广东畜牧兽医科技２０１１年（第３６卷）第３期　兽医临床　・２１・　三例禽巴氏杆菌病的诊断　巫月生，齐冬梅，张毓金，王卓明　（广东永顺生物制药有限公司，广东广州　５１　１３５６）　摘要：通过对广州郊区３个发病鸡场进行病原茵的分离培养、涂片镜检、生化特性鉴定、致病性、　药敏等试验，结果表明，分离的５株菌为多杀性巴氏杆菌，诊断为禽巴氏杆菌病。其对壮观霉素、呋喃　妥因、头孢三嗪均高度敏感，对卡那霉素、红霉素、新霉素、痢特灵、头孢噻肟均中度敏感，对四环素、　氟哌酸、杆菌肽、链霉素、林可霉素、青霉素、庆大霉素均低度敏感或完全耐药　关键词：禽多杀性巴氏杆菌；分离鉴定；药敏试验　中图分类号：￥８５２．６１＋２　文献标识码：Ａ　文章编号：１００５—８５６７（２０１１）０３—００２卜Ｏ３　禽霍乱（ＦＣ）又称禽巴氏杆菌病，禽出血性败　血症（俗称禽出败），是由多杀性巴氏杆菌引起的　家禽和野禽的急性败血性传染病，在世界各地均　有不同程度的发生与流行。因其具有发病率和死　亡率高的特点，常给养禽生产造成不可估量的经　济损失，是美国农业部（ＵＳＤＡ）兽医部门重点研究　的四种传染病之一［１］，该病在我国亦同样存在和　发生，给养殖户造成一定的经济损失。　２０１０年１２月，广州郊区一些养鸡场，６０￣７０　天龄鸡只发生严重呼吸困难、口鼻流出粘液、体温升　高至４３￣４４℃、鸡冠与肉髯发钳及肿胀、腹泻，且　伴随急性死亡。后经剖检，可见病死鸡的腹膜、皮下　组织及腹部脂肪均有出血性小点，心外膜、心冠脂肪　出血尤为明显，肺充血和出血。最为明显的是肝呈棕　色或黄棕色，肝表面散布有许多灰白色、针尖状坏死　点。笔者从３个鸡场分离鉴定了５株多杀性巴氏杆　菌，同时进行药敏试验。现将试验报告如下：　１　材料　１．１　主要培养基及试剂　马丁肉汤，ＳＰＦ鸡血清，马丁琼脂平皿，鲜血　琼脂斜面，鲜血琼脂平皿，均由广东永顺生物制药　有限公司培养基组提供，微量生化发酵管和药敏　试纸购自杭州天和微生物试剂有限公司。　１．２试验动物　试验鸡为２个月龄左右ＳＰＦ鸡；试验小鼠为　１８￣２２　ｇ健康小鼠，均由本公司质检部提供。　２　方法　２．１分离培养　无菌挑取病料接种到马丁琼脂平皿、鲜血琼脂　收稿日期：２０１１—０３—２５　平皿中，３７℃培养１８￣２２　ｈ，挑取直径为１～２　ｍｍ、　灰蓝色、边缘整齐、隆起的菌落，划马丁琼脂平皿　作进一步纯化和荧光观察，同时涂片染色镜检。　２．２生化试验　将已分离纯粹的待检菌再划马丁琼脂平皿，　３７℃培养１８￣２２　ｈ，然后挑取单个菌落接种到　微量生化发酵管（预先加入ＳＰＦ鸡血清至３％）中，　３７℃培养４８　ｈ，观察结果。　２．３致病性试验　２．３．１对小鼠致病力试验将纯菌的鲜血琼脂　斜面培养物用生理盐水洗下制成菌悬液，用倾注　平板培养法瞳　分别测定各菌株的活菌数（ＣＦＵ），每　株菌于腹部皮下注射小鼠６只，每只０．２　ｍＬ（含　活菌数２　ＣＦＵ）观察小鼠发病死亡情况，并从死亡　小鼠肝脏中进行病原菌分离。　２．３．２本动物试验按２．３．１方法制备菌悬液，　各于腿部肌肉注射鸡５只，每只２　ｍＬ（含活菌数　１０　ＣＦＵ），观察鸡临床发病情况，并从死亡鸡心血　及肝脏中进行病原菌分离。　２．４药敏试验　将待检纯菌接种到马丁肉汤中（含溉ＳＰＦ鸡　血清），３７℃、１５０　ｒ／ｍｉｎ摇床培养１８￣２２　ｈ，取菌　液涂布于马丁琼脂平板，待液体稍干后，将药敏试　纸平贴于琼脂表面，３７℃培养２４　ｈ，观察结果。　３　结果　３．１　分离培养　经马丁琼脂平皿作进一步纯化后，分离到５　菌株。各菌株在马丁琼脂平皿上的菌落经４５。折　

