（3）与洗脱剂及样品不起反应，不溶解于洗 脱剂
常用：硅胶、氧化铝、聚酰胺、活性炭、大孔树脂
经典色谱法液相
7
1. 硅胶（SiO2·H2O）中等极性吸附剂
吸附机制： 表面的硅醇基，与物质形成氢键 失活：水与硅醇基结合使其失去活性 活化：105-110℃加热30min
适用范围：微酸性（pH=4~5），
适于酸性和中性物质 粒度：100-200目
经典色谱法液相
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三、固定液、流动相及其选择
分类：正相分配色谱和反相分配色谱
正相分配色谱：固定液极性大于流动相 固定液：水、各种缓冲溶液、甲醇等强极性物质 流动相：石油醚、三氯甲烷等低极性物质 适合分离的物质：极性物质 各种极性物质流出顺序：t非极性< t中极性< t强极性
经典色谱法液相
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反相分配色谱：固定液极性小于流动相 固定液：硅油、液状石蜡等极性小物质 流动相：水、与水相混溶的有机溶液 适于分离物质：中等极性至非极性物质 各种极性物质流出顺序：t极性< t中极性< t非极性
适用对象：皂苷类、黄酮苷类化合物
粒度：20~60目
经典色谱法液相
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（三）色谱条件的选择：
依据被测组分、吸附剂和流动相的性质
1. 被测组分性质（极性大小）： 烷烃＜烯烃＜醚<硝基化合物<二甲胺＜酯 ＜酮＜醛<胺＜酰胺＜醇＜酚＜羧酸
经典色谱法液相
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2. 吸附剂的选择： 吸附剂的活性↑大，对被测组分的吸附能力↑ 强 强极性物质——选择弱吸附剂 弱极性物质——选择强吸附剂
酸性成分：硅胶
碱性成分：氧化铝
黄酮类：聚酰胺
3、流动相的选择
“相似相溶”原则 ：分离极性大的物质应选 用极性大的溶剂作流动相，分离极性小的物 质应选用极性小的溶剂作流动相
流动相极性顺序：
石油醚< 环已烷<苯<甲苯<乙醚<三氯甲
烷<乙酸乙酯<丙酮<正丁醇<乙醇<甲
醇<水
常用：混合溶剂
如：不同配比的甲经醇典色-谱水法液或相 甲醇
CH 2
N
n
H
商品名：锦纶、尼龙-6
不溶于水和有机溶剂，易溶于浓无机酸
分离机制：主要是氢键吸附 适用对象：黄酮类、鞣质、醌
氢键能力↑强 组分越后出柱
粒度：20~200目
经典色谱法液相
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4、大孔树脂
是一种具有大孔网状结构的高分子吸附剂。 不溶于酸、碱及有机溶剂
分类：非极性和中等极性
特点：在水中吸附力较强，在有机溶 剂中吸附力较弱
经典色谱法液相
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硅胶、氧化铝的含水量与活性关系
硅胶含水量% 0 5 15 25 38
活度级 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
氧化铝含水量% 0 3 6 10 15
结论：含水量越低，活度级别越小， 吸附力越强。
活度测定法：Brock经m典a色m谱n法法液相
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3、聚酰胺
[ ] O
CH 2
CH 2
C
CH 2
CH 2
经典色谱法液相
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选择原则： 固定液与流动相的选择，要根据 被分离物中各组分在两相中的溶解度之比 即分配系数而定。可先使用对各组分溶解 度大的溶剂为洗脱剂，再根据分离情况改 变洗脱剂的组成，即在流动相中加入一些 可调节溶解度的溶剂．以改变各组分被分 离的情况与洗脱速率。
经典色谱法液相
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四、操作方法
Cm Cm Cm
LL L
tt
t
5
当吸附等温线是线性时,流出曲线是对称 的,当吸附等温线是凸型或凹型时，流出 曲线形成拖尾峰或前延峰，克服方法： 减少进样量或样品浓度，利用等温线的 直线部分，防止超载。
经典色谱法液相
6
（二）、吸附剂
对吸附剂的要求：
（1）具有较大的表面积和一定的吸附能力
（2）颗粒要有一定的细度(d=75-150μm， 即 100-200目)，且粒度均匀
第10章 经典液相色谱法
液相色谱法：以液体为流动相的色谱法称～。
▪ 经典液相色谱：固定相颗粒较大且不均匀
下输送流动相
柱效较低
分析周期长
▪ 现代液相色谱：固定相颗粒小且均匀
下输送流动相
柱效较高
分析周期短经典色谱法液相
1
第1节 液-固吸附柱色谱(LSC)
（一）分离原理 （二）常用吸附剂 （三）色谱条件的选择
2、上样 3、洗脱
4、检视
经典色谱法液相
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第2节 液-液分配柱色谱法（LLC）
一、基本原理 原理：利用不同组分在固定相中溶解度不 同，而进行分离 过程：
经典色谱法液相
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二、载体 作用：支撑与分散固定液的作用 要求： 1）化学惰性，不易与其它物质发生反应 2）对被分离组分没有吸附能力 3）能吸留较大量的固定相液体 氧化铝：吸附力较强
碱性氧化铝 pH 9～10 适于分析碱性、中性物质 如：生物碱
中性氧化铝 pH 7.5 适于分析酸性、碱性和中性物 质 如：生物碱、挥发油、萜类、甾体及在酸碱中不 稳定的苷类、酯、内酯等化合物
酸性氧化铝 pH 4～5 适于分析酸性、中性物质 如：酸性色素、氨基酸、对酸稳定的中性物质
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4. 三者关系：
组分 吸附剂 极性大 活性小 非(弱)极性 活性大
流动相 极性
非极性或弱极性
经典色谱法液相
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（四）、操作方法
1、色谱柱的制备 要求：填装均匀、紧密，不能有气泡。 装柱时柱要垂直，表面平整。 固定相的用量适宜。
柱体：色谱柱 固定相：颗粒大小100-200目，用量 方法：干法装柱、湿法装柱
(四) 操作方法
经典色谱法液相
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（一）分离原理
1.吸附与吸附平衡
各组分与流动相分子争夺吸附剂表面活性中心， 利用吸附剂表面的活性吸附中心对不同组分的吸附 能力差异而实现分离，吸附能力大小用吸附平衡常数 K表示
经典色谱法液相
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2.吸附等温线：一定温度下，某一组分固 定相和流动相之间达到平衡时，以Cs为 纵坐标，Cm为横坐标得到的曲线。
类型：线性、凸形、凹形等温线
经典色谱法液相
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CS CS
CS
A
B
A
CS
B
CS
CS
CS
A
B
CCm S
Cm
C CS
Cm Cm
Cm
吸附等温Cm 线
C C
C
CC C
tR tR tR
C C
C C
色谱C柱内溶液浓度的C 分布
LL
LL
L
CC
CC L
C
C
tt
t
t tR
tRtR
流出经曲典色线谱法t液相 tR
ttRR
C C
1.固定液的涂布与装柱： 装柱前，首先将 固定液与载体混合均匀
2.加样与洗脱：
加样方法：①试样配成浓溶液 ；② 试样溶液用
少量固定相吸附，待溶剂挥干后，加入柱内；
③用一块比色谱柱内径略小的圆形滤纸吸附试样
溶液，待溶剂挥发后，加入柱内