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分和生物活性研究进展[J】.中国民族民间医药, 2008,(3):28-29. [4】张耀春,王立为.远志提取物对小鼠学习记忆的影 PI ̄I[J】.中国新药杂志,2006,l5(15):1254-1257. [5】陈勤,曹炎贵,张传惠.远志皂苷对D一淀粉样肽和 鹅膏覃氨酸引起胆碱能系统功能降低的影响[J】.药 学学报,2002,37(12):913-917. [6】Ikeya Y,Takeda S,Tunakawa M,et a1.Cognitive improv— ing and cerebral protective effects of acylated oligosac— charides in polygala tenuifolia[J].Biol Pharm Bull,2004,27 (7):1081—1085. [7】陈勤,高晨曦,葛礼浩.远志皂苷对脑定位注射A p 拟AD大鼠脑内神经形态病理学变化的影响[J]. 激光生物学报,2006,l5(3):294-298. [8】Naito R,Tohda C.Characterization of anti. neurodegeneratiVe effects of polygala tenuifolia in A B (25—35)一treated cortical neurons[J].Biol Pharm Bull,2006, 29(9):18 1896. 【9】田枫,姜勇,张阔,等.远志总苷对快速老化模型 (SAM—P/8)小鼠学习记忆能力的作用及及其机理 研究[J】.老年医学与保健,2004,10(3):I 37-l39. fl0】马立本,i==E付田,张晓明.远志提酞物的促智作用研 究[J].卫生职业教育,2008,26(12j:128-l29. 【l1]刘屏,王东晓,郭代红,等.远志3,6’一二芥子酰基蔗 糖在药物诱发抑郁模型上的药效评价[J】.中国药学 杂志,2008,43(18):1391—1394. [12】王秀卿,黄庆军.下丘脑一垂体一肾上腺轴在抑郁症 发病中的作用[J】.现代中西医结合杂志,2004,1 3 (10):I383-l385. fl 3]谢婷婷,孙艳,王东晓,等.远志YZ-5oN慢性应激 抑郁模型大鼠行为学及血清CRH ACTH ̄HCOR的 影响[J】.解放军药学学报,2008,24(2):95-98. [14】文莉.远志抗焦虑作用部位的筛选[J】.中国中医药 科技,2006,l3(6):40l-402. [15】聂淑琴.草药制剂的药理学特性(20):远志中天然 前体药物的筛选[J].国外医学一中医中药分册, VO1.27 No.2 2Ol0 l996,l8(6):39-40. [1 6]Kawashima K,Miyako D,Ishino Y,et a1.Anti—stress effects of 3,4,5一trimethoxycinnamic acid,an active constituent ofroots ofpolygala tenuifolia[J].Biol Pharm Bull,2004,27 (8):1317—1319. [1 7】Chung IW,Moore NA,Oh WK,et a1.Behavioural pharma- cology of pOlyga1asapOnins indicates potential antipsy— chotic efficacy[J].Pharmacol Biochem Behav,2002,71(1— 21:191—195. [18】孙桂波,邓响潮,李楚华.远志皂苷对H,0,诱导的 PCl2细胞损伤的保护作用[J】.中药材,2007,30(8): 991-993. 【l9】I习明,李萍.远志抗衰老作用的研究【J】.实用药物与 临床,2006,9(1):22-23. [20】刘晓虹,林冬梅.远志治疗急性乳腺炎[J】.中国民间 疗法,2004,12(9):65. [2l】董抗援.远志栓治疗滴虫性阴道炎4 2例效果观察 [J】.中国寄生虫病预防杂志,l998,l1(2):155-l56. 【22]彭汶铎,许实波.四种远志皂苷的镇咳和祛痰作用 [J】.中国药学杂志,l998,33(8):491. [23】Hong T,Jin GB,Yoshino G,et a1.Protective effects of Po— lygala root in experimental TNBS—induced colitis in mice [J].JEthnopharmacol,2002,79(3):341—346. [24】郭娟,王建.