２０１１年１１月第１８卷第１１期　中国中医药信息杂志　・５５・　安乳颗粒质量标准研究　范彬　，石晓峰　，马趣环　，王东东２刘东彦。，宋薇。　（１．甘肃省医学科学研究院，甘肃兰州７３００５０；２．兰州大学，甘肃兰州７３００５０；３．甘肃中医学院，甘肃兰州７３００００）　摘要：目的建立安乳颗粒的质量控制方法。方法采用薄层色谱法对方中赤芍、当归、丹参、香附、乳香、　没药进行定性鉴别，采用高效液相色谱法分别对芍药苷及阿魏酸进行含量测定。芍药苷采用Ａｇｉ　ｌｅｎｔ　Ｃ　柱（４．６　ｉｎｔｏ　ｘ　２５０　ｍｍ，５　ｕｍ）色谱柱，流动相为乙腈一水（１　３：８７），检测波长２　３０　ｒｉｍ，流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３Ｏ℃。阿魏酸采用　０ｉａｍｏｎｓｉ１　Ｃ　（４．６　ｍｍ×１５０哪，５　ｕｍ）色谱柱，流动相为５Ｏ％甲醇一乙腈一Ｏ．１％冰醋酸（２５：５：７０），检测波长３２０　ｎｍ，　流速１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，柱温３５℃。结果在薄层色谱中能检测出上述６种主要药材；芍药苷在０．１２～１．２０　ｌａｇ范围内　有良好的线性关系（，＝０．９９９　８），平均回收率为９８．０７％，ＲＳＤ；１．０３％。阿魏酸在０．０２１　６～０．１２９　６　ｌａｇ范围内有良好　的线性关系（，＝０．９９９　６），平均回收率为９９．５２％，ＲＳＤ＝０．９９％。结论本方法简便、准确，可用于安乳颗粒的质量控　制。　关键词：安乳颗粒；薄层色谱法；高效液相色谱法；芍药苷；阿魏酸　ＤＯｌ：１０．３９６９／ｊ．ｉ　ｓ　ｓｎ．１００５—５　３０４．２０１１．１１．０２２　中图分类号：Ｒ２８４．１　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５—５３０４（２０１１）１１－００５５　０４　Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｏｒ　Ａｎｒｕ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ　ＦＡＮ　Ｂｉｎ　，ＳＨＩ　Ｘｉａｏ—ｆｅｎｇ　，ＭＡ　Ｑｕ—ｈｕａｎ　，ＷＡＮＧ　Ｄｏｎｇ—ｄｏｎｇｚ，　ＬＩＵ　Ｄｏｎｇ—ｙａｎ　，ＳＯＮＧ　Ｗｅｉ３｛１．Ｇａｎｓｕ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｌａｎｚｈｏｎ　７３００５０，Ｃｈｉｎａ；２．Ｌａｎｚｈｏｕ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，　Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００５０，Ｃｈｉｎａ：３．Ｇａｎｓｕ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆＴＣＭ，Ｌａｎｚｈｏｕ　７３００００，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ａｎｒｕ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｒａｄｉｘ　Ａｎｇｅｌｉｃａｅ　Ｓｉｎｅｎｓｉｓ，Ｒａｄｉｘ　Ｐａｅｏｎｉａｅ　Ｒｒｕｂｒａ，Ｓａｌｖｉａ　ｍｉｌｔｉｏｒｒｈｉｚａ　Ｂｇｅ，Ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ，Ｏｌｉｂａｎｕｍ　ａｎｄ　Ｍｙｒｒｈａ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｅｄ　ｂｙ　ＴＬＣ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ａｎｄ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．　Ｔｈｅ　Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃｌｓ（４．６　ｍｍＸ　２５０　ｍｍ，５　ｌａｍ）ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ，ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｗａｓ　ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ—ｗａｔｅｒ（１３：８７）ａｔ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３０℃，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　２３０　ｎｍ．Ｔｈｅ　Ｄｉａｍｏｎｓｉｌ　Ｃｌｓ（４．６　ｍｍ×１　５０　ｍｍ，５，ｕｍｌ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ，ｔｈｅ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　５０％ｍｅｔｈａｎｏｌ—ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ一０．