射光照射下，置低倍显微镜观察可见到：菌落的荧　・２２・　兽医临床　三例禽巴氏杆菌病的诊断一巫月生，等　光均呈桔红色；后经涂片、染色、镜检，可观察到各　菌株形态均为革兰氏阴性，两端钝圆，中央微凸的　球杆状菌，单个存在，有时成对排列；用瑞氏，姬姆　萨氏染色、镜检，则可见各菌体均多呈卵圆形，呈　典型的两极着色，中央部分着色较浅，很像两个并　列的球菌，呈“冒号’’样。　３．２生化试验　将分离的５株菌在马丁琼脂平皿的单个菌落　各自接种到ｌ组微量生化发酵管中，３７℃培养　４８　ｈ，试验结果表明５株菌均可分解葡萄糖、甘露　糖、蔗糖、阿拉伯糖、果糖、木糖、甘露醇，产酸不产　气；能还原硝酸盐；可形成靛基质，Ｈ。ｓ、氧化酶呈　阳性；不发酵乳糖、麦芽糖、鼠李糖；甲基红试验　（ＭＲ）、ＶＰ试验、尿素酶均呈阴性。结果见表１。　３．３对小鼠致病力　将分离的５株菌纯培养物注射小鼠，隔日观　察，小鼠全部死亡。取死亡小鼠的肝脏病料进行病　原菌分离，均分离到较纯的同源菌。结果见表２。　表１　５株菌生化试验结果　

１）：“＋”表示：阳性；“一”表示：阴性。　表２　５株菌对小鼠致病力试验　

３．４对ＳＰＦ鸡致病力　将分离的５株菌纯培养物注射鸡，除菌株３　在攻毒２４　ｈ后全部死亡外其余菌株１、２、４、５攻　毒４８　ｈ后死亡８０％以上，剩下的鸡精神萎靡，排　绿色稀粪；对死亡鸡只进行剖检，可见腹膜皮下组　织及腹部脂肪有出血小点，心外膜、心冠脂肪出血　尤为明显，肝脏表面散布有许多灰白色、针尖状坏　死点：取死亡鸡只心血、肝脏等病料进行病原菌分　离，均可分离到大量、较纯的同源菌。结果见表３。　表３　５株菌对ＳＰＦ鸡致病力试验　分离株动　莹动　龄攻毒部位　株１　株２　株３　株４　株５　６７　腿部肌肉　６７　腿部肌肉　６７　腿部肌肉　６７　腿部肌肉　６７　腿部肌肉　１０　４／５　１０　２／５　１０　５／５　１０　３／５　１０　３／５　３．５药敏试验　共检测了２１种药物，高度敏感的有：壮观霉　素、呋喃妥因、头孢三嗪；中度敏感的有：卡那霉　素、红霉素、新霉素、痢特灵、头孢噻肟；低度敏感　或完全耐药的有：四环素、氟哌酸、杆菌肽、链霉　素、林可霉素、青霉素、庆大霉素。结果见表４。　３．６诊断　根据病鸡剖检病变，分离菌的培养特性、生化　特性、致病性等试验结果，诊断为禽巴氏杆菌病。　４小结与讨论　４．１　通过对广州郊区３个发病鸡场进行病原菌　的分离培养、涂片镜检、生化特性鉴定、动物回归　等试验，分离的５株菌均为多杀性巴氏杆菌，结合　其临床症状、解剖后的病理变化，诊断为禽巴氏杆　菌病（禽霍乱）。　４．２从表１、２可看出，５株分离菌的生化特性完全　一致，且２４　ｈ内全部致死小鼠。但表３结果显示菌　株１、３、５与菌株２、４对ＳＰＦ鸡的致病性存在一定　差异，表明与禽霍乱相关的多杀性巴氏杆菌的致病　力或毒力较复杂，且常发生变化。这主要取决于菌　株差异、宿主的品种及个体、菌株或宿主内部的改　变及二者之间接触的条件＿１］。由于我们未进行血清　学分型，尚不明确各分离菌株的血清型是否一致。　４．３过去常用的青霉素、链霉素、庆大霉素等对　

各菌株均不敏感，壮观霉素、呋喃妥因、头孢三嗪　三例禽巴氏杆菌病的诊断一巫月生，等　兽医临床　・２３・　表４　５株茵药敏试验结果　

