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第四节
食用菌菌种制作
菌种分母种、原种和栽培种。通常也称一 级种、二级种、三级种。 一、母种制作 二、原种与栽培种制作
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一、母种制作
1、培养基制备 2、接菌 3、培养检验
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接 种
母
种
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母种培养基配制方法
配方
马铃薯－葡萄糖－琼脂培养基（PDA培养基） 马铃薯 200克 葡萄糖 20克
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一、菌种分离概念
概念：将子实体的局部组织或孢子移接在斜面 试管培养基上，获得纯培养菌丝的操作称为菌 种分离。菌种分离主要指一级种(母种)的分离。 有些与高等植物共生的菌根菌，如红菇、 松菇以及有些要在动物（如白蚁）存在下才产 生子实体的菌类，因营养条件复杂，在目前实 验条件下，较难在简单的培养基上获得纯菌种。
卧式高压灭菌锅
卧式高压灭 菌锅容量大、盛 物多，灭菌彻底， 效果好。
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常压蒸汽灭菌灶
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无菌室（接种室）
植物细胞培养及产业化应用
接 种 室
超净工作台
双人
单 人
接种箱
接种箱是用木材与玻璃 制成密闭箱。有单人式或双 人对接式。接种箱前后斜面 为玻璃窗，便于操作时观察， 可开启，以便取放物品。玻 璃窗下的木板有一对椭圆形 开孔，操作孔装有白布袖套， 一端固定在圆孔上，另一端 套口用松紧带箍住操作者的 手腕 · ，以防杂菌进入。箱 内可安装20W日光灯和 30W 紫外线灯管。
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二、菌种分离的方法
整菇插种法
孢子弹射分离法
菌褶涂抹法
钩悬法 贴附法
菌 种 分 离
孢子分离法
孢子印分离法
平板稀释法
单孢子分离法
连续稀释法
空中孢子捕捉法 子实体分离法
组织分离法 菇木分离法
菌核分离法
菌索分离法
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（一）孢子分离法
无菌操作条件下使孢子在适宜的培养基上 萌发，长成菌丝体而获得纯菌种的方法称为孢 子分离法。
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一、菌种的概念
菌种（广义）：是指以保藏、试验、栽培和其 它用途为目的，具有繁衍能力，遗传特性相 对稳定的孢子、组织或菌丝体及其营养性或 非营养性的载体。 菌种（狭义）：是指以适宜的培养基为载体进 行纯培养的菌丝体，也就是培养基质和菌丝 体的联合体。或者说是指人工培养，并供进 一步繁殖的食用菌的纯菌丝体。
菌种袋
颈圈
菌种瓶
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2、灭菌和消毒条件
（1）灭菌设备 高压蒸汽灭菌锅 常压蒸汽灭菌灶 （2）消毒条件
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手提式高压灭菌锅
手提式高压灭菌锅 的容积小，适用于试管 培养基、三角瓶或平皿、 无菌水、少量菌种瓶及 一些器皿的灭菌。
立式高压灭菌锅
立式高压灭菌锅 容量大，可用于菌 种瓶、罐头瓶及塑 料袋装培养基的灭 菌。
麦粒种
原种及栽培种培养基
原料装袋（瓶）
原料装袋（瓶）
栽培种的装袋
原种、栽培种培养基的灭菌
高压灭菌 1.5kg/cm2（152kpa、128.1℃） 灭菌1~2h
灭菌池
常压灭菌 100℃灭菌10h左右→再闷12h 要求 攻头、控中、保尾
母种
原种
接 原 种
用接种耙取蚕豆大母种 放于瓶中料面上
三、优良菌种的标准
1、无杂菌污染 2、菌种内有足够的菌丝量 3、菌种的菌丝体状态正常 4、菌龄适中
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第二节 食用菌制种的条件
一、食用菌制种程序 二、制种的设备和条件
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一、制种程序
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二、制种的设备和条件
1、配料设备 2、灭菌消毒条件 3、接种条件 4、培养条件 5、菌种保藏设备 6、菌种厂的布局
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五、菌种保藏设备
保藏母种：冰箱（4℃）左右 保藏原种、栽培种： 远离污染源 贮 低温（4~8℃） 藏 干燥、通风、遮光 室 用前要严格消毒杀虫 地面常撒石灰粉
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六、菌种厂的布局
根据菌种生产流程合理设置
仓库
配料室
灭菌室
接种室
门 口
晒料场 栽培棚 办公室
培养室
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第三节
食用菌菌种分离
一、菌种分离概念 二、菌种分离方法 三、菌种分离提纯 四、出菇试验
（1）整菇插种法
孢子收集器 来收集孢子
（1）整菇插种法
2-3 天 后 孢 子 散 落在培养皿中，加入 无菌水，用针筒吸取 孢子液，接种在斜面 培养基中央，置于 22-26℃ 恒 温 箱 中 培 养即可。
（2）钩悬法
在生产上，采集木耳、银 耳孢子常用此法，伞菌也可采 用此法。 先将新鲜成熟的耳片用无 菌水冲洗，然后用无菌纱布将 水吸干，取一小片挂在灭菌的 钩子上(伞菌消毒后挂上）， 钩子的另一端挂在三角瓶口。
