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稻瘟病菌培养方案

耗材:9cm玻璃培养皿20个;
9cm 灭菌塑料一次性培养皿50个
灭菌1.5ml离心管100个;
无水乙醇1瓶
接种棒 1支配有镍铬丝
接种针 1支尖端为硬针
滤纸 1盒
酒精灯 1个
试剂:PDA培养基 1瓶,500ml;玉米培养基1瓶,500ml;
培养步骤:
一.菌株培养
1.灭菌培养基,铺平板;
2.挑取小块菌种,置于平板上;
3.25℃培养7d,活化菌株;
4.大直径4-5cm滤纸片,滤纸片灭菌;
5.在单菌落周围,贴上滤纸片,菌丝继续生长繁殖;
6.当滤纸片周围布满菌丝后,将滤纸片置于超净工作台吹干,-80℃冰箱保存备用;
二.产孢培养
第一种方法:
1.将活化好的菌株,接种于PDA培养基上,产孢培养基做厚一点,25℃培养10-15d;
2.等待其菌丝颜色由白转黑时,用无菌水冲洗培养基表面,保存带孢子的菌悬液;
3.一个培养皿可收集三次孢子,每次间隔48h,合并后用于侵染;
第二种方法:
1.高粱培养基制备:取适当高粱粒,放入水中,水面高于高粱粒,煮沸30min,手能捏动即可,捞出,晾干后取适量装入三角瓶中,并在121℃灭菌,备用;
2.将活化好的菌块,接种于高粱培养基上;
3. 25℃培养10-15d,等待高粱长满菌丝体;
4.接种前,用无菌水洗掉表面菌丝体,并用灭菌纱布过滤后,置于灭菌托盘中,25℃培养2d,产生分生孢子后,无菌水清洗用于接种;。

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