１）：以上测得的各药剂数值为其溶菌圈的直径值　等则高度敏感，卡那霉素、红霉素、新霉素、痢特灵　等中度敏感。由于长期使用一些抗菌药，特别是有　的鸡场大剂量滥用药物，致使大量菌株产生抗药　性［３］，在抗菌药物治疗和预防方面效果不佳。因　此，在选择抗菌药物时，最好先进行药敏试验。　夺・夺・夺・牛・夺・孛・夺・夺・寺・夺・夺　参考文献：　［１］［美］Ｓａｉｆ　Ｙ　Ｍ．苏敬良，高福，索勋，译．禽病学［岫．第ｌ１版　北京：中国农业出版社，２００５：７４６—７５１．　［２］王明俊．兽医生物制品学［Ｍ］．北京：中国农业出版社，１９９６：２９６　［３］王卓明，吴佩婵，李幼博，等．４２株禽巴氏杆菌特性的研究［７］　中国预防兽医学报，１９９９，（３）：２２７．　・夺・争－争・・争－・孛・夺・争・争・｛　・夺・孛・寺・夺・孛・孛・夺・夺　（上接第１２页）　变膜ＡＴＰ酶活性。以上研究基本集中在ｚｎｚ　对Ｎａ　、　Ｋ＋－ＡＴＰ酶活性影响，但具体的作用途径还有待进一　步研究。　３有待进一步研究问题　目前锌对能量代谢的研究还比较少，当前在　畜牧生产一线，高剂量的氧化锌用于断奶仔猪上　防腹泻及促生长效果比较明显，但是具体作用机　制不清，是否与能量代谢有关还有待进一步研究。　参考文献：　［１］Ｏｓｔｅｒｍｅｉｅｒ　Ｃ，１ｗａｔａｒ　Ｓ，Ｍｉｃｈｅｌ　Ｈ．Ｄｉｓｔｉｎｃｔ　ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ　ｉｎ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ｍａｓｓ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｃｈａｒｃｔｅｒｉｚｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｏｄｅｌｓ　ｏｆ　Ａｐｏｐｔｏｓｉ［Ｊ］．Ｃｕｒｒ　Ｏｐｉｎ　Ｓｔｒｕｃｔ　Ｂｉｏｌ，１９９６，６（４）：４６０—４６６．　［２］Ｈａｒｐｅｒ　Ｅ。Ａｎｔｏｎｉｏｕ丸Ｃｅｌｌｕｌａｒ　ｅｎｅｒｇｙ　ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ　ｏｆ　ｕｎｃｏｕｐｌ　ｉｎｇ啪．Ｊ　Ａｎｉｍ　Ｓｃｉ，２００２，８０：　９０－９７．　［３］Ｌｉｎｇ　Ｙ　Ｈ，Ｌｉｅｂｅｓ　Ｌ。Ｚｏｕ　Ｙ　Ｙ，ｅｔ　ａ１．Ｒｅａｃｔｉｖｅ　Ｏｘｙｇｅｎ　Ｓｐｅｃｉｅｓ　Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ｍｉｔｏｃｈｈｏｎｄｒｉａｌ　Ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　Ｒｅｓｐｏｎｓｅ　ｔｏ　Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ，ａ　Ｎｏｖｅｌ　Ｐｒｏｔｅａｓｏｍｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ　Ｈｕｍａｎ　Ｈ４６０　Ｎｏｎ—ｓｍａｌ１　Ｃｅｌ１　Ｌｕｎｇ　Ｃａｎｃｅｒ　Ｃｅｌｌａ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２００３，２７８（３６）：３３７１４．　［４］Ｂｏｓｓ　０，Ｍｕｚｚｉｎ　Ｐ．Ｔｈｅ　ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎｓ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，１９９８，１３９：１—９．　