计算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)]/A(溶剂)x100％
酶标法优势
3、酶标法优势
抗氧化微孔板实验方法的优势:①耗材量少,试剂量以微升 计;②试剂种类少,部分试剂配制可交互使用;③方法简便, 耗时短;④可重复性强,能够广泛应用于药物筛选,特不是 高通量药物筛选研究。
五、ABTS法
实验步骤
2、实验步骤
❖ 将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0、15mL样品加入2、 85mLABTS自由基工作液,混合,放置10min后,在734nm处测 定吸光度。每份样品平行操作3次。
❖ 计％算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)] /A(溶剂)× 100 ❖ A度度(溶,。A剂()样为品2)、为825、8m5LmALBATBST溶S液溶与液与0、01、51m5Lm甲L醇样混品合混后合的后吸的吸光
映被测物的抗氧化活性;(DPPH自由基的清除) ❖ (3)在特定条件下,测定样品的还原能力反映被测物的抗氧
化活性。(还原Fe3+)
四、DPPH法
1、原理
DPPH(二苯代苦味酰基自由基) 是一种以氮为中心的稳 定自由基。 特点:醇溶液呈紫色,波长为517nm下具有最大吸收。 具有单一电子,故能接受一个电子或氢离子,有自由基清 除剂存在时,DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅,在最 大光吸收波长处的吸光值下降,吸光度水平的降低表明 抗氧化性的增加,从而以评价试验样品的抗氧化能力。 此抗氧化能力用抑制率来表示,抑制率越大,抗氧化性越 强。
七、铁离子还原能力(FRAP)
原理
FRAP的原理是基于氧化还原反应的比色法。在酸性条件下 ,Fe3+一TPTA(Fe3+—三吡啶三嗪)被抗氧化剂还原成Fe2+一 TPTZF,溶液变成深蓝色,同时在593nm处有强吸收。FRAP法 具有快速、简便、重复性好等优点。该法不仅用于检测食 物及饮料的抗氧化活性。也可用于检测纯天然抗氧化剂的 活性。
VitE清除DPPH自由基抗氧化量效曲线
(相关系数)
反应时间t为30min的量效曲线
实验步骤
(2)一般方法——紫外分光光度计法 将样品用甲醇配制成一系列浓度,取0、1mL样品加入3、5 mL DPPH甲醇溶液(0、06 mmol/L),混合30min后测定515 nm处吸光度。每份样品平行操作3次。
抗氧化活性研究方法
目录
❖ 一、检测抗氧化活性的缘故
❖ 二、自由基的产生及抗氧化的重要性
❖ 三、检测方法 ❖ 四、DPPH法(原理,一般方法,酶标法) ❖ 五、ABTS法 ❖ 六、TBARS法 ❖ 七、铁离子还原能力(FRAP)
一、检测抗氧化活性的缘故
1、天然植物中许多化学物质具有抗氧化活性 2、抗氧化剂有延缓衰老等功效,越来越受到人们关注 3、据文献记齐墩果酸型三萜有较好的抗氧化活性 4、抗氧化活性测试简单,快捷,经济
❖ 计算公式为:清除率(％)=[A(溶剂)- A(样品)]/A(溶剂)x100％
VitE清除DPPH自由基 作用时间的延长 VitE抗DPPH作用增 强,但在3、9- 31、 2μmol·L- 1范围内 ,各时间点的药效变 化不明显,62、5500μmol·L-1浓度 范围,随着浓度增加, 各时间点的药物作 用曲线逐渐分离,并 在500μmol·L-1,各 时间点量效趋于平 稳。从图中能够看 出,在这些时间点中 ,30min的量效曲线 基本呈斜线上升。
实验步骤
2、实验步骤
(1)酶标法检测——酶标仪 ❖ 取96孔细胞培养板,各孔分不加入150μmol·L- 1的DPPH溶
液180μL,各浓度梯度样品溶液20μL,终浓度分不为3、9 ~500μmol·L- 1,反应总体积200μL,以溶剂作对比。加样 后,振荡混匀。封板胶封板后,室温下避光静置。分不在 10~120min时间范围内于517nm处测定各孔吸光度值。观察 样品抗DPPH的时效量效变化过程,确定实验的稳定性与最 佳实验反应时间。
1、原理
以水溶性的ABTS+自由基引发剂为显色剂。 特点:ABTS与过硫酸钾反应生成稳定的蓝/绿色阳离子自由 基ABTS+,最大吸光波长为734nm。 向ABTS+其中加入被测物质,假如该物质中存在抗氧化成分, 则该物质会与ABTS+发生反应而使反应体系褪色,然后在 ABTS+这种自由基的734nm吸光波长下检测吸光度的变化来 反映物质的抗氧化能力。
二、自由基的产生及抗氧化的重要性
自由基对人体造成的伤害 抗氧化剂
天然植物
三、检测方法
❖ 目前常用的抗氧化活性检测方法主要基于以下机理: ❖ (1)在特定条件下,样品对检测体系中脂类物质的氧化抑制
能力反映被测物的抗氧化活性;(TBARS法) ❖ (2)在特定条件下,样品对检测体系中自由基的清除能力反
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ABTS法优缺点
3、优缺点
简便,快速,适合于大量样品的检测。 ABTS在与氢原子供体的反应中选择性差是此法的一个不足 ,它可与任何羟基化的芳香族化合物反应,这与它们的实际 抗氧化能力关,因此,TEAC值也包括对抗氧化不起作用的羟 基。
六、TBARS法
简介
脂质体系中氧化反应抑制或中止的判断主要通过测量被氧 化物的浓度,氧的去除或氧化产物的形成。因此,反应物( 不饱与脂肪酸,自由基等)的消失,氧化产物的定量估计是 判断氧化时期的最合适方法。通过直截了当或者间接检测 氧的消失与自由基的电子自旋光谱,适用于氧化过程的初 始时期。通常采纳TBARS法来评价脂质的过氧化、