收稿日期:2009203216;　修订日期:2009206210基金项目:广西科学基金资助项目(No.0342003-1)作者简介:潘洪平(19682),男(壮族),广西南宁人,现任广西壮族自治区人民医院主任药师,硕士学位,主要从事医院药学和药理学临床工作.野葛根和银杏叶提取物配伍复方制剂的抗氧化实验研究潘洪平,危华玲,杨嘉珍(广西壮族自治区人民医院,广西南宁　530021)摘要:目的观察银杏叶复方制剂对老龄小鼠的抗氧化作用。方法老龄小鼠40只,随机分成老龄对照组,银杏叶单方制剂组,银杏叶复方制剂高、低剂量组,每组10只。另10只标准体重小鼠作青年对照组。老龄对照组和青年对照组均给予等体积蒸馏水,各用药组连续灌胃给药10d。末次给药后1h,采血分离血清,检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果与老龄对照组比较,银杏叶复方制剂高、低剂量组和单方制剂组均可明显提高老龄小鼠血清中SOD活性,降低MDA含量。银杏叶复方制剂高剂量组提高SOD活性的强度大于低剂量组和单方制剂组(P<0.05)。结论银杏叶复方制剂具有抗氧化作用且呈现一定的量2效关系,处方中的银杏叶提取物与野葛根提取物成分具有一定的协同药效作用。关键词:银杏叶复方制剂;　银杏叶提取物;　野葛根提取物;　抗氧化中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:100820805(2010)0120067202ExperimentalStudyofCompoundGinatononAntioxidationPANHong2ping,WEIHua2ling,YANGJia2zhen(People’sHospitalofGuangxiAutonomousRegion,Nanning530021,China)Abstract:ObjectiveTostudytheeffectsofcompoundGinatononSODactivityandMDAcontentinbloodserumofagingmice.Methods40agingmicewererandomlydividedinto4groups:aginggroup,positivecontrolgroup(tabletGinaton),highandlowdoseofcompoundGinatongroups,10miceeachgroup.Other10normalmice,weightof18～22g,weretakenasyouthcon2trolgroup.Bothaginggroupandyouthcontrolgroupwereadministeredequaldistilledwater.Afteradministrationfor10days,se2rumofeachmiceinallgroupswasseparatedfromthewholebloodofeyeballarteries,anditsSODactivityandMDAcontentsweredetectedrespectively.ResultsSODactivityinbloodserumwassignificantlyhigherinpositivecontrolgroup,highandlowdoseofcompoundGinatongroupsthanthatinagingcontrolgroupmice.Onthecontrary,MDAcontentinbloodserumofaginggroupwasthehighestamongallgroups.SODactivityinhighdoseofcompoundGinatongroupwassignificantlyhigherthanthoseinlowdoseofcompoundGinatongroupandpositivecontrolgroup(P<0.05).ConclusionCompoundGinatonhastheactionofantioxidationandthisactionhasanobviousdose-effectrelationship.Italsoshowsthesynergismbetweenthetwomaincompositionsofcom2poundGinaton.Keywords:CompoundGinaton;　Ginaton;　Puerariaextract;　Antioxidation 最近研究报道,银杏叶提取物能有效清除细胞内氧自由基,对胰岛细胞凋亡有保护作用[1];银杏叶提取物可以通过增强运动机体抗氧化酶的活性,提高机体的抗氧化功能,减轻大强度耐力训练对大鼠组织造成的脂质过氧化损伤,改善运动造成的自由基代谢紊乱,加快自由基的清除[2]。