１％ｇｌａｃｉａｌ　ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（２５：５：７０ｌ　ａｔ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０　ｍＬ／ｍｉｎ，ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　３５℃，ｔｈｅ　ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　３２０　ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ａｂｏｖｅ　ｍｅｎｔｉｏｎｅｄ　６　ｍａｉｎ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　ｃｒｕｄｅ　ｄｒｕｇｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＴＬＣ．Ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．１２—１．２０　ｌａｇ，ｒ：０．９９９　８．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９８．０７％，ＲＳＤ＝１．０３％．　Ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｓｈｏｗｅｄ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ａｔ　ｔｈｅ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０２　１　６—０．１２９　６　ｌａｇ．Ｔｈｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｗａｓ　９９．５２％，ＲＳＤ＝０．９９％．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｌｉａｂｌｅ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ａｎｒｕ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ａｎｒｕ　Ｇｒａｎｕｌｅｓ；ＴＬＣ；ＨＰＬＣ：ｐａｅｏｎｉｆｌｏｒｉｎ；Ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　安乳颗粒为临床经验方，由甘肃省医学科学研究院自制，　主要由柴胡、当归、赤芍、丹参等ｌ２味中药组成，具有软坚散　结、理气止痛、化血消痈之功效，对乳癖结块、乳腺增生症有　显著疗效。为进一步完善其质量标准，保证用药安全有效，本试　验采用薄层色谱法（ＴＬＣ）对方中赤芍、当归、丹参、香附、乳　香、没药进行定性鉴别，采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）分别对芍　药苷及阿魏酸进行含量测定。　１仪器与试药　紫外分析仪；超声波清洗器（上海超声波仪器厂产品）；　基金项目：甘肃省重大研发项目（ＧＫＳ００２－Ｆ０１－１４）；甘肃省重　点中医药科研项目（ＧＺＫ一２　００９－１１）　通讯作者：石晓峰，Ｔｅｌ：０９　３１—２６１４５２１—６０３９，Ｅ－ｍａｉｌ：Ｓｈｉｘｉａｏ　ｆｅｎｇ２００５＠ｓ　ｉｎａ．ｃｏｍ　Ａｇｉｌｅｎｔｌ１００高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司）；　Ａｇｉｌｅｎｔｉ１２０高效液相色谱仪（美国Ａｇｉｌｅｎｔ公司）８００型离心　沉淀器（上海手术仪器厂）；ＢＲＡＮＳＯＮＩＣ超声波清洗器（日本生　产）；ＡＥ２６０型万分之一电子天平（瑞士Ｍｅｔｔｌｅ公司）。硅胶　Ｇ／ＧＦ２５４薄层板实验室自制，甲醇和乙腈为色谱纯，水为双蒸　水，其余试剂均为分析纯。　阿魏酸（批号ｌ１０７７３—２００６１１），芍药苷（批号１１０７３６—　２００４２４），丹参素钠（批号ｌ１０８５５—２００８０９），Ⅱ一香附酮（批号　１１０７４８—２００７０９）供含量测定用；赤芍对照药材（批号　２１０９３　２００４０２），香附对照药材（批号１２１０５９—２００７０６），均由中　国药品生物制品检定所提供。乳香（产地索马里，批号　０８１０１００４），没药（产地索马里，批号０８０９０９０５），所用药材均由　兰州安泰堂药业有限公司提供，安乳颗粒样品和阴性样品由　甘肃省医学科学研究院分析实验中心自制。　５６・　ＣｈｉｎｅＳｅ　Ｊｏｕｒｎａ１　ｏｆ　Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｏｎ　ＴＣＭ　Ｎｏｖ．２Ｏ１１　Ｖｏ１．１　８　Ｎｏ．１１　２定性鉴别　２．１　当归　取奉品１０　ｇ，研细，加Ｉ％ＮａＨＣＯ　５０　ｍＬ，超声提取３次，每　次３０　ｍｉｎ，滤过，滤液用稀ＨＣＬ调ｐＨ至２～３，加乙醚２０　ｍＬ振　摇，共２次，合并乙醚液，挥干乙醚，残渣加甲醇１　ｍＬ使溶解，　作为供试品溶液Ⅲ；取不含当归的阴性样品ｌＯｇ，按上述方法制　得阴性样品溶液；另取阿魏酸对照品，加甲醇制成每１　ｍＬ约含　１　ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［２００５年版《中　华人民共和国药典》（一部）附录ⅥＢ］试验，吸取上述３种溶液　各５　Ｌ，分别点于同一硅胶ＧＦ２５４板上，以正已烷一乙醚一冰　乙酸（５：５：０．