作者简介：张向兵（1975－），男，本科，主管技师，主要从事卫生理化检验和相关研究工作。*通讯作者，张丁，E－mail：zhangd222@hncdc．com．cn

·化学测定方法·大蒜油软胶囊中大蒜新素的高效液相色谱测定法

张向兵，张伟，苏永恒，银恭举，张丁*河南省疾病预防控制中心，郑州450016

摘要：目的建立大蒜油胶囊中大蒜新素的高效液相色谱测定方法。方法样品处理后，采用乙腈水溶液（80+20）做流动相，C18柱分离，240nm波长下二极管阵列检测器检测。结果该法在0．2μg/ml～400μg/ml范围内线性关系良好，相关系数为0．9999，相对标准偏差均小于6，回收率为97．8%～101．3%，检

测限为0．5ng，定量限为1．65ng～4μg。结论本法样品前处理简单，检测快速，定性定量准确，回收率高，精密度好，适用蒜油胶囊中大蒜新素含量的测定。关键词：大蒜新素;高效液相色谱中图分类号：O657．7+2文献标识码：A文章编号：1004－8685（2013）09－2062－03

HPLCmethodfordeteminationofallitridiingarlicoilsoftcapsuleZHANGXiang－bing，ZHANGWei，SUYong－heng，YINGong－ju，ZHANGDing*HenanCenterforDiseaseControlandPrevention，Zhengzhou450016，China

Abstract：ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofallitridiingarlicoilsoftcapsulebyHPLC．Meth-odsTheseparationwascarriedonanC18columnbyusingthemobilephaseconsistingofacetonitrile+water（80+20）．Theflowratewas1．0ml/min．TheabsorptionwascarriedoutbyPDAusingthewavelengthat240nm．Re-sultsThemethodshowedgoodlinearityin0．2μg/ml～400μg/mlwiththecorrelationcoefficientof0．9999andtheRSDswerelessthan6%，andtherecoverieswere97．8%～101．3%，withthedetectionlimitof0．5ngandquantitativerangeof1．65ng～4μg．ConclusionThemethodissimpleandrapidwithhighrecoveryrateandgoodprecision，itcanbeusedforanalysisofallitridiingarlicoilsoftcapsule．Keywords：Allitridi；HPLC

大蒜新素（Allitridi），是以大蒜的鳞茎为主要原料提取的产品，也可化工合成。化学名称是二烯丙基三硫醚，分子式C6H10S3，相对分子质量178．34，常温下为淡黄色油状液体，微溶于水，溶于乙醇、氯仿或乙醚等有机溶剂。大蒜新素主要存在于大蒜的鳞茎中，由大蒜中的大蒜氨酸在大蒜酶作用下转化产生［1］，具强烈的大蒜臭和辣味。它具有抗菌抗病毒、增强机体免疫力、抗氧化延缓衰老、抗癌、防治心血管疾病等多种保健作用［2］。其本身无毒、无副作用，无残留和耐药性，能活化细胞，增强抗病能力，能去脂降压、降血糖、调节肠胃，因而广泛应用于养殖、药品和保健食品等各个行业［3］。关于大蒜新素的含量测定有多种检测方法，有比色法［4］、重量法［5］、气相色谱法［6］、气相色谱－质谱联用法等［7］，但操作较复杂，本文应用高效液相色谱方法对大蒜油胶囊中大蒜新素的含量进行了测定，该法操作简单，具良好的稳定性和重复性，为大蒜油胶囊中大蒜新素的含量提供了参考方法。

1材料与方法

1．1仪器与试剂

Waters2695高效液相色谱仪，配有二极管阵列检测

器（美国waters公司）；WatersXbridge－C18色谱柱（250mm×4．6mm，5μm）；乙腈（色谱纯，Fisher）；超纯水

（18．2MΩ·cm，Millpore公司）；BP211D十万分之一电子

天平（德国Sartorious公司）；大蒜新素对照品（中国药品生物制品检定所，88．4%）；0．45μm微孔滤膜（有机，天津市科亿隆实验设备有限公司）大蒜油胶囊（河南某生物医药科技有限公司，批号为201201、201202、201203三批）。1．2实验方法

