２０１２年第２期 （总第７６期） 漳州师范学院学报（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔ．Ｓｃｉ．） Ｎｏ．２．２０１２年
Ｇｅｎｅｒａｌ Ｎｏ．７６
异硫氰酸荧光素共轭体系碳原子 电子效应测定痕量ＣＰＺ 林少琴 ，林璇２ （１．福建教育学院理科研修部，福建福州３５０００１；２．漳州师范学院化学与环境科学系，福建漳州３６３０００） 摘要：本文基于ＦＩＴＣ的共轭体系碳原子上的氕电子效应，建立了测定痕量盐酸氯丙嗪＜ｃＰｚ）的新方法．该 方法线性范围宽，选择性好。体系简单、操作方便，适合于人血清与人尿液ＣＰＺ残留分析。结果与气相色谱法 （ＧＣ）．相吻合．根据人血清中ＣＰＺ残留量与致死量的相关性，本方法还可以用于临床诊断．同时，探讨了ＦＩＴＣ ＳＳＲＴＰ测定痕量ＣＰＺ的反应机理． 关键词：盐酸氯丙嗪；异硫氰酸荧光素；固体基质室温磷光法 中图分类号：０６２９．８ 文献标识码： Ａ
Ｔｈｅ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｓｉｄｕａｌ ＣＰＺ Ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ兀．Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｃａｒｂｏｎ Ａｔｏｍ ｉｎ ＦＩＴＣ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ Ｓｙｓｔｅｍ ＬＩＮ Ｓｈａｏ．ｑｉｎ ，Ｌｉｎ Ｘｕａｎ （１．Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，Ｆｕｊｌａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ，Ｆｕｚｈｏｕ，Ｆｉｊｉａｎ ３５０００１；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｚｈａｎｇｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｆｕｉｊｉａｎ，３６３０００） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ，ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｃｈｌｏｒｐｒｏｍａｚｉｎｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ（ＣＰＺ） ｈａｓ ｂｅｅｎ ｄｅｓｉｇｎｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ丌－ｅｌｅｃｔｒｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ ａｔｏｍ ｉｎ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ ｉｓｏｔｈｉｏｃｙａｎａｔｅ（ＦＩＴＣ）ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｓｙｓｔｅｍ．ＴｌＩｉＳ ｍｅｔｈｏｄ ｗｉｔｈ ｓｉｍｐｌｅ ａｎｄ ｅａｓｙ ｏｐｅｒａｔｉｏｎ ｉｓ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＣＰＺ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ ａｎｄ ｕｒｉｎｅ ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｒ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ，ｗｉｄｅｒ ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ ａｎｄ ｂｅｔｔｅｒ ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ，ａｎｄ ｔｈｅ ｔｅｓｔｉｎｇ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｏｎｓｉｓｔ ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＧＣ）．