生远志及炮制品对小鼠止咳化痰作用 [J】.中药药理与临床,2003,19(4):29. [25】朱玉琢,庞慧民,高久春,等.中草药远志对实验性 小鼠雄性生殖细胞遗传物质的保护作用fJ】.吉林大 学学报(医学版),2003,29(3):258-260. [26】庞慧民,高久春,朱玉琢,等.中草药远志对醋酸铅 诱发的小鼠精子非程序DNA合成的抑制作用【J】.吉 林大学学报(医学版),2006,32(1):82-83. [27】彭汶铎.远志皂苷H对离体平滑肌与心脏的作用 [J】.中国药学杂志,l999,34(4):241-243. [28】徐敬东.远志增强大鼠子宫平滑肌峰电活动实验研 究[J】.中药药理与临床,2005,2l(4):44-46. (收稿日期:2009-l0-21)
三七总皂苷提取分离及分析方法研究进展 孟琼,陈治宇△ (承德医学院,河北承德067000)
【关键词】三七皂苷;提取;分离;分析方法 【中图分类号1R284.2 【文献标识码】A 【文章编号11004—6879(2010)02-0198—04
三七总皂苷(total saponins of Panax notoginseng, PNS)是五加科人参属植物三七(Panax notoginseng(Burk.) F.H.Chen)的主要活性部位,含有多种单体皂苷,具有扩 张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板聚集、降血脂、抗 炎、抗氧化等多种药理作用…。临床上主要用于心脑血管 疾病的治疗。本文针对三七总皂苷的提取、分离、纯化以 及分析方法的发展综述如下: △通讯作者 l98· 1三七皂苷类成分的提取方法 大体分为两类,一类是传统方法,如渗漉法、浸渍法、 水煎煮法等[2叫】,成本低廉,但提取效率较低;另外一类是 近年发展起来现代仪器提取方法,提取效率高,提取完 全,如加压溶剂萃取法(PLE,pressurized liquid extraction) _】’1微波萃取法No1、超临界流体萃取法(SFE)t。,9】等。
三七总皂苷中各成分性质不尽相同,如三七二醇皂 苷耐受高温,而三醇皂苷热敏性强,在煎煮温度大于60℃ 丞 堡 医 堂 堂 塑 JOURNAL 0F CHENGDE MEDICAL COLLEGE
时,极易降解失效,因此本文主要介绍低温非加热条件下 的提取方法。 1.1 冷浸法Dong等【2l以三七皂苷Rl、人参皂苷Rgl、人 参皂苷Rbl、人参皂苷Rd和黄酮类为指标,用正交设计法 对三个因素做出了优化,得出三七根提取的最优条件:提 取溶剂水,2O倍量,浸提时间24h。在此种条件下提取出的 三七总苷抗血小板聚集作用最强。 1.2 酸水解法 滕荣伟等【3l用温和酸(乙酸一乙醇1:1)在 6h、60℃条件下水解三七药材粗粉,过制备液相色谱柱分 离得到五种新的达玛烷型糖苷。酸水解法可以较为容易 的提取出苷,但是酸水解选择性低,提取效率也低,水解 不均匀,很容易将同一皂苷水解成不同的产物。 1.3 渗漉法 渗漉法是一种较好的提取方法,设备简 单,操作安全,节能降耗,减少成分破坏,有煎煮法不可比 拟的优点。闫光军等【4】用正交试验优化渗漉法提取三七皂 苷的条件:l5倍量的75%乙醇以5ml/min的速度渗漉为最 佳提取方案。可提取出的三七总皂苷含量达l1.01%,提取 率为93.1%。认为已基本提尽,但是渗漉法耗时长,不适用 于工业化大生产。 1.4超声波提取法 1.4.1 单频超声:秦枫等【51以三七总皂苷含量为指标,香 草醛一高氯酸法测定其含量,对超声提取三七总皂苷 (PNS)的提取工艺用正交设计优化,得出的最佳提取工艺 为:料液比1:12,水饱和正T醇超声提取2次,时间50min,温 度40℃,提取率8%(原药材)。这种方法通过加速药物有效 成分进入溶剂,提高了提取率,避免了高温破坏有效成分; 料液比与回流提取工艺相近,但是提取时间大大缩短。 1.4.2双频超声:贲永光等[6】采用双频超声(40kHz/25kHz) 技术对三七总皂苷提取进行强化,用正交设计得出双频 超声提取最佳工艺条件为:80%乙醇,提取时间30min,料 液比为l:20,提取温度为40"(2。得出提取率为82.41%,(有 效部位)提取率高于40kHz或25kHz单频超声。 1.4.3 超声酶法:超声波提取法与生物酶提取法为现代 中药有效成分提取的新方法,操作简便,工艺条件稳定。 