第１９卷第２期 ２０１２年６月 天津农学院学报 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｔｉａｎｊｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｖｂ１．１９，ＮＯ．２
Ｊｕｎｅ，２０１２
文章编号：１００８—５３９４（２０１２）０２—００３０－０４
菩提树组织培养技术研究 王雅稚 ，孙宁 通信储，张磊 ，陈小强 ，许燕萍 （１．天津农学院农学系，天津３００３８４；２．天津滨海中新生态农业发展有限公司，天津３００４８０）
摘要：以菩提树的带芽茎段为外植体，研究了不同外植体消毒时间及外源激素水平对菩提树组织 培养的影响。试验结果表明，外植体以０．１％的ＨｇＣ１。消毒１０ ｒａｉｎ可获得较低的污染率和较高的成活率； 初代培养与分化增殖均采用ＭＳ为基本培养基，适宜的激素组合分别为ＮＡＡ ０．１ ｍｇ，Ｌ＋６－ＢＡ １，０ ｍｇ／Ｌ、ＮＡＡ ０．３ ｍｇ，ＩＪ＋６一ＢＡ １．Ｏ～２．０ ｍｇ／Ｌ；试管苗生根培养以１／２ ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ为最佳，生根 率达９２．５％，植株生长健壮，适于移栽。污染的试管苗在移栽前进行灭菌药剂浸根处理，也可达到 较高的成活率，可避免种苗的浪费。 关键词：菩提树；茎段；组织培养 中图分类号：￥７２２．３７；Ｑ９４９．７３７．４ 文献标识码：Ａ
Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ ｏｆ Ｆｉｃｕｓ ｒｅｌｉｇｉｏｓａ ＷＡＮＧ Ｙａ－ｚｈｉ ，ＳＵＮＮｉｎｇ ’ 。 。”蛳 “所 ，ＺＨＡＮＧＬｅｉ，ＣＨＥＮＸｉａｏ—ｑｉａｎｇ ，ｘｕＹａｎ－ｐｉｎｇｅ
（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆＡｇｒｏｎｏｍｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００３８４，Ｃｈｉｎａ；２．Ｔａｎｊｉｎ Ｂｉｎｈａｉ Ｎｅｗ Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ＣＯ．，ＬＴＤ，Ｔｉａｎｊｉｎ ３００４８０，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｓｅｌｅｃｔｉｎｇ ｔｈｅ ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｂｕｄｓ ａｓ ｅｘｐｌａｎｔｓ．ｔｈｅ ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ０ｆ ｌｆｃＵＳ ｒｅｌｉｇｉｏｓａ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍｕｍ ｄｏｕｓｅｄ ｔｉｍｅ ｗａｓ ８ ｔｏ １０ ｒａｉｎ ｉｎ ０．１％ＨｇＣ１，．ＭＳ＋ＮＡＡ Ｏ．１ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ １．Ｏ ｍｇ／Ｌ ｗａｓ ｔｈｅ ｂｅｓｔ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｉｎｄｕｃｉｎｇ ａｘｉｌｌａｒｙ ｂｕｄｓ．ｔｈｅ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｗａｓ ４．５ ｏｎ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍ ｏｆ ＭＳ＋ＮＡＡ Ｏ－３ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ １．０～２．