肝胆外科杂志２０１３年１０月第２１卷第５期Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＨｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌ，２１，Ｎｏ．５，Ｏｃｔ．２０１３　３９１　ｔｈｙｌｎｉｔｒｏｓａｍｉｎｅ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｅａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎ　Ｏｐｉｓｔｈｏｒｃｈｉｓ　ｖｉｖｅｒｒｉｎｉ—ｉｎｆｅｃｔｅｄ　Ｓｍａｎ　ｇｏｌｄｅｎ　ｈａｍｓｔｅｒｓ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，１９７８，３８　（１２）：４６３４—４６３９．　１８　Ｐｅｎｇ　ＮＦ，Ｌｉ　ＬＱ，Ｑｉｎ　ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｃｌｉｎｉｃｏ－　ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ｆｏｒ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎ　Ｓｏｕｔｈｅｒｎ　Ｃｈｉｎａ：ａ　ｐｏｓｓｉｂｌｅ　ｒｏｌｅ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ．Ａｎｎ　Ｓｕｒｇ　Ｏｎｃｏｌ，２０１　１，　ｌ８（５）：１２５８—１２６６．　１９　Ｚｈｏｕ　Ｈ，Ｗａｎｇ　Ｈ，Ｚｈｏｕ　Ｄ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ—ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｉｎｔｒａ—　ｈｅｐａｔｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｍａｙ　ｈｏｌｄ　ｃｏｍＩＤｏｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｆｏｒ　ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．Ｅｍ‘Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２０１０，４６　（６）：１０５６—１０６１．　２０　Ｌｅｅ　ＣＨ，Ｃｈａｎｇ　ＣＪ，Ｌｉｎ　ＹＪ，ｅｔ　ａ１．Ｖｉｒａｌ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｉｎｔｒａｈｅ—　ｐａｔｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｅｉｎｏｍａ　ｓｈａｒｅｓ　ｃｏｌｎｉＴｌＯｎ　ｄｉｓｅａｓｅ　ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ　ｗｉｔｈ　ｈｅｐａ—　ｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｂｒ　Ｊ　Ｃａｎｃｅｒ，２００９，１００（１　１）：１７６５—１７７０．　２１　Ｌｅｅ　ＴＹ，Ｌｅｅ　ＳＳ，Ｊｕｎｇ　ＳＷ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｉｎ－　ｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎ　Ｋｏｒｅａ：ａ　ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｔｕｄｙ．Ａｍ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００８，１０３（７）：１７１６—１７２０．　２２　Ｓｈａｉｂ　ＹＨ，Ｅｌ—Ｓｃｒａｇ　ＨＢ，Ｄａｖｉｌａ　ＪＡ，ｅｔ　ａ１．Ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔ—　ｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ：ａ　ｃａｓｅ－ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｔｕｄｙ．　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，２００５，１２８（３）：６２０—６２６．　２３　Ｙａｍａｍｏｔｏ　Ｓ，Ｋｕｂｏ　Ｓ，Ｈａｌ　Ｓ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ａｓ　ａ　ｌｉｋｅｌｙ　ｅｔｉｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｅａｒｃｉｎｏｍａ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｓｃｉ，２００４，　９５（７）：５９２—５９５．　