，Ｉ’Ｉｌｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｃａｎ ａｌｓｏ ｂｅ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｉａｇｎｏｓｅ ｈｕｍａｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕａｌ ｑｕａｎｔｉｔｙ ａｎｄ ｌｅｔｈａｌ ｄｏｓｅ ｏｆ ＣＰＺ ｉｎ ｈｕｍａｎ ｓｅｒｕｍ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｉｔｙ，ａｌｓｏ ｄｉｓｃｕｓｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｐａｐｅｒ ｉｓ ｔｈｅ ｒｅａｃｔｉｏｎ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｈｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＰＺ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｏｌｉｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｒｏｏｍ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｉｍｅｔｒｙ（ｓｓＲＴＰ）． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ＣＰＺ；ＦＩＴＣ；ＳＳＲＴＰ
盐酸氯丙嗪（ＣＰＺ）对大鼠脑损伤具有保护作用…，并可作为探针测定环境水样中某些阴离子表面活性剂 伫】，亦能与某些金属离子络合而显色用于光度分析【３】，显示了ＣＰＺ在医学、环境科学和分析化学上有潜在
的应用前景．过量的ＣＰＺ对人体的神经系统、呼吸系统和循环系统具有抑制作用．一般认为口服致死量为 １５—１ ５０ ＣＰＺ ｍｇ ｋｇ－【，致死血浓度为５．１０ ＣＰＺ ｍｇ Ｌ－【【们．由此可见，测定人血清中ＣＰＺ残留量对临床检测 具有重要的意义．在ｐＨ ６．１２和６０ ｏＣ反应２０ ｍｉｎ条件下，ＣＰＺ能与异硫氰酸荧光素（Ｆｒｒｃ）作用所生成 ＦＩＴＣ—ＣＰＺ化合物，使得ＦＩＴＣ的共轭体系碳原子上的尢电子密度（６）增大及ＦＩＴＣ的磷光信号（ＲＴＰ）剧烈 增强．据此，建立了ＦＩＴＣ共轭体系碳原子兀电子效应固体基质室温磷光法（ＳＳＲＴＰ）测定痕量ＣＰＺ的新 方法．本方法除了灵敏度比文献【３ １的方法高外，还具有线性范围比文献【３ ｏ】的方法宽，选择性比文献
收稿日期：２０１２－０１－２０ 基金项目：福建省教育厅科技项目（ＪＡ１０２７７） 作者简介：林少琴（１９５７－），女，福建省沙县人，教授。 第２期 林少琴，林璇：异硫氰酸荧光素共轭体系碳原子霄电子效应测定痕壅 ＿＿－－＿ ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿－＿＿＿＿＿－－＿－＿＿－＿＿。－＿－＿＿＿＿＿－＿＿＿＿－＿・－＿－＿＿＿＿＿＿＿＿ｌ＿・－＿＿－－－・－－－－＿＿・－－＿＿－－＿。＿－。 。。。。。 ＿。。‘ ’ 。。’一一 的方法好的优点，并已成功用于人血清与人尿液ＣＰＺ残留分析和人体疾病的诊断．
１实验部分 １．１仪器与试剂 ＬＳ．５５型磷光分光光度计；ｐＨＳ．３Ｂ酸度计；０．５ｌａＬ平头微量注射器． ＣＰＺＩ作溶液（北京药品生物检定所）：准确称取０．０１００ｇ盐酸氯丙嗪标准品，用纯水溶解并定容于１００ｍＬ 棕色容量瓶中，得浓度为１００ ｌａｇ ｍＬ 的储备液，临用时用水逐级稀释为１．００、１０．ｏ０和１００．００（ｆｇ ｍＬ叫）； ＦＩＴＣ溶液：用乙醇配制ｌｘｌ０－３ ｍｏｌ Ｌ ＦＩＴＣ贮备液，临用时用１ｘｌ０ ｍｏｌ Ｌ ＨＡｃ稀释成ｌｘｌ０叫ｍｏｌ Ｌ＿。； ｌｘｌ０ ｍｏｌ Ｌ＿。ＮａＯＨ；１ ｍｏｌ Ｌ—Ｐｂ（Ａｃ）２溶液．除了ＣＰＺ为基准试剂外，其它为分ｊ昕纯，水为三次亚沸水． ２．２实验方法 往２５ ｍＬ比色管中，加入适量的ＣＰＺ１００．００ ｆｇ ｍＬ－。，１．５０ ｍＬ １．０ｘｌ０－４ ｍｏｌ Ｌ－ ＦＴｒＣ，１．００ ｍＬ ｌｘｌ ｍｏｌ