葛根提取物具有抗氧化应激的作用,可提高糖尿病大鼠血浆超氧化物歧化酶的活性,减少丙二醛的产生,有效防治糖尿病血管病变的发生[3];葛根提取物的抗氧化作用主要与其主要有效成分葛根素能提高SOD酶、Na+-K+-ATP酶、Ca2+-ATP酶活性,降低MDA含量有关[4]。目前,有关银杏叶提取物和葛根提取物的配伍作用研究尚鲜见报道。前文我们曾经报道了银杏叶提取物和葛根提取物的复方制剂的工艺研究[5]及其质量标准研究[6,7]。为了进一步观察银杏叶提取物和葛根提取物组成复方新制剂的药效学作用,为临床研究提供实验依据,本文根据该复方制剂有效成分的药理作用及其功能主治主要针对心脑血管疾病、糖尿病和老年病的特点,对其进行小鼠抗氧化试验观察,旨在为后续的临床研究提供实验依据。现报道如下。1　材料与仪器1.1　药物与试剂银杏叶复方制剂(片剂),批号:20051030,由广西壮族自治区人民医院制剂室提供。银杏叶单方制剂(片剂),广西某药业股份有限公司提供,批号:050418。SOD和MDA测定试剂盒均为南京建成生物技术工程研究所产品,批号分别为:20051129,20051128。肾上腺素注射液,天津金耀氨基酸有限公司产品,批号:0503011。1.2　动物老龄昆明种小鼠,鼠龄2年,体质量30～35g;青年对照组昆明种小鼠,体重18～22g,均由广西医科大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK桂2003—0003。饲养于空调实验室内,室温:(22±2)℃,相对湿度:(60±2)%,喂颗粒标准饲料,自由饮水和摄食。1.3　仪器722型光栅分光光度计,上海分析仪器厂产品。·76·LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2010VOL.21NO.1时珍国医国药2010年第21卷第1期2　方法选用鼠龄为2年,雌雄各半,体质量在30～35g左右的老龄昆明种小鼠40只,随机分成老龄对照组,阳性药银杏叶单方制剂组,银杏叶复方制剂高剂量组、银杏叶复方制剂低剂量组,每组10只。取60日龄,体质量18～22g的昆明种小鼠10只作青年对照组,老龄对照组及青年对照组给予等体积蒸馏水,阳性对照组给予单方银杏叶片(剂量相当0.17mg槲皮素/kg体质量),银杏叶复方制剂高剂量组、低剂量组的剂量以槲皮素含量计算,分别为0.17mg/kg和0.085mg/kg。各用药组连续灌胃给药10d,灌胃给药2次/d,末次给药1h后,摘除小鼠眼球取血,分离血清,按照试剂盒方法检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。统计方法:实验数据输入计算机处理,以󰁡x±s表示,采用SPSS统计软件对多组间进行方差分析和两两比较q检验。3　结果各实验组对小鼠血清SOD活性及MDA含量影响的结果见表1。结果表明,与老龄对照组比较,青年对照组小鼠血清中的SOD活性明显增高(P<0.05),同时青年对照组小鼠血清中的MDA含量显著降低(P<0.01);与老龄对照组比较,银杏叶复方制剂高、低剂量组和单方制剂均可明显提高老龄小鼠血清中SOD活性,降低MDA含量。与银杏叶单方制剂组及银杏叶复方制剂低剂量组比较,银杏叶复方制剂高剂量组可明显提高老年小鼠血清中SOD活性(P<0.05)。表1　银杏叶制剂对老龄小鼠的抗氧化作用(󰁡x±s)组别剂量C/mg·kg-1SOD/u·L-1MDA/nmol·L-1青年对照-652.40±275.4633.68±0.9233老龄对照-411.89±138.124.93±1.0银杏叶单方制剂0.17518.94±88.653#3.79±0.773银杏叶复方制剂低剂量0.085519.02±52.293#3.96±0.783银杏叶复方制剂高剂量0.17628.64±187.95333.22±0.9533 与老龄对照组比较,3P<0.05,33P<0.01;与银杏叶复方制剂高剂量组比较,#P<0.05;n=104　讨论银杏叶的主要活性成分为黄酮苷和特有的萜烯等。