1．2．1样品处理取0．5000g样品置于25ml容量瓶

中，用20ml四氢呋喃溶解，摇匀，用乙腈定容。用0．45μm微孔滤膜滤过后上机测定。1．2．2标准曲线的配制精密称取56．6mg大蒜新素

·2602·中国卫生检验杂志2013年8月第23卷第9期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Aug2013，Vol23，No9对照品（88．4%），用乙腈溶解并定容到50ml，配制为1000μg/ml的标准储备溶液。用1000μg/ml的标准储备溶液逐级稀释得到10μg/ml的标准溶液。同时分别精密吸取1000μg/ml和10μg/ml的标准溶液0．10ml，0．20ml，0．50ml，1．00ml，2．00ml，4．00ml置于10ml容量瓶中，用流动相定容到刻度，摇匀。得到12种浓度依次为0．10μg/ml，0．20μg/ml，0．50μg/ml，1．00μg/ml，2．00μg/ml，4．00μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，50μg/ml，100μg/ml，200μg/ml，400μg/ml的大蒜新素标准系列应用液。1．2．3色谱条件色谱柱：WatersXbridge－C18，250mm×4．6mm，5μm；流动相：乙腈+水溶液（80+20）；PDA检测器200nm～400nm扫描采集，240nm定量测定；流速：1．0ml/min；进样量：10μl；柱温：30℃。1．2．4样品测定取制备好的样品溶液，在标准溶液相同的色谱条件下进行分析测定，保留时间和紫外光谱定性，峰面积定量。2结果与讨论2．1流动相的条件选择由于大蒜新素中存在两个C－C双键，属于二烯烃类化合物，具有亲电子性质，因而选择了质子给予体溶剂乙腈做为溶剂来配制标准溶液来保证溶液的稳定性。同时按照反相液相色谱分离的原则，决定优选乙腈与水的流动相组合来摸索分析条件，通过反复调整，选择了乙腈+水（80+20）作为流动相。2．2测定波长的选择利用二极管阵列检测器对大蒜新素标准溶液在190nm～400nm处进行波长扫描，得到紫外扫描曲线图（图1），从图1上看到，随着波长的增大，其紫外吸收越来越小，而在235nm～260nm是一平缓区，260nm以后紫外吸收明显减少。考虑到在样品主要溶剂为四氢呋喃，其紫外截至波长为220nm，而溶质中也可能存在未知的紫外吸收干扰，综合考虑灵敏度和干扰性，选择了240nm作为测定波长。虽然灵敏度有所降低却能保证色谱图较为干净理想。图1大蒜新素的紫外扫描图（190nm～400nm）2．3样品提取方法的选择由于样品属于液体油状样品，加入流动相乙腈无法溶解，采用其它提取方案又会增加操作步骤，造成待测物质损失，因此选择了四氢呋喃做为溶剂来溶解样品后，乙腈稀释样品的方法来保证回收率。由于本样品的油脂含量很高，经反复实验加入四氢呋喃20ml才能够完全溶解，否则加入乙腈后会发现有油状液滴存在于容器底部。从标准溶液和样品溶液的色谱图（图2）上看出，色谱峰的分离度和峰形较好，出峰时间较短，在完全满足分析要求的情况下回收率较高。若无法分离，还需重新考虑提取方案。

图2标准溶液和样品溶液的色谱图2．4标准曲线和线性范围

在选定的色谱条件下对1．2．2的12种标准系列应用溶液进行测定（n=6），以浓度为横坐标，平均峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，在0．1μg/ml～400μg/ml的范围内，回归方程为A=8584C+3829，r=0．99999．线性关系很好。本法线性范围较宽，达到了3个数量级。在线性范围内，可根据精密度试验的结果（见图1），选择不同的标准工作曲线来满足不同的定量精度。2．5准确度试验及精密度

取标准系列应用溶液按本法条件连续进样6次，每次10μl，分别计算大蒜新素的相对标准偏差（RSD，见表1）结果表明，在0．2μg/ml～400μg/ml的范围内，其RSD均小于6%，达到了一定的分析精密度。

表1大蒜新素浓度和相对标准偏差对照表（n=6）浓度（μg/ml）0．100．200．501．02．04．0102050100200400

RSD%16．14．755．352．621．080．690．460．290．080．110．073．17

2．6回收率试验

取样品1．00g置于100ml容量瓶中，分别加入100μg/ml标准溶液0．50ml，1．00ml，2．00ml后按本法测

定，同时作试剂空白。计算本法回收率（表2）。由表2可见，本法平均回收率范围为98．4%～100．2%，说明在此范围内样品和标准的测定结果准确度和精密度较好。

表2方法回收率（n=6）样品本底值（μg/ml）加标浓度（μg/ml）测定均值（μg/ml）扣除本底后均值（μg/ml）加标回收率（%）RSD（%）12050168．948．997．80．24100219．499．499．40．10200322．6202．6101．32．72（下转第2066页）

·3602·中国卫生检验杂志2013年8月第23卷第9期ChineseJournalofHealthLaboratoryTechnology，Aug2013，Vol23，No9