Ｌ～ＮａＯＨ，水定容，混匀．于６０℃恒温水浴中反应２０ ｒａｉｎ，水流冷却５ ｍｉｎ．取ＰＡＭ浸入ｌ ｍｏｌ Ｌ Ｐｂ（ＡＣ）２ 溶液１０秒后，于９０＋１℃干燥２ ｍｉｎ，用０．５ｌａＬ平头微量注射器悬空点样０．４ ｌａＬ，９０＋＿１℃下干燥２ ｍｉｎ，同 时做试剂空白．扫描体系的磷光光谱，记录 ｍ ｍ双＝４７８／６４２ ｎｍ处试液的Ｉｐｌ和试剂空白的Ｉｐ２，计算 △Ｉｐ（＝Ｉｐｌ—Ｉｐ２）值． ２．３分析样品制备 人体血清按文献【ｌＩ】方法处理，抽取临床服用氯丙嗪的患者的静脉血３ ｍＬ，用肝素抗凝，以２０００转／ 分的转速离心５分钟，吸取上层人血清ｌ＿００ ｍＬ，加１０ ２．５０ ｍｇ ｍＬ 抗坏血酸．水定容至１０ ｍＬ，置于 冰箱中保存备用．临用时取１．００ ｍＬ人血清贮备液，用水稀释至１０ 倍，供测试．参照文献 方法，取１Ｏ．ｏｏ ｍＬ人尿液， ０．１Ｏ ｍＬ ５％氢氧化钠溶液，加入１ ｇ氯化钠，加入５ ｍＬ乙酸乙酯，混匀１ ｍｉｎ，静置分层， ５％盐酸溶液调节ｐＨ－－６．１２，水定容至１００ ｍＬ，备用．临用时取１．００ ｍＬ人尿液贮备液，用水稀释至１０ 倍，供测试．
２结果与讨论 ２．１磷光光谱 在６０℃、２０ ｍｉｎ条件下，Ｐｂ２＋为离子微扰剂时ＦＩＴＣ在ＰＡＭ固体基质上均可发射稳定的ＲＴＰ信号， ｐＨ＝１．０４时， ｍ 为４４６．９／６１４．１ ｎｍ，Ｉｐ＝５８．３（图ｉ曲线２．２’）：ｐＨ＝６．１２时， ／ 为 ４５６．９／６２２．３ ｎｍ，Ｉｐ依次为８６．５（图１曲线３．３’）．两者的ＲＴＰ特性发生显著的差异，可能与体系的ｐＨ、 ＦＩＴＣ存在形式密切相关【ｌ ． 在ｐＨ＝６．１２条件下，６００．ｆｇ ＣＰＺ能使ＦＩＴＣ的ＲＴＰ信号剧烈增强（ 啪 ｍｍ ＝４７８．３／６４１．６ ｎｍｌｐ＝ １３５．５，Ａｌｐ＝７８．９，图ｌ曲线５．５’），且 啪 红移了１９．３ ｎｍ，可能是ＣＰＺ分子中．ＮＨ２与ＦＩＴＣ分子ｑ￣－ＮＣＳ 反应而生成含有一ＣＳ—ＮＨ 的ＦＩＴＣ—ＣＰＺ化合物．
图１ ！ 漳州师范学院学报（自然科学版） ２０１２年 ＦＩＴＣ—ＣＰＺ体系的磷光光谱（１—５曲线为激发光谱，１，．５’曲线为发射光谱，１．１’，２．２，，３．３，，４．４’和５．５，为激 发光谱与发射光谱的编号．，１’一５’标记的两个数据，分别为ＲＴＰ的发射波长和强度） 表１ ＦＩＴＣ－ＣＰＺ磷光特性
表２测试条件
２．２最佳条件 对于１．４ ａｇ ＣＰＺ ｓｐｏｔ＿。，分别考察发光物质（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ（Ａ），Ｔｅｔｒａｂｒｏｍｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ（Ｂ），ｔｅｔｒａｃｈｌｏｒｏｔ— 第２期 一．
签 墨：签壁！墨堕墨璧茎 童茎壅签墨堡堕 皇 垫堕 窒壅量 些 一——
＿———＿—＿●＿—＿—＿－—————＿—－－—————＿——●————＿＿——＿——＿＿—＿—＿－－—－——－－————————————————一一一 ｃｔｒ￣ｏｄｏ－ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ（Ｃ），ＦＩＴＣ）、试剂的浓度．－￣ｍＪＲ、反应酸度、反应温度和时间、烘干温度和时间、氧气
和湿度、放置时间、固体基质（ＰＡＭ，ＮＣＭ，ＡＣＭ，ｐａｐｅｒ）与离子微扰剂等对体系Ａｌｐ的影响（表．２），结 果表明，当１．５０ｍＬ１．０×１０一 ｔｏｏｌＬ＿。Ｆ１ＴＣ、反应ｐＨ为６．１２、反应温度为６０＊（２和反应时间为２０ｍｉｎ、烘 干温度为９０＂Ｃ￣烘干时间为２．０ ｍｉｎ、通Ｎ２时间为１０．０ ｍｉｎ、固体基质为ＰＡＭ和离子微扰剂为１．０ ｍｏｌ Ｌ一 Ｐｂ 时，体系的△Ｉｐ最大且ＲＳＤ％在±５％范围内． 由表２得出以下规律： １．体系的Ａｌｐ值按Ａ，Ｂ，ｃ和ＦＩＴＣ的顺序依次增大，其中ＦＩＴＣ的Ａｌｐ值最： 且稳定，可是ＦＩＴＣ分 子中的．ＮＣＳ易与ＣＰＺ分子中．ＮＨ２反应而生成ＦＩＴＣ．ＣＰＺ化合物的缘故． ２．随着Ｐｂ 浓度的升高体系的Ａｌｐ值逐渐增大，可能是由于Ｐｂ 的重原子效应，大大地提高了光分 子从ｓＩ——Ｔ１态跃迁几率，使得体系ＡＩｐ值剧烈增强的缘故．当Ｐｂ２ 浓度＞１．０ ｔｏｏｌ Ｌ 时体系的△Ｉｐ 值反而减小，可能是适量的Ｐｂ 对体系的Ａｌｐ值产生增强效应，而过量的Ｐｂ２ 对体系的△Ｉｐ值产生猝灭效 应的缘故． ３．随着ｐＨ的升高体系△Ｉｐ值逐渐增大，可能是体系中ＦＩＴＣ．ＣＰＺ产量逐渐增大；ｐＨ＝６．１２ 时体系△Ｉｐ值出现最大值，可能是此时ＦＩＴＣ．ＣＰＺ产量最高：在ｐＨ＞７．０情况下，体系中ｔａｐ值逐渐减小， 可能是ＣＰＺ随着ｐＨ的升高而逐渐水解，ＦＩＴＣ．ＣＰＺ产量随之降低． ４．体系△Ｉｐ值随反应温度和反应时间的增加而增大，当大于６０℃、２０ ｍｉｎ时体系的△Ｉｐ值逐渐减小， 可能是ＣＰＺ离解导致体系中ＦｒｒＣ．ＣＰＺ产量降低的缘故． ５．随着烘干温度与时间的增加，固体基质上水被蒸发，水对ＲＴＰ的猝灭作用减弱，体系的△Ｉｐ值逐 渐增大；在９０＂（２烘干２ ｍｉｎ时体系的△Ｉｐ值最大且恒定；当大于９０℃、２ ｍｉｎ时可能ＦＩＴＣ．ＣＰＺ被分解， 体系的△Ｉｐ值逐渐减小； 表３分析参数