• 精子活力：正常精子的活动力，精子向前运动 的能力。计数200个精子的分级情况。 • WHO把精子的活动力分为4级。(5版分3级) • d：不动 PR：前向运动 • c：非前向运动 NP：非前向运动 • b：慢速或呆滞的前向运动 IM：不活动 • a：快速向前运动
• • • • •
正常为：a级>25%或a+b>50% （5版）的参考值下限是 前向运动精子（PR）：32% 精子总活力（PR+NP）：40% 临床意义：活力下降、弱精子症：见于液 化不良、粘稠度增高、精液凝集，精子结 构异常，内分泌功能异常，精索静脉曲张 等。
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• • • • • • 扁平底 不规则头 顶体区<40% 中段粗 不规则插入 弯曲
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• • • • • • • 顶体区>70% 顶体后区空泡 中段弯曲 粗、不规则插入 尾环状 卷曲、弯曲 双尾
精子形态分析
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操作前准备
• • • • • • 一侧有磨砂载玻片 盖玻片（24mmX50mm） 10uL移液器及吸头 纱布或纸巾 记号笔 巴氏染液或Diff染液
精液涂片的制备
• 每份新鲜的精液标本应制备两张或更多的涂片， 以防染色发生问题或载玻片破碎。 • 每次取样前要充分混匀精液。 • 对于未稀释的精液，采用拉薄技术；对于已洗涤 的精液，采用移液管法。 • 涂片前准备： • 1.用纱布或纸巾擦干净载玻片的两面 • 2.用记号笔在载玻片的磨砂处标记上编号、日期。
• 精子浓度的参考值下限为：15X106/mL • 精子总数的参考值下限为：39X106/mL • 精子密度过低或无精见于： 1、睾丸生精功能异常 2、输精管、射精管、精囊存在缺陷 3、精索静脉曲张 4、生殖道炎症 5、流行性腮腺炎并发睾丸炎 6、绝育手术后 7、放射性照射，有害化学物质污染及药物作用等。
染色步骤
• 1.精子悬液涂片制备完成后，水平放置，空气中 自然干燥； • 2.加A液覆盖组织片室温反应15秒，将玻片直立吸 水纸上除去多余染液； • 3.加B液覆盖组织片室温反应10秒，将玻片直立吸 水纸上除去多余染液； • 4 .加C液覆盖组织片室温反应15秒，将玻片直立 吸水纸上除去多余染液； • 5.流水中浸洗10~15次以除去多余染液； • 6.将玻片垂直竖立以去除水分，待完全干燥； • 7.油镜下观察精子形态。
• 液化：室温正常5~10分钟液化，20~40分 钟可完全液化，1小时仍不液化应视为异常， 一般与缺乏蛋白水解酶有关。 • 粘稠度：精液粘稠度异常可影响精子的活 力和穿透力。用吸管吸入精液，滴落精液 观察，粘稠度增加时，精液悬滴可形成 >2cm的拉丝。 • PH值：正常精液PH呈弱碱性，>=7.2（滴 PH试纸<30秒）。精液的PH过低，可影响 其对阴道酸性环境的调节作用，影响精子 活力。亦可能与精囊发育不良有关。
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• 如图：取5~10uL悬浮液于清洁载玻片上，用滴管 使精液在载玻片上展开。然后在400倍光镜下扫 视一下确保精液涂片均匀，400倍下每个视野2050个精子，并且没有精子成团或重叠。
• 注意：
• 1.精液标本完全液化，充分混匀； • 2.快速取样，使精子没有时间从混悬液中沉 降下来； • 3.重复取样前，再次混匀精液标本； • 4.精液滴在载玻片上，立即涂片，不要放置 数秒后再涂片。
涂片的方法
• 充分混匀待涂片精液标本，根据精子浓度，用移 液器去5~10uL的精液滴在载玻片的一端，立即用 第二张载玻片的非磨砂端以45°角（角度越小， 涂片越薄）沿第一张载玻片的表面移动并接触精 液滴，然后沿载玻片的长轴缓慢拖回拉片（约一 秒；速度越快，涂片越厚），制成一张涂片。
• 对于高粘稠或低密度或充满碎屑精液：稀释精浆 或离心去精浆。 • 方法：取0.2~0.5mL精液，加10mL生理盐水， 800g离心10分钟，除去大部分上清液，轻轻拍打 试管，使精子团重新混悬于剩余的上清液中。 • 必要时可加生理盐水重复洗涤一次。 • 洗涤后的精子浓度在20-50X106/ml为好。 • 洗涤的目的是减少背景杂质，并减少背景着色。
• 精子存活率：活精子数量在精子总数量中 所占的比例。 • 伊红-苯胺黑染色：50uL精液与等体积的染 液混匀，等待30秒；采用拉薄技术制成涂 片，空气中干燥，高倍镜观察，活精子头 部成白色或淡粉红色，死精子头部呈红色 或暗粉红色。 • 正常参考值： （参考下限是58%） • >=70%（射精后1h） >= 40~50%（射精后3h） • >= 20~30%（射精后6h）
人精子形态模式图
• • • • • • • 头部：轮廓规则，顶体 清楚，顶体帽至少覆盖 头部表面的1/3。 中段：细长，不超过头 宽1/3，轮廓直而规则。 尾部：细长，弯曲不卷 曲。
正常形态精子的概念
• 把“具备潜在受精能力精子”（亚群）的 外观作为形态正常的标准。 • 人为设定临界标准，规定“临界形态精子 都是异常”。
结果观察
• 1.精子顶体区染淡紫色，顶体后区染深紫色， 精子体尾区染成淡红色。 • 2.世界卫生组织（WHO）精子缺陷类型分 类如下：
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• 正常精子形态
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• • • • • • • • • 小头 梨形头 顶体区>70% 顶体后区空泡>2 过多残留胞浆 中段粗、弯曲 插入 双尾 弯曲
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• • • • • • • • • 圆形头 锥形头 不定形头 大头针状 顶体区>70% 顶体区<40% 顶体后区空泡>2 中段粗 不规则插入
精子细胞形态学检查
• 1、正常精子形态：正常在精液中占15% • (5版)参考下限为：4% • 2、畸形精子：头部形状、大小异常；体部 异常；尾部异常。 • 临床意义：精子形态异常与生殖系统的感 染、外伤、雄激素变化、化学药物中毒及 遗传因素有关。
• 3、生精细胞、精原、初级精母、次级精母、 精子细胞。 • 正常时少量，当曲精管的生精能力受到损害时， 精液中可出现较多的病理性幼稚细胞。 • 4、其他成分 • 红细胞（极少）：血精症、睾丸瘤、前列腺瘤 • 白细胞（<=1X106/mL）：生殖道炎症 • 癌细胞：输精管恶性肿瘤
孕前优生健康检查临床检验操作技术培训
精子常规分析与形态学染色
河南省人口和计划生育科学技术研究院
精液常规检验
• 采集：采集前必须禁欲2~7天，采集后立即 送检，存放时间不要超过1小时，运送时温 度与体温相近。 • 外观和气味：正常呈灰白或乳白色，厚稠 胶冻状，液化后呈乳白色半透明状。精子 数量少，精液透明且稀薄；精液中有较多 红细胞，可呈红褐色；黄色精液见于精液 中有较多脓细胞，或服用药物。 • 量：正常>=2mL，下限是1.5mL，小于1mL， 视为异常，见于精囊腺和前列腺病变。