周琳等[7】考察了乙醇回流法、超声法、超声纤维素酶法、超 声果胶酶法、超声复合酶法提取三七总皂苷的优劣,并采 用四因素(纤维素酶用量、果胶酶用量、超声时间、加水量) 三水平正交设计法对超声复合酶法提取工艺条件进行优 选。结果得到了最优的提取工艺条件:pH4.5,酶解温度50 ℃,酶解时间为2h,纤维素酶用量15U/g(生药),果胶酶用 量为140U/g(生药),超声时间90rain,加水量8倍量。所得三 七提取液中总皂苷的含量为l0.33,提取物得率为35.17, 显著高于乙醇回流法等传统方法。 1.5超,J各界流体革取 1.5.1 超临界CO,萃取法:黄雪等[8】通过正交实验对超临 界提取工艺条件进行了优化:粉碎工艺适宜的萃取温度 45℃,压力38MPa,CO 流:m23kg/h,夹带剂300ml,萃取时 间3.Oh,提取率7.97%}轧胚工艺适宜的萃取温度45℃,压 力35MPa,CO 流 ̄20kg/h,夹带剂350ml,萃取时间2.5h, 提取率9.98%。超临界CO,萃取技术具有萃取能力强、提取 率高、生产周期短、有效成分不被破坏、工艺简单、操作参 数容易控制、没有溶剂残留、产品质量稳定等优点,已经 V01.27 No.2 20l0 应用于中药有效成分的工业化大生产中。 1.5.2 超临界CO,反相微乳萃取:雷羽等【9】将表面活性剂 二一(2一乙基己基)磺基琥珀酸钠(AOT)和水引入到超临界 C 0,中,形成反相微乳体系,从而提高对三七总皂苷的萃 取能力。最高提取率可达16%以上,适用于工业化大生产。 1.6 微波萃取法 郭子杰等【l。1优化了微波浸提三七皂苷 的工艺条件,得出最佳条件为:微波辐射功率600W,微波 辐射时间10min,料液比l:4,80%甲醇。并证明微波处理后 的三七中皂苷物质的浸取速度至少是未经微波处理的4 倍,大大提高了提取效率。此外,微波还会促使三七中的 细胞壁破裂,有利于皂苷成分的溶出。但是,微波萃取也 是因为规模小,目前还未见有用于工业化生产。 1.7加压溶剂提取法(PLE) 李鹏等【】I】以三七总皂苷、人 参皂苷Rb1和人参皂苷Rg1含量为指标,用单因素考察法 对影响加速溶剂提取三七皂苷类成分的因素进行优化,得 到的最优条件为:溶剂甲醇,药材粒径为0.3-0.45mm,提 取温度150℃,提取压力6.895MPa。提取15min,提取1次, 提取率与索氏提取相当,但能明显地缩短提取时间和溶 剂用量,同时重现性也有明显的改善。加压溶剂提取是近 年来发展起来的一种新型样品提取技术,具有提取时间 短、溶剂消耗少、提取效率高、操作模式多样化以及操作 过程自动化等诸多优点。尽管如此,由于其提取容量限制 (11ml或33m1),目前还不能用于工业化大生产,只能用于 分析实验的样品制备。 1.8 罐组逆流提取法 陈勇等[】 】以三七皂苷R1、人参皂 苷Rg 1、总皂苷和浸出物含量为优化目标,采用正交试验 设计,利用回归分析方法建立了各优化目标与考察因素 间的数学模型,结合方差分析得到三七罐组逆流提取 (multi-stage countercurrent extraction,MCCE)最佳工艺 参数:体积分数70%乙醇,8倍药材量溶剂,阶段提取时间 30min,提取温度50 ̄C。与其它提取工艺相比,MCCE在保证 较高收率的前提下,温度可以降低5 0%左右,溶剂节省 50%-70%,单位时间的处理量增大,使得有效成分最大限 度地溶出,适用于工业化大生产。 1.9水提取法 水提取法是以水为溶剂,应用生物酶、 发酵、组合大孔吸附树脂、脱色树脂、离子交换树脂等现 代科学技术从三七中提取、分离、精制、纯化三七总皂苷。 王兴文等[1 】用水提取法对三七中皂苷类成分提取的工业 化大生产做了探索,建成日处理3000kg ̄_.七药材的生产 线,提取率8%,含量95%以上。这种方法高效、环保,产品质 优、稳定,可用于工业化大生产。 2三七皂苷类成分的分离纯化方法 2.1 大孔吸附树脂法 万建波等[1 1以人参皂苷Rgl、Re、 Rbl、Rg2、Rc、Rb2、Rb3、Rd、Rg3为指标,优化了大孔吸 附树脂分离三七中原人参萜三醇(PTS)和原人参二醇(PDS) 皂苷的条件,得出最佳分离树脂型号为DS-401,从PLE提 取液(含PTS22.5%、PDS16.4%)中的分离出88.2%PTS和 92.6%PDS。大孔树脂由于其成分低廉,可以再生,在皂苷 类成分的分离中较为常用。 2.2 高速逆流色谱法(HSCCC) 杜琪珍等【1 1用正己烷一 正丁醇一水(3:4:7)作为分离溶剂系统,从283mg_ ̄七皂苷 甲醇提取物中分离得到57、17、l3和56mg的人参皂苷Rb、