２４　Ｅ１一Ｓｅｒａｇ　ＨＢ，Ｅｎｇｅｌｓ　ＥＡ，Ｌａｎｄｇｒｅｎ　Ｏ，ｅｔ　ａ１．Ｒｉｓｋ　ｏｆ　ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　ａｎｄ　ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ　ｃａｎｃｅｍ　ａｆｔｅｒ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ：Ａ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ－　ｂａｓｅｄ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｕ．Ｓ．ｖｅｔｅｒａｎｓ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００９，４９（１）：１１６—　１２３．　２５　Ｄｏｎａｔｏ　Ｆ，Ｇｅｌａｔｔｉ　Ｕ，Ｔａｇｇｅｒ　Ａ，ｅｔ　ａ１．Ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｅ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏ－　ｍａ　ａｎｄ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ａｎｄ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ，ａｌｃｏｈｏｌ　ｉｎｔａｋｅ，ａｎｄ　ｈｅｐａｔｏ－　ｌｉｔｈｉａｓｉｓ：ａ　ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　Ｉｔａｌｙ．Ｃａｎｃｅｒ　Ｃａｕｓｅｓ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，２００１　１２（１０）：９５９—９６４．　２６　Ｔａｏ　ＬＹ，Ｈｅ　ＸＤ，Ｑｕ　Ｑ，ｅｔ　ａ１．Ｒｉｓｋ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｆｏｒ　ｉｎｔｒａｈｅｐａｔｉｃ　ａｎｄ　ｅｘｔｒａ—　ｈｅｐａｔｉｃ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａ　ｃａｓｅ—ｃｏｎｔｒｏｌ　ｓｔｕｄｙ　ｉｎ　Ｃｈｉｎａ．Ｌｉｖｅｒ　Ｉｎｔ，　２０１０，３０（２）：２１５—２２１．　２７　Ｓｉｒｉｃａ　ＡＥ．　Ｃｈ０ｌａｎ　０ｃａｒｃｉｎ０ｍａ：ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ　ｆｏｒ　ｃｈｅ－　ｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｒａｐｙ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００５，４１（１）：５—１５．　２８　Ｂｌｅｃｈａｃｚ　Ｂ，Ｇｏｒｅｓ　ＧＪ．Ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　ｐａｔｈｏｇｅｎｅ・　ｓｉｓ，ｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２００８，４８（１）：３０８—　３２１．　２９　Ｚｏｕ　ＳＱ，Ｑｕ　ＺＬ，Ｌｉ　ＺＦ，ｅｔ　ａ１．Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｂ　ｖｉｒｕｓ　Ｘ　ｇｅｎｅ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ｈｕ—　ｍａｎ　ｔｅｌｏｍｅｒａｓｅ　ｒｅｖｅｒｓｅ　ｔｒａｎｓｅｒｉｐｔａｓｅ　ｍＲＮＡ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｎｏｒｍａｌ　ｈｕｍａｎ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｅｙｔｅｓ．Ｗｏｒｌｄ　Ｊ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ，２００４，１０　（１５）：２２５９—２２６２．　３Ｏ【Ｊｉ　Ｔ，Ｌｉ　Ｄ，Ｃｈｅｎｇ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ—ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｔｒａｎｓｉｔｉｏｎ　ｉｎ—　ｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ｈｅｐａｔｉｔｉｓ　Ｃ　ｖｉｒｕｓ　ｃｏｒｅ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｎ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａｎｎ　Ｓｕｒｇ　Ｏｎｃｏｌ，２０１０，１７（７）：１９３７—１９４４．　