［５］Ｂｏｕｃｈａｒｄ　ｅ　Ｐｅｒｕｓｓｅ　Ｌ　Ｃｈａｇｎｏｎ　ｙｅ　ｅｔ　ａ１．１　ｉｎｋａｇｅ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｍａｒｋｅｒｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｖｉｃｉｎｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ２　ｇｅｎｅ　ａｎｄ　ｒｅｓｔｉｎｇ　ｍｅｔａｂｏｌｉｃ　ｒａｔｅ　ｉｎ　ｈｕｎｍａｎｓ［Ｊ］．Ｈｕｍ　Ｍｏｌ　Ｇｅｎｅｔ，１９９７，（６）：１８８７—１８８９．　［６］Ｗａｌｄｅｒ　Ｋ，Ｎｏｒｍａｎ　Ｒ　Ａ，Ｈａｎｓｏｎ　Ｒ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ　ｂｅｔｗｅｅｎ　ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ　ａｎｄ　ｅｎｅｒｇｙ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｂｅｓｉｔｙ　ｉｎ　ｐｉｍａ　ｉｎｄｉａｎｓ［Ｊ］．Ｈｕｎ　Ｍｏｌ　Ｇｅｎｅｔ，　１９９８．（７）：１４３１－１４３５．　［７］Ｃｌａｍｐｈａｍ　Ｊ　Ｃ，Ａｒｃｈ　Ｊ　Ｒ　Ｓ．Ｍｉｃｅ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｕｎｃｏｕｐｌｉｎｇ　Ｐ　ｒｏｔｅｉｎ——３　ｉｎ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｅｌｅ　ａｒｅ　ｈｙｐｅｒ—　ｐｈａｇｉｃ　ａｎｄ　ｌｅａｎ［Ｊ］．Ｎａｔｕｒｅ，２０００，４０６：４１５—４１８．　［８］Ｍａｔｓｕｄａ　Ｊ，Ｈｏｓｏｄａ　Ｋ．Ｃｌｏｎｉｎｇ　ｏｆ　ｒａｔ　ｕｎｃｏｕｐｌ　ｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　２　ａｎｄ　ｕｎｃｏｕｐｌ　ｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ一３　ｃＤＮＡｓ：ｔｈｅｉｒ　ｇｅｎｅ　ｅｘｐｒｅｓ—　ｓｉｏｎ　ｉｎ　ｍｉｃｅ　ｆｅｄ　ｈｉｇｈ　ｆ　ａｔ　ｄｉｅｔ［Ｊ］．ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔｅｒｓ，１９９７，　４１８：２００—２０４．　［９］Ｓｃｈｒａｕｗｅｎ，Ｘｉａ，Ｂｏｇａｒｄｕｓ，ｅｔ　ａ１．Ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｍｕｓｃｌｅ　ｕｎｃｏｕｐ一　１ｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ　３　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｓ　ａ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ　ｏｆ　ｅｎｅｒｇｙ　ｅｘｐｅｎｄｉｔｕｒｅ　ｉｎ　Ｐｉｍａ　Ｉｎｄｉａｎｓ［Ｊ］．ｄｉａｂｅｔｅｓ．２００７，４８（４）：　１４６—１４９．　［１Ｏ］祁鸣．