黄酮苷主要是山萘酚及槲皮素的葡萄鼠李糖苷,萜烯主要是银杏内酯和白果内酯。银杏内酯即苦味素,分别有银杏内酯A,B,C,M,J和银杏新内酯共6种。此外,还含有酚类,生物碱类,以及钙、镁、钾、磷、锶、铁等多种元素和17种氨基酸等有效成分。具有改善微循环、降血脂、抗氧化、增加学习记忆等多方面的药理作用。临床主要应用于治疗冠心病、心绞痛、脑梗塞、痴呆症、糖尿病肾病等症[8]。野葛根Puerarialobata(willd)ohwi主要活性成分为异黄酮类化合物,如葛根素、大豆素、大豆苷等,具有松弛血管平滑肌,改善微循环,保护心脑缺血,抗肿瘤,降血脂和抗氧化等作用。葛根素对氧自由基具有清除作用,能预防性对抗过氧化氢和超氧阴离子引起的氧化性损伤,对脂质过氧化致人主动脉内皮细胞的损害具有保护作用,对四氧嘧啶性高血糖模型大鼠具有明显降低血糖和降低糖化血红蛋白含量的作用,临床主要用于防治心脑血管疾病和治疗糖尿病并其并发症[9]。自由基反应可引起脂质过氧化导致细胞膜的损伤,并可直接作用于蛋白质、糖类及DNA等生物大分子,造成细胞膜和细胞核中遗传分子的损伤,导致机体衰老,诱发心脑血管疾病、糖尿病、痴呆症,甚至诱发肿瘤等多种疾病及其并发症。抗氧化作用的药物应用是防治上述疾病的重要方法,是目前基础和临床研究的热点之一。单方的银杏叶制剂和葛根制剂均已被证实具有一定的抗氧化和降糖作用,并被临床广泛应用于治疗各种心脑血管疾病、糖尿病及其并发症,取得了一定的疗效。两者的配方制剂具有毒性低[10,11],制剂工艺稳定可控[5～7]等优点,其相关药效学作用值得进一步研究。本实验结果发现,与老龄对照组比较,青年对照组小鼠血清中的SOD活性明显增高(P<0.05),同时青年对照组小鼠血清中的MDA含量显著降低(P<0.01),这表明,SOD活性随年龄的增长而明显降低,而MDA含量则随年龄的增长而明显增高。提示本实验所采用的实验动物基本可反映老年机体的氧自由基增高和衰老的情况,使组间具有一定的可比性。与老龄对照组比较,银杏叶复方制剂高、低剂量组和单方制剂均可明显提高老龄小鼠血清中SOD活性,降低MDA含量。与银杏叶单方制剂组及银杏叶复方制剂低剂量组比较,银杏叶复方制剂高剂量组可明显提高老年小鼠血清中SOD活性(P<0.05)。提示银杏叶复方制剂具有一定的抗氧化作用和一定的剂量效应关系,且处方中的银杏叶提取物与野葛根提取物成分具有一定的协同抗氧化作用。本实验初步提供银杏叶提取物和葛根提取物配方制剂的药效学作用,为后续的临床研究提供了实验依据,有关两者配方制剂的其它药理学研究有待今后进一步研究和报道。参考文献:[1]　叶春玲,金永亮,周光雄,等.银杏叶提取物抗氧化及其抗胰岛RIN-mβ细胞凋亡的作用[J].暨南大学学报(医学版),2007,28(4):360.[2]　牛英鹏,屈建莹.银杏叶提取物对大鼠抗氧化能力的影响[J].化学研究,2006,17(3):88.[3]　曾　明,陶凯忠,郑水庆,等.葛根提取物抗糖尿病大鼠氧化应激的实验研究[J].华北国防医药,2006,18(6):393.[4]　孙　卫,郑学芝,念　红,等.葛根素对糖尿病大鼠胰腺线粒体MDA含量、SOD和ATP酶活性的影响[J].中国老年学杂志,2007,27(12):1141.[5]　危华玲,潘洪平,卢文胜.正交试验优选复方银杏叶片的处方研究[J].中国药房,2006,17(10):736.[6]　危华玲,陈　英,陈晓宇,等.复方银杏叶片中槲皮素的含量测定[J].中国药师,2008,11(1):12.[7]　潘洪平,李小燕,危华玲,等.RP-HPLC法测定复方银杏叶片中葛根素的含量[J].中国药房,2007,18(15):1161.[8]　潘洪平.银杏叶制剂药理作用和临床应用研究进展[J].中国中药杂志,2005,30(2):93.[9]　潘洪平.葛根总黄酮和葛根素的药理作用和临床应用研究进展[J].广西医学,2003,25(10):1941.[10]　潘洪平,危华玲,陈　英,等.复方银杏叶片的急性毒性实验研究[J].时珍国医国药,2007,18(6):1325.[11]　潘洪平,危华玲,陈　英,等.复方银杏叶片对大鼠的长期毒性研究[J].时珍国医国药,2007,18(7):1572.

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