３１　Ｒｏｓｋａｍｓ　ＴＡ，Ｌｉｂｂｒｅｅｈｔ　Ｌ，Ｄｅｓｍｅｔ　ＶＪ．Ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ　ｃｅｌｌｓ　ｉｎ　ｄｉｓｅａｓｅｄ　ｈｕｍａｎ　ｌｉｖｅｒ．Ｓｅｍｉｎ　Ｌｉｖｅｒ　Ｄｉｓ，２００３，２３（４）：３８５—３９６．　３２　Ｒｏｓｋａｍｓ　Ｔ．Ｌｉｖｅｒ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｈｅｐａｔｏｅｅｌｌｕｌａｒ　ａｎｄ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００６，２５（２７）：３８１８—３８２２．　３３　Ｋｏｈ　ＫＣ，Ｌｅｅ　Ｈ，Ｃｈｏｉ　ＭＳ，ｅｔ　ａ１．　Ｃｌｉｎｉｃｏｐａｔｈ０ｌ０ｇｊｃ　ｆｅａｔｕｒｅｓ　ａｎｄ　ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ　ｏｆ　ｃｏｍｂｉｎｅｄ　ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ．Ａｍ　Ｊ　Ｓｕｒｇ．　２００５，１８９（１）：１２０—１２５．　３４　Ｋｈａｎ　ＳＡ，Ｄａｖｉｄｓｏｎ　ＢＲ，Ｇｏｌｄｉｎ　Ｒ，ｅｔ　ａ１．Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｄｉａｇｎｏ—　ｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ｃｈｏｌａｎｇｉｏｃａｒｃｉｎｏｍａ：ｃｏｎｓｅｎｓｕｓ　ｄｏｃｕｍｅｎｔ．Ｇｕｔ，　２００２，５１　Ｓｕｐｐｌ　６：ＶＩＩ一９．　（本文编辑刘付宝）　

表观遗传学与肝癌关系的研究进展　汪侃，钱叶本　【关键词】　表观遗传学；肝细胞肝癌；ＤＮＡ甲基化；组蛋白修饰；ｍｉＲＮＡ调控　【中图分类号】Ｒ　７３５．７　【文献标识码】Ｃ　【文章编号】１００６－４７６１（２０１３）０５－０３９１－０５　

肝细胞肝癌（Ｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒ　ｃａｒｃｉｎｏｍａ，ＨＣＣ）简称肝癌，　是人类最常见的恶性肿瘤之一。我国是肝癌的高发区，发病　人数居首位，死亡率在各种恶性肿瘤中占据第二位。它是一　种容易侵袭转移的恶性肿瘤，临床就诊者多属中晚期病人，　手术切除率低。未经治疗的肝癌患者５年生存率极低，大约　０—１４％…，即使早期切除，术后５年复发率也在６０％以上，　小肝癌仍达４０％一５０％　。其主要发病原因是肝炎病毒　（ＨＢＶ、ＨＣＶ）感染，黄曲霉毒素、过量酒精摄入及遗传性肝　硬化也可导致肝癌发生，但发病机制尚不清楚。过去认为　【作者单位】安徽医科大学第一附属医院肝胆外科，合肥２３００２２　【通讯作者】钱叶本。　环境因素作用导致遗传学改变是肿瘤发生的主要原因，但大　量的研究表明，在肝癌发生过程中，只有少数癌基因或抑癌　基因发生突变。近年来，表观遗传学（Ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃｓ）的兴起为　解答这些问题提供了新思路。本文就ＤＮＡ甲基化、组蛋白　修饰和ｍｉＲＮＡ调控与肝癌关系的研究进展作一综述。　１表观遗传学的概念　随着人类对于肿瘤发病机制研究的深入，已经清楚地认　识到肿瘤的发生和发展不仅与细胞内的基因突变和缺失等　因核苷酸序列改变导致的遗传调控紊乱有关，还和表观遗传　的调控失衡有关。Ｗａｄｄｉｎｇｔｏｎ　在１９３９年首先提出了表观　遗传改变的现象，现今，表观遗传学已成为肿瘤研究中的热　点问题。目前较认可的表观遗传学定义是指在细胞分裂增　３９２　肝胆外科杂志２０１３年１０月第２１卷第５期Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏ厂Ｈｅｐａｔｏｂｉｌｉａｒｙ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，Ｖｏｌ，２１，Ｎｏ．５，Ｏｃｔ．２０１３　殖过程中，不改变相关基因的ＤＮＡ序列而影响相关基因表　达变化，并且这种改变还能通过有丝分裂和减数分裂进行　遗传的学科　Ｊ。主要研究与ＤＮＡ序列变异无关的基因表　达，可遗传性现象的本质、功能、形成机制及其在疾病发生和　发展过程中的作用。ＤＮＡ甲基化、组蛋白修饰、ｍｉＲＮＡ调　控、染色体重塑、基因印记等都是肿瘤细胞异常表观遗传谱　的明显特征，它们参与了生物体的细胞分化、形态发生、变异　性和适应性，能够被基因和环境的因素所影响。目前研究热　点领域为ＤＮＡ甲基化、组蛋白修饰和ｍｉＲＮＡ调控，它们在　哺乳动物基因表达调控中起到了重要的作用。　１．