０ ｍｅｇＬ，ｔｈｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｍｅｄｉｕｍ ｆｏｒ ｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ １／２ ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ，ａｎｄ ｔｈｅ ｒａｔｅ ｏｆｒｏｏｔｉｎｇ ｗａｓ ９２．５％． Ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｒ ｓｕｒｖｉｖａ１ ｒａｔｅ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ．ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｒｏｏｔｓ ｏｆ ｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｖｅ ｐｌａｎｔｌｅｔｓ ｂｅｉｎｇ ｉｍｍｅｒｓｅｄ ｉｎ ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ ｂｅｆｏｒｅ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ． Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ＩｇＳ ｒｅｌｉｇ’ｉｏｓａ；ｓｔｅｍ ｓｅｇｍｅｎｔ：ｔｉｓｓｕｅ ｃｕｌｔｕｒｅ
菩提树（Ｆｉｃｕｓ ｒｅｌｉｇｉｏｓａ Ｌ．），为桑科榕属植物。 菩提树的梵语原名为“毕钵罗树”（Ｐｉｐｐａｌａ），因 佛教的创始人释迦牟尼在菩提树下悟道，才得名 为菩提树（梵ｂｏｄｈｉｖｒｋｓａ），“菩提”（梵ｂｏｄｈｉ）意 为“觉悟” 。作为佛教圣树，菩提树又有“身是 菩提树，心是明镜台。时时勤拂拭，勿使惹尘埃” 的文化意蕴，受到人们的尊崇和喜爱；其树形美 观，兼叶雅致，又宜做行道树、庭阴风景树及大 型室内观赏树种伫 ；其对ｓＯ 、ｃｌ 抗性中等，对ＨＦ 抗性强，宜作污染区的绿化树种。在北方较寒冷 地区，菩提树还可开发为大、中、小型盆栽，供 室内观赏或寺院及佛教人士供奉。菩提树枝干上 流出的乳状液汁，可提出硬性橡胶；枝叶可做象、 牛等牲畜的饲料；花供药用，可发汗镇痉，并有 解热之效；其木材适宜做砧板、包装箱板和纤维 板原料 。 菩提树目前的主要繁殖方法为种子实生繁殖 及扦插繁殖，繁殖速度慢、周期长 。为保持菩提 树优良的遗传特性及进行快速苗木繁殖，对菩提 树的组织培养研究正逐渐展开。邓正正等 用菩提 树叶片诱导愈伤组织并获得生根试管苗；亦有报 道陋 研究不同光质对菩提树组培苗生长发育的影 响，认为紫光和黄光可促进菩提树组培苗生物量 增重和不定芽分化，红光和橙光可提高组培苗株 高。此外，其它相关研究报道尚少。 本文以菩提树的带芽茎段为外植体，研究了 不同外植体消毒时间及外源激素水平在菩提树组 织培养过程中的影响，旨在为菩提树的组培快繁 生产和新品种培育等提供技术参考。
收稿日期：２０１２—０５—０８ 基金项目：天津市科技支撑计划项目“非洲紫罗兰新品种的引进及培育技术的研究”（０９ＺＣＫＦＮＣ０１６００）；天津市滨海新区科技计 划项目“名贵花卉、苗木新品种引进、快繁及设施栽培技术的研究”（２０１０一ＢＫ１３００４９）；天津农学院大学生科技创新 活动项目“菩提树组织培养无性快速繁殖技术的研究”（无编号） 作者简介：王雅稚（１９９０一），女，天津市人，本科在读，主要从事种子科学与工程方面的研究。联系电话：（０２２）２３７８１２９８。 通信作者：孙宁（１９７９一），女，河北承德人，高级实验师，硕士，主要从事植物细胞工程方面的研究工作。Ｅ—ｍａｉｌ：ｓｎｉｎｇ７９＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ。 第２期 王雅稚，等：菩提树组织培养技术研究 １材料及方法 １．１ 实验材料 试材为由广州引进的菩提树３ ａ生种苗。 １．２实验方法 １．２．１外植体表面消毒处理 取菩提树当年嫩枝，剪切成１．５～２．０ ｅｍ带腋 芽茎段，置烧杯中加人少许洗衣粉，以流水冲洗 干净。在超净工作台中用７０％酒精浸洗３Ｏ ｓ后，于 ０．１％氯化汞（ＨｇＣ１ ）溶液中分别消毒５、８、１０、 １５、２Ｏ、２５ ｍｉｎ，无菌水冲洗３～５次。表面消毒后， 接种于无激素ＭＳ培养基中。培养条件温度为 （２５±２）℃，光照１２ ｈ／ｄ，培养基ｐＨ值为５．８＂－＂６．０ （以下培养条件相同）。 １．２．２初代培养 将表面消毒后成活的茎段接入含６－ＢＡ和 ＮＡＡ不同浓度配比的培养基中，以ＭＳ为基本培养 基，添加蔗糖３％、琼脂０．６３％。 １．２－３继代增殖培养 将初代培养诱导分化的侧芽切成１．５～２．０ ｃｍ 左右的茎段，接种至含有６一ＢＡ和ＮＡＡ不同浓度配 比的继代增殖培养基中。以ＭＳ为基本培养基，添 加蔗糖３％、琼脂０．６３％。 １．２．４壮苗生根培养 将生长旺盛、生长势均一的试管苗从基部切 下２～３ ｃｍ的带顶芽茎段接种于生根培养基中。培 养基以１／２ ＭＳ为基本培养基，添加蔗糖２％、琼脂 ０．６３％，附￣ＪＩＩＮＡＡ ４个浓度处理。 １．２．５驯化移栽 当试管苗长出４～６片成熟叶片，有４～６条 （＞１ ｅｍ）根时进行驯化移栽培养。选用蛭石作 为基质，使用前用湿热法灭菌。 ２结果与分析 ２．１菩提树无菌株系的建立 ２．１．１表面消毒时间对外植体灭菌效果和成活的 影响 观察０．１％ＨｇＣ１２￣液消毒５、８、１０、１５、２０、 ２５ ｍｉｎ对污染率及外植体污染、成活情况的影响。 结果见表１。
表１ ０．１％ＨｇＣ１２不同消毒时间对外植体培养的影响 编号 消毒时问／ｍｉｎ 污染率／％ 成活率／％ ５ ８ １０ １５ ２０ ２５ ７５ ３８ ２２ １８ １６ ｌ１ ２０ ５４ ６７ ３６ ２８ １３ 用０．１％ＨｇＣＩ 处理不同外植体，在５～２５ ｍｉｎ 内，随着消毒时间的延长，茎段污染率呈下降趋 势，成活率先上升、后下降，而褐化死亡率呈上 升趋势，说明随着消毒时间的延长，对菌类的杀 伤力越来越强，而对茎段的伤害也越来越高。当 消毒时间为１０ ｍｉｎ时，带节茎段成活率达到最高值 ６７％。因此，对带节茎段的消毒时间以１０ ｍｉｎ为好。 ２．１．２外源激素对外植体侧芽萌发分化的影响 将未褐化成活的茎段接人初代培养基中，培 养８～９ ｄ后，腋芽开始萌动，逐渐出现生长点，１２ ｄ后便长出幼芽，２５ ｄ后，侧芽长至２～３ ｃｍ。从表 ２中可以看出，各处理间外植体的诱导效果有较大 差异。相同ＮＡＡ浓度下，６－ＢＡ各处理诱导率的变 化无明显规律；而随着ＮＡＡ浓度的升高，侧芽的 萌发率有下降趋势。其中，处理组４和６诱导侧芽 萌发率最高，且以ＮＡＡ ０．１ ｍｇ／Ｌ＋６一ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ 的激素组合处理产生的不定芽较为健壮。
表２不同激素浓度对菩提树外植体诱导效果 齄旦 激素浓度／ｍｇ・Ｌ 幛 舯，爪 拈 船，爪 拈 ， 、 Ⅷ ； 州— ＮＡＡ ６－ＢＡ 。 从 。 从千 “ 上 、Ｖ １ ０．０５ ０．５ １５ ６ ４０．０ 愈伤组织少，芽较细弱 ２ ０．０５ １．０ １５ ８ ５３＿３ 愈伤组织少，芽较细弱 ３ ０．０５ １．５ １５ ９ ６０．０ 愈伤组织少，芽较细弱 ４ ０．０５ ２．０ １５ １２ ８０．０ 愈伤组织少，芽较细弱 ５ ０．１０ ０．５ １５ １０ ６６．７ 愈伤组织较少，芽较健壮 ６ ０．１０ １．０ １５ １２ ８０．０ 愈伤组织较少，芽健壮 ７ ０．１０ １．５ １５ ７ ４６．７ 愈伤组织较多，芽健壮 ８ ０．１０ ２．０ １５ ６ ４０．０ 愈伤组织较多，芽较健壮 ９ ０．１５ ０．５ １５ ５ ３３－３ 愈伤组织较多，芽较弱 １０ ０．１５ １．０ １５ ５ ３３－３ 愈伤组织较多，芽较弱 １１ ０．１５ １．５ １５ ４ ２６．７ 愈伤组织较多，芽较弱 １２ ０．１５ ２．０ １５ ８ ５３－３ 愈伤组织较多，芽较弱