紫外分光光度法测定花生奶蛋白质含量
一、 实验目的
建立非蛋白质类含氮物质对测定结果无干扰的乳与乳制品中蛋
白质的快速测定方法。
二、 实验原理
由于乳与乳制品的蛋白质中有游离的酪氨酸、色氨酸和苯丙氨酸
存在的缘故,在280 nm 波长处有特征的最大吸收,其吸收强度与样中
蛋白质含量呈正比。利用这个特异性吸收,在280 nm 波长处,用1 cm比
色杯测得吸光度值。据此,计算出蛋白质的含量。
双缩脲是由两分子尿素缩合而成的化合物，在碱性溶液中与硫酸
铜反应生成紫红色络合物，此反应即为双缩脲反应。含有两个或两个
以上肽键的化合物都具有双缩脲反应。 蛋白质含有多个肽键，在碱
性溶液中能与Cu2+络合成紫红色化合物。其颜色深浅与蛋白质的浓
度 成正比，可以用比色法进行测定。双缩脲法最常用于需要快速但
并不需要十分精确的测定。
三、仪器与试剂
1、仪器 ①紫外分光光度计②石英比色皿③微波振荡器。
2、试剂 ①9 g/L 氯化钠溶液②蒸馏水③双缩脲试剂:溶解0.15g硫酸
铜（CuSO
4·5H2O）和0.6g酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·4H2

O）于50ml

蒸馏水中，在搅拌下加入30ml10％氢氧化钠溶液，用水稀释到100ml，
贮存于内壁涂以石蜡的瓶内。此试剂可长期保存。④标准蛋白溶液（10
μg/ml）准确称取牛血清蛋白用0.0001mol/L氢氧化钠溶液配制，冰
相存放备用.
四、操作步骤
1、 标准应用曲线的绘制:
取6支干净的试管，按0→5编号，然后按下表依次加入试剂，充分
混匀，在室温下放置半小时，以0管为空白，在280nm波长处测定
消光值（OD），以各管蛋白质含量（毫克）横坐标，OD值为坐标，
画出标线。
编号 0 1 2 3 4 5
蛋白质标准液（毫升） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0

蒸馏水（毫升） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0
双缩脲试剂（毫升） 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0 4.0

2、样品测定:
吸取花生饮料1.00 ml 置于100 ml容量瓶中, 加入9 g/L 氯化钠溶液至
刻度,混匀。再从中吸取10.00 ml样品溶液于100 ml容量瓶中,加入9 g/L
氯化钠溶液至刻度,微波振荡5 min,混匀。用定性滤纸过滤,弃去初滤液
30 ml,收集滤液备用。用9 g/L 氯化钠溶液做空白调零,在280 nm波长
处,用1 cm 石英比色皿测得吸光度值。记录花生饮料的吸光度值,从工
作曲线上查出或用计算标准回归方程计算出测定样品溶液中蛋白质
含量C。