１　ＤＮＡ甲基化　ＤＮＡ甲基化（ＤＮＡ　ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）是最早发现的表观遗传　改变现象之一，也是目前人类惟一发现的ＤＮＡ自然修饰方　式。ＤＮＡ甲基化的主要机制是由甲基转移酶（ＤＮＡ　ｍｅｔｈｙｌ—　ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，ＤＮＭＴｓ）催化ｓ一腺苷甲硫氨酸作为甲基供体，　ＤＮＡ的ＣＧ两个核苷酸的胞嘧啶被选择性地添加甲基，形　成５一甲基胞嘧啶，这常见于基因的５＂－ＣＧ一３序列。甲基化位　点可随ＤＮＡ的复制而遗传，因为ＤＮＡ复制后，甲基化转移　酶可将新合成的未甲基化的位点进行甲基化。ＤＮＭＴｓ在哺　乳动物细胞中已知有活性的有四种，按其生物学功能又分为　两类：（１）ＤＮＭＴ１：作用于仅有一条链甲基化的ＤＮＡ双链，　使其完全甲基化，可参与ＤＮＡ复制双链中的新合成链的甲　基化。与组蛋白去乙酰基转移酶（ＨＤＡＣ）联合作用阻断基　因的表达；（２）ＤＮＭＴ３Ａ、ＤＮＭＴ３Ｂ、ＤＮＭＴ３Ｌ：它们可甲基化　ＣｐＧ岛，使其半甲基化，继而全甲基化，并参与细胞生长和　分化调控，在肿瘤基因甲基化中起重要作用　。启动子区　ＣｐＧ岛（ＣｐＧ　ｉｓｌａｎｄ）的甲基化状态是当前ＤＮＡ甲基化研究　的热门领域之一。ＣｐＧ岛是由基因组中长度为３００～３０００　ｂｐ的富含ＣｐＧ二核苷酸的一些区域组成，主要存在于基因　的启动子区和第一外显子区域。启动子区中ＣｐＧ岛的未甲　基化状态是基因转录所必需的，而ＣｐＧ岛序列中的胞嘧啶　甲基化可导致基因转录被抑制。肿瘤细胞在基因组整体低　甲基化（ｈｙｐｏｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）的水平上，启动子区ＣｐＧ岛区域却　表现出高甲基化（ｈｙｐｅｒｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ）状态，这导致肿瘤发生　过程中某些基因表达沉默，尤其表现在抑癌基因和错配修复　基因　］。　１．２组蛋白修饰　组蛋白（ｈｉｓｔｏｎｅｓ）是存在于真核生物体细胞染色质中的　一组进化上非常保守的碱性蛋白质，含精氨酸和赖氨酸等　碱性氨基酸较多，约占总氨基酸２５％左右。组蛋白分为５　种类型：Ｈ　１、Ｈ２Ａ、Ｈ　２Ｂ、Ｈ３、Ｈ　４，后４种各２个形成组蛋白　八聚体，构成核小体的核心，占核小体质量的１／２。２０世纪　９０年代组蛋白一般被认为是ＤＮＡ的包被蛋白，在基因的调　节表达的方面没有作用。现在普遍认为组蛋白在调节基因　表达、ＤＮＡ损伤修复、复制和重组等方面发挥重大作用。组　蛋白的Ｎ一端尾部暴露在核小体的表面可发生共价修饰，从　而对基因表达发挥调控作用。常见的组蛋白尾部修饰方式　有：乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化、多聚ＡＤＰ糖基化等。　其中乙酰化和甲基化是组蛋白的重要修饰方式，乙酰化受组　蛋白乙酰基转移酶（Ｈｉｓｔｏｎｅ　ａｃｅｔｙｌｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＨＡＴｓ）和组蛋　白去乙酰化酶（Ｈｉｓｔｏｎｅ　ｄｅａｃｅｔｙｌａｓｅｓ，ＨＤＡＣｓ）的共同调控，这　两种酶对组蛋白进行町逆性修饰调节组蛋白的乙酰化水平，　从而来调控转录的起始和延伸，乙酰化促进转录，而去乙酰　化为抑制转录　。组蛋白的甲基化主要发生在Ｈ３和Ｈ４　的赖氨酸和精氨酸的残基上，由组蛋白甲基转移酶（ｈｉｓｔｏｎｅ　ｍｅｔｈｙｈｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＨＭＴｓ）和组蛋白去甲基化酶（ｈｉｓｔｏｎｅ　ｄｅｍ—　ｅｔｈｙｌａｓｅｓ，ＨＤＭＴｓ）共同调控。赖氨酸残基可被单甲基化、双　甲基化和三甲基化，但精氨酸残基仅能被单甲基化和双甲基　化“　。单一组蛋白修饰往往意义不大，多个组蛋白发生多　种共价修饰组合在一起，形成一个修饰的级联，共同发挥作　用。　１．３　ｍｉＲＮＡ调控　ｍｉＲＮＡｓ是一类短序列、非编码、具有调控功能的单链小　分子ＲＮＡ，长约２２ｎｔ，广泛存在于真核和原核细胞中。ｍｉＲ—　ＮＡ起始于ｐｒｉ—ｍｉＲＮＡ，ｐｒｉ—ｍｉＲＮＡ在核内被ＲＮＡａｓｅ—ｍ：Ｄｒｏ—　ｓｈｅ加工成长约７０ｎｔ的ｐｒｅ—ｍｉＲＮＡ；ｐｒｅ—ｍ　ｉＲＮＡ在转运蛋白　Ｅｘｐｏｒｔｉｎ－５的作用下，从核内运输到胞质，在另一种　ＲＮＡａｓｅ—ｍ：Ｄｉｃｅｒ的作用下，ｐｒｅ—ｍｉＲＮＡ被切割成ｍｉＲＮＡ。　ｍｉＲＮＡ发挥生物学作用主要是结合到ＲＮＡ诱导的基因沉　默复合物（ＲＮＡ—ｉｎｄｕｃｅｄ　ｓｉｌｅｎｃｉｎｇ　ｃｏｍｐｌｅｘ，ＲＩＳＣ）中，形成非　对称ＲＩＳＣ复合物，称为微小核糖核蛋白（ｍｉＲＮＰ），与靶基因　的ｍＲＮＡ碱基互补配对，导致靶基因ｍＲＮＡ降解或抑制翻　译。最近的研究发现，ｍｉＲＮＡ表达与多种癌症相关，绝大　多数的ｍｉＲＮＡ在基因组上定位于与肿瘤相关的脆性位点　（ｆｒａｇｉｌｅ　ｓｉｔｅ）。这说明ｍｉＲＮＡ在肿瘤发生过程中起至关重　要的作用，这些ｍｉＲＮＡ所起的作用类似于抑癌基因和癌基　因的功能　Ｉ。