v .. . .. . . . 资 料. . 毕 业 论 文

题 目：乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证 姓 名： 珊 学 号： 系 别： 年 级： 专 业： 医学检验 指导教师：

二 ○一 一 年 十二 月 目 录 中文文献 ......................................................................................................... 英文摘要 ......................................................................................................... 前 言 .......................................................................................................... 。 v .. . .. . . . 资 料. . 1. 材料与方法 ............................................................................................. 。 1.1 试剂盒 ............................................................................................... 1.2 仪器 .................................................................................................. 1.3 方法 .................................................................................................. 1.3.2．铺板方案 .................................................................................. 1.3.3．加样步骤 .................................................................................. 2. 结果 ........................................................................................................... 2.1 标准曲线与线性围 ............................................................................... 2.2 准确度（回收率）的验证 .................................................................. 2 2.3 精密度的验证 ..................................................................................... 2.3.1 板精密度的验证 ......................................................................... 2.3.2 板间精密度的验证 ..................................................................... 2.4 检测限（LOD）计算 ......................................................................... 5 3. 讨论 ......................................................................................................... 5 3.1 乙肝表面抗原定量分析的意义 ............................................................ 5 3.2 常用定量分析方法 ............................................................................ 6 3.3 方法概述 .......................................................................................... 6 3.4 方法学验证容 ................................................................................... 6 3.5 结果分析及应用评价 ......................................................................... 7 参考文献 ....................................................................................................... 7 v .. . ..

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. . . 资 料. . 乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法学验证

摘 要 目的：对蓝图生物工程生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行方法学验证，以判断是否能用于临床样本分析。方法：ELISA法定量分析，应用试剂盒HBsAg标准品从浓度为8ng/ml做2倍稀释的6个浓度梯度做标准曲线，以6，3，1.5ng/ml 3个浓度梯度5复孔做准确度，精密度和检测限等方法学验证。结果：标准曲线R2=0.997，准确度97.07%，1.5ng/ml的RSD为16.78%，不满足ng/ml级水平的RSD一般应<15%的要求，检测限LOD为0.172ng/ml， 低浓度样品（<1.5ng/ml）的检测在准确性和精密度方面都低于高浓度样品，不适合低浓度样品的检测。结论：该HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒不能用于临床标本的分析。

关键词 乙肝表面抗原 ELISA 定量分析 方法学验证

The reification of the HBsAg ELISA quantitative methodology Abstract Object: to verify the quantitative methodology of Fuzhou blueprint biological engineering company to make sure whether it ca be used to the analysis of Clinical Sample. Methods: ELISA quantitative methodology , make an Application of the standard HBsAg kit from the concentration of 8 ng/ml do 2 times diluted six concentration gradient to constitute a standard curve, testing v .. . .. . . . 资 料. . With 6, 3, 1.5 ng/ml 3 a concentration gradient 5 accurately precise and detection .Results: standard curve ,R2=0.997, the accuracy of RSD of 1.5ng/m is 16.78%，the RSD that cannot meet the demand of ng/ml basic level is less than <15% in common. The LOD is 0.172ng/ml, the testing of Low concentration samples （<1.5ng/ml