ ０ ２ ５ ）
（ 教 育 部 海 水 养 殖重 点实 验 室 （ 中国海洋大学） ，山 东 青 岛 ２ ６ ６ ０ ０ ３ ）
条下 调表 达 ，另有 ５条基 因 （ 漆 酶 、羧肽酶 Ｂ、氢 离子转 运 ＡＴ Ｐ合 成酶 、ＡＣ Ｂ Ｐ和 含 Ｉ Ｄ Ｉ 一 受 体 的皮质 颗粒 蛋 白）第 一次在 感染 白斑病 毒 的对 虾 中发现 ，这 步 研究对 虾 固有免疫 功能 提供 了新 的观点 。Ｚ ｅ ｎ ｇ等 － ｓ 采用 Ｓ Ｓ Ｈ 技 术构 建感 白 斑 病毒 的小 龙虾 （ Ｐ ｒ ｏ ｃ ａ ｍｂ ａ ｒ ｕ ｓ ｃ ｌ ａ ｒ ｋ ｉ ｉ ）血 细胞 差 异表 达 ｃ ＤＮＡ 文 库 ，并 结合 基 因芯 片技 术 鉴定 了 ３ ３
［ 关 键词 ］ 抑 制 性 消减 杂 交 ； 甲 壳动 物 ；差 异 表达 ；克 隆 ［ 中 图分 类号 ］ Ｑ７ ８ ６ ；Ｑ９ ５ ９ ． ２ ３ ３ ［ 文献标志码］Ａ ［ 文章编号］ｌ ６ ７ ３ —１ ４ ０ ９（ ２ Ｏ ｌ ３ ）２ ３— ０ ０ ６ ６— ０ ４
抑 制性 消减 杂交 （ Ｓ ｕ ｐ ｐ ｒ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｓ ｕ ｂ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｈｙ ｂ ｒ ｉ ｄ ｉ ｚ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ，Ｓ Ｓ Ｈ）技术是 以 ｍＲ ＮＡ 差别显 示为基 础 建立起 来 的筛选 差 异 表 达基 因 的新 技 术 ，具 有 快 速 、灵 敏 、高 效 和 假 阳性 率 低 的 特 点Ｅ １ ］ 。近 些 年 来 ， Ｓ Ｓ Ｈ 技术在 ｑ １ 壳 动物抗 病毒 机理 、抗 菌机 理 、抗 逆机 理 和 免疫 基 因 、发育 分化 基 因的研 究 中得 到 了广 泛 的应 用 （ 原理 图见 图 １ ） 。为 此笔者 对其研 究进 展进行 了综 述 。
一
步研 究对 虾抗 病毒机 理提 供差异 表 达基 因的框 架 。Ｐ ａ ｎ等 采用 Ｓ Ｓ Ｈ 技 术构 建 日本 对 虾感 染 白斑 病
毒肝 胰腺 差异表 达 ｃ Ｄ ＮＡ文 库 ，发 现 血蓝 蛋 白、凝集 素 、铁 蛋 白、加 氧酶 和 几 ＇ ｒ 质 酶 感染 白斑 病毒 后
上 调表达 ，并 第一 次发现 小分子 ＧＴ Ｐ ａ ｓ ｅ 在 对虾 防御反应 的信 号传 导 中发 挥作用 的证 据 ，这些 都 为进一
长江大学学报 （ 自然科学版） ２ ０ １ ３ 年８ 月号农学中旬刊 第 ｉ ０ 卷第２ ３ 期 Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｙ ａ ｎ ｇ ｔ ｚ ｅ Ｕ ｎ ｉ ｖ ｅ ｒ ｓ ｉ ｔ ｙ（ Ｎ ａ ｔ Ｓ ｃ ｉ Ｅ ｄ ｉ ｔ ） Ａｕ ｇ ． ２ ０ １ ３ ，Ｖ ｏ １ ． １ ０ Ｎ ｏ ． ２ ３刘 泓 宇 ，董 晓 慧 ，杨 奇 慧 （ 厂东海洋大学水产学院， 厂乐 湛江 ５ ２ ４ ０ ２ ５ ）
［ 摘 要］ 抑 制 性消 减 杂 交技 术 是 一种 高 效 检 测 差 异 表 达 基 因 的方 法 。 综 述 了抑 制 性 消减 杂 交 在 甲 壳 动 物 抗 病 毒 机 理 、抗 菌 机 理 、 免 疫 基 因 、发 育分 化 基 因和 抗 逆 机 理 研 究 中的 应 用 。
１ Ｓ Ｓ Ｈ 技 术 在 甲壳 动 物 抗 病 毒 机 理研 究 中 的 应 用
在 甲壳 动物 各种病原 引起 的疾 病 中 ，病毒所 造成 的损 失最 为惨 重 ，通 过 Ｓ Ｓ Ｈ 技术 找 出病 毒感 染 相 关 的响应基 因 的表达状 况 ，有 助 于进一 步研究 甲壳 动物 的抗 病 毒机理 。Ｈｅ 等【 。 。 利用 Ｓ Ｓ Ｈ 和斑 点杂 交构 建 了 日本 对 虾 （ Ｐ ｅ ｎ ａ ｅ ｕ ｓ ｐ ｏ ｎ ｉ ｃ ｕ ｓ ）感 染 ＷＳ Ｓ Ｖ 病 毒 血 细 胞 差 异 基 因 图 谱 ，氧 化 还 原 相 关 因 子 （ ＮＡＤＨ 脱氢 酶 、谷 胱甘肽 过氧 化物 和转 录因子 ＡＰ 一 １前体 ） 、血浆 防御 蛋 白 （ Ｃ型凝 集素 和粘连 蛋 白样 蛋 白）和 翻译控 制肿瘤 蛋 白在病毒 感染 对虾 中的高 度表 达意 味着它们 是参 与抗菌 过程 的必要成 分 ，为进
步 研究 甲壳动 物 固有 免疫 功能提 供 了新 的观 点 ；Ｚ ｈ ａ ｏ等 利 用 Ｓ Ｓ Ｈ 技 术构 建 了感 染 自斑 病毒 Ｏ ｈ 和４ ８ ｈ
后 凡纳滨 对虾肝 胰腺 ２个 正反 向消 减 ｃ ＤＮ Ａ 文 库 ，并 鉴定 了 ４ Ｏ个 差 异 基 因 ，其 中 ３ ｏ条 上 调表 达 ，ｌ ０