紫外灯 操作孔 观察窗
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接种工具
A、接种针 B、接种钩 C、接种环 D、接种铲 F、接种耙 G、接种刀 H、接种勺 I、接种镊
E、接种锄
液体菌种接种枪
固 体 菌 种 接 种 枪
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培 养 室
培养架
恒温培养箱
在制作一级 种和少量二级种时， 可采用电热恒温箱 或隔水式电热恒温 箱，目的是控制温 度，适温培养。

3、菌索分离法
它是从食用菌菌索种分离培养得到纯菌丝的方法。如 蜜环菌、假蜜环菌等食用菌在人工培养条件下不易形成 子实体，也不产生菌核，它们是以特殊结构的菌索来进 行繁殖的，因此这类菌可用菌索分离菌种。 将风干的菌索放入灭菌消毒过的接种箱中或超净工 作台上，挑取生命力旺盛的菌索尖端部分，用75%酒精 棉球擦洗表面，以无菌的解剖刀除去菌索的黑色的外皮 层（即菌鞘），抽出其白色菌髓部分，将其剪成小段， 移接到培养基中央。在25℃左右的条件下培养，菌丝生 长出来后，经几次提纯转管后即可制成母种。菌索是生 长在枯木或埋在土中的，为了预防杂菌污染，在配制培 养基时，常加入青霉素或链霉素，浓度为40mg/kg左 右，以抑制细菌的生长繁殖，从而提高分离的成功率。
琼脂
pH5.5－6
20克
水
1000毫升
配制方法
1、称量
2、土豆加热煮沸
3、添加其它营养物质，调节pH值 4、分装试管
5、塞棉塞
6、灭菌
7、摆斜面
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土豆
削 皮
切 块
切 块
称量土豆
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添加土豆煮沸
过
滤
过
滤
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称量葡萄糖称量琼脂添加琼脂返回加 热
分装试管
分装好的试管
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4、单孢子分离法
进行单孢子分离后，在人工控制的条件下，使两个优良品 系的单孢子进行杂交，从而培育出新品种。
（1）平 板 稀 释 法 挑取少许孢子在无菌水中形成孢子悬浮液，取几 滴涂于培养基上，用无菌玻璃三角架推平。经 48-72h 后，镜检孢子萌发情况。在单个孢子旁做好标记，然 后将其转接到斜面培养基上，待菌落长到lcm左右时进 行镜检，观察有无锁状联合；初步确定是否是单核菌 丝。
菌种按生产程序 一级种(母种）
二级种（原种）
三级种(栽培种）
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固体 菌种
概念 用固体基质培养的菌种 设备、工艺简单 特点 菌龄长而不一 发酵率较低
概念 用液体基质培养的菌种 液体 设备、工艺较复杂 菌种 菌龄短而一致 特点 发酵率高 易老化和自溶
生 长 势 的 区 别
液体菌种
固体菌种
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第五章 食用菌菌种生产
第一节 第二节 第三节 第四节 第五节 第六节 食用菌菌种概述 食用菌制种的条件 食用菌菌种分离 食用菌菌种制作 菌种质量的鉴定 菌种保藏与复壮
食用菌栽培一般包含几个步骤：
孢子
萌发
培养基质
菌丝体
分离 菇体组织
菌 种
子实体
第一节 食用菌菌种概述
一、菌种概念 二、菌种类型 三、优良菌种的标准
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切片机
切片机是将本 材切成规格木片 的专用机械，是 食用菌培养基质 粉碎处理的预前 工序设备。
粉碎机
粉碎机是将木 片、秸秆等原料粉 碎成一定粗细度碎 屑的专用机械。
切片粉碎两用机
自动上料加水原料搅拌机
搅拌机
搅拌机 是将培养料 通过搅拌使 其分布充分 均匀的专业 机械。
装袋机
装瓶机
木霉
链孢霉
曲霉
根霉
继续培养……
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第五节 菌种质量的鉴定
鉴定 项目 形态特征、生理特性、 栽培性状、经济效益等
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2、菌褶涂抹法
将伞菌子实体用75％酒精表面消毒，按无菌操作 用接种环直接插入两片菌褶之间，轻轻地抹过褶片表 面，然后用划线法涂抹于试管培养基上。
3、孢子印分离法
取成熟子实体经表面消毒后，切去菌柄，将菌 褶向下放置于灭过菌的有色纸上，在20-24℃静置一 天，大量孢子落下形成孢子印，然后移少量孢子在 试管培养基上培养。
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1、子实体分离法
分离的方法和步骤： 种菇的选择—→种 菇的消毒—→切块 接种—→培养纯 化—→出菇试验— →母种
1、子实体分离法
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2、菌核分离法
它是从食用菌菌核分离培养获得纯菌丝的一种方法。 如猪苓、茯苓、雷丸等食用兼药用菌的子实体不易采集到， 而其营养贮藏器官——菌核则较易获得。 菌核分离与子实体组织分离的方法很相似。即把菌核 表面洗净，放入经灭菌消毒的接种箱中或超净工作台上， 用 0.1% 升汞溶液或 75% 酒精浸泡 0.5~1min ，用无 菌水冲洗数次，再用无菌解剖刀把菌核从中切成两半，在 中心位置挑取黄豆大一小块组织，接在斜面培养基中央， 在 25℃下培养。当接种块萌发出菌丝后，挑取无杂菌、 长势旺的菌丝体转管培养后即作母种。由于菌核是食用菌 的营养贮藏器官，其中大部分是多糖物质，有少部分的菌 丝，因此接种块应挑取得大些，否则有时就长不出菌丝体 返回 来。