１）为展开剂，展开、取出、晾干、置紫外光　灯（３６５　ｎｍ）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位　置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性样品无相应斑点。　２．２赤芍　取本品１０　ｇ，研细，置索氏提取器中，加乙醚５０　ｍＬ，水浴回　流提取１　ｈ，弃去乙醚液，残渣加甲醇６Ｏ　ｍＬ水浴回流提取４　ｈ，　提取液浓缩至约３Ｏ　ｍＬ，过中性氧化铝柱（中性氧化铝８　ｇ装柱）　用甲醇６Ｏ　ｍＬ洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇１　ｍＬ溶解，　作为供试品溶液　；取不含赤芍的阴性样品１０　ｇ，按上述方法　制得阴性样品溶液；另取赤芍对照药材２　ｇ，加乙醇２Ｏ　ｍＬ，超　声提取２０　ｍｉｎ，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇１　ｍＬ使溶解，作为　对照药材溶液；再取芍药苷对照品，加乙醇制成每１　ｍＬ约含　１　ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［２００５年版《中　华人民共和国药典》（一部）附录ⅥＢ］试验，吸取上述４种溶液　各１Ｏ　ｕＬ，分别点于同…　硅胶Ｇ薄层板上，以氯仿一乙酸乙酯一甲　醇甲酸（４０：５：１０：０．２）为展开剂，展开、取出、晾干、喷以　５％香草醛硫酸溶液，于１０５℃下烘至斑点显色。供试品色谱中，　与对照药材及对照品色谱相应的位置显相同的蓝紫色斑点，阴　性样品无相应斑点。　２．３丹参　取本品１０　ｇ，研细，加甲醇４Ｏ　ｍＬ，超声提取３０　ｍｉｎ，滤过，　滤液蒸干，残渣加甲醇１　ｍＬ使溶解，作为供试品溶液；取不含　丹参的阴性样品１０　ｇ，按上述方法制得阴性样品溶液；取丹参　素钠对照品，加甲醇制成每ｌ　ｍＬ约含１　ｍｇ的溶液，作为对照品　溶液。照薄层色谱法［２００５年版《中华人民共和国药典》（一　部）附录ⅥＢ］试验，吸取上述３种溶液各５　ｐＬ，分别点于同一硅　胶Ｇ薄层板上，以氯仿一丙酮一甲酸（１０：４：０．６）为展开剂，展　开、取出、晾干，喷以１％铁氰化钾２％三氯化铁（１：１）显色，日　光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相　同的蓝色斑点，阴性样品无相应斑点。　２．４香附　取本品１０　ｇ，研细，加乙醚４Ｏ　ｍＬ，超声提取３０　ｍｉｎ，滤过，　挥干乙醚，残渣加甲醇１　ｍＬ使溶解，作为供试品溶液；取不含　香附的阴性样品ｌＯｇ，按上述方法制得阴性样品溶液：另取香　附对照药材１　ｇ，同法制成香附对照药材溶液。再取。一香附酮　对照品，加甲醇制成每１　ｍＬ约含１　ｍｇ的溶液，作为对照品溶液。　照薄层色谱法［２００５年版《中华人民共和国药典》（一部）附录　ⅥＢ］试验，吸取上述４种溶液各１Ｏ　ｕＬ，分别点于同一硅胶　ＧＦ２５４薄层板上，以苯一醋酸乙酯一冰醋酸（９５：５：５）为展开剂　展开、取出、晾干，置紫外光灯（２５４　ｒｉｍ）下检视。供试品色谱　中，在与对照药材及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的　斑点，阴性对照色谱中无相应的斑点。　２．５乳香、没药　取本品１０　ｇ，研细，加乙醚４０　ｍＬ’摇匀，浸泡过夜，超声提　取２Ｏ　ｍｉｎ，滤过，挥干乙醚，残渣加无水乙醇１　ｍＬ使溶解，作为　供试品溶液；按１／１０处方量制备不含乳香及没药的阴性样品，　按供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液；另取乳香药材１　ｇ　加无水乙醇２Ｏ　ｍＬ，超声提取２０　ｍｉｎ，制成乳香药材溶液；另取　没药药材１　ｇ，加无水乙醇２Ｏ　ｍＬ，超声提取２０　ｍｉｎ，制成没药　药材溶液。照薄层色谱法［２００５年版《中华人民共和国药典》　（一部）附录ⅥＢ］试验，吸取上述４种溶液各１Ｏ　ｕＬ，分别点于同　一硅胶ＧＦ２５４薄层板上，以石油醚一醋酸乙酯（４：１）为展开剂，　展开、取出、晾干，置紫外光灯下检视。供试品色谱中，在与药　材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照色谱中没　有相应的斑点。　３芍药苷的含量测定　３．１　色谱条件与系统适用性试验　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　Ｃ　柱（４．６　ｍｍＸ２５０　ｒ『ｌｒ『１，５　ｕｍ）；流动相：　乙腈一水（１３：８７）；检测波长：２３０　ｎｍ　；进样量：ｌＯ　ｕＬ；流　速：１．０　ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：３Ｏ℃。在上述色谱条件下，供试品中　芍药苷峰与其他峰分离度大于１．５，理论塔板数按芍药苷峰计　算应不低于３　０００。取芍药苷对照品溶液、供试品溶液、阴性　对照溶液各１Ｏ　ｕＬ，按上述色谱条件下进样，测定峰面积，结果　见图１。由图中可见供试品中芍药苷峰与对照品峰保留时间一　致，并且与样品中其他组分达到很好的分离，阴性对照溶液中　未出现相对应的峰。　…　…　１