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谷胱甘肽还原酶（glutathionereductase,GR）活性测定试剂盒使用说明
产品简介：
GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶，通常昆虫中GR被
TrxR取代，是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH，
有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用，此外GR
还参与抗坏血酸－谷胱甘肽循环途径。

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH，同时不断消耗NADPH；通过测定NADPH减少
量，即可测定GR活性。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、1ml比色皿、双蒸水
产品内容：
试剂一×1支，充分溶解于100ml双蒸水，4℃保存3个月
试剂二×1支，充分溶解于6ml双蒸水中，4℃保存3个月
试剂三×2支，临用前配制，每支充分溶解于3ml双蒸水中
操作步骤：
一、样品前处理：
取组织约0.1g，加1ml试剂二，冰上充分研磨，10000rpm4℃离心10min，取上清。
（如上清不清澈，再离心3min）

GR测定操作：
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测定前将试剂一于25℃水浴20min

二、测定操作表：
测定管空白管
试剂一
0.75ml0.85ml
试剂二
0.05ml0.05ml
样本
0.1ml/
试剂三
0.1ml0.1ml

迅速混匀，于340nm处测定3min内吸光值变化，第0s吸光值记为A1，第180s吸
光值记为A2。

GR活力计算：
GR活力单位定义：在25℃，pH8.0条件下，每毫克蛋白每分钟氧化1mmolNADPH的
酶量为1U（U/mgprot）。

计算公式：
GR酶活(U/mgprot)=(△A测定管-△A空白管)/3÷6.22×（V总/V样）×稀释倍数
×1000/Cpr=(△A测定管-△A空白管)×535.91×稀释倍数÷Cpr

△A=A1-A2，6.22：NADPH的毫摩尔消光系数，V总：反应总体积（ml），V样：所用样
品体积（ml），Cpr：蛋白浓度（mg/ml）。

注意事项：
（1）样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，匀浆液避免反复冻
融；
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（2）试剂三须现配现用，配置完后，置于冰上；

（3）测定前须先用1～2个样做预实验，确保180s内吸光值变化呈线性，哺乳动
物组织一般须用试剂一（生理盐水）稀释2～5倍；

（4）细胞中GR活性测定时，细胞数目须在300万-500万之间，细胞中GR的提取
时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