Ｎａ　Ｋ＋－ＡＴＰ酶特性研究与应用［Ｊ］．生物化学与生物　物理进展，１９９７，（３）：２３．　［１　１］周琳，李哲泓．锌对异丙基肾上腺素所致大鼠心肌损伤和线粒体　膜流动性改变的保护作用咖．医学研究，２００２，２１（１）：２０—２２．　［１２］Ｓｅｎｉｏｒ　Ａ　Ｅ．Ｔｉｇｈｔｌｙ　ｂｏｕｎｄ　ｍａｇｎｅｓｉｕｍ　ｉｎ　ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ｔｒｉｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ　ｆｒｏｍ　ｂｅｅｆ　ｈｅａｒｔ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９７９，２５４：ｌ１３１９—１１３２Ｚ　［１３３　Ｄａｇｇｅｔｔ　Ｓ　Ｇ。Ｇｒｕｙｓ　Ｋ　Ｊ，Ｓｃｈｕｓｔｅｒ　Ｓ　Ｍ．Ｍｅｔａｌ　ｉｎｔｅｒａｃ—　ｔｉｏｎｓ　ｗｉｔｈ　ｂｅｅｆ　ｈｅａｒｔ　ｍｉｔ０ｃｈ０ｎｄｒｉａ１　ＡＴＰａｓｅ［Ｊ］．Ｔｈｅ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８５，２６０：６２１３—６２１８．　［１４］Ｂｒｏｗｎ　Ａ　Ｍ，Ｋｒｉｓｔａｌ　Ｂ　Ｓ，Ｅｆｆｒｏｎ　Ｍ　Ｓ．Ｃａｓｐａｓｅ—ｌ　ａｎｄ一３　ａｒｅ　ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌｌｙ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｉｎ　ｍｏｔｏｒ　ｎｅｕｒｏｎ　ｄｅａｔｈ　ｉｎ　Ｃｕ，Ｚｎ　ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ　ｄｉｓｍｕｔａｓｅ—ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｆａｍｉ１ｉａｌ　ａｍｙｏｔｒｏｐｈｉｃ　ｌａｔｅｒａｌ　ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｃｈｅｍ，２０００，２７５：１３４４１—１３４４７．　［１５］Ｂｅｒｒｙ　Ｅ　Ａ，Ｚｈａｎｇ　ｚ，Ｂｅｌ１ａｍｙ　Ｈ　Ｄ．Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃ　ｌｏｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｗｏ　Ｚｎ２＋一ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ａｖｉａｎ　ｃｙｔｏｃｈｒｏｍｅ　ｂｃ１　ｃｏｍｐｌｅｘ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｉｍ　Ｂｉｏｐｈｙｓ　Ａｃｔａ，　２０００，１４５９：４４０—４４８．　［１６］曹琰，白雪涛．铜锌对大鼠神经元细胞色素氧化酶（复合物　ＩＶ）活力的影响［Ｊ］．环境与健康杂志，２００３，２０（６）：３３１—３３３．　［１７］韩军花．锌对红细胞膜ＡＴＰ酶活性影响的研究［Ｊ］．卫生研　究，２００１，３０（１）：４７—４９．　［１８］丁虹，陈建华，彭仁秀．锌对正常小鼠的脏器Ｎａ、Ｋ－ＡＴＰ酶、　Ｃａ　、Ｍｇ　ＡＴＰ酶活性的影响［Ｊ］．卫生研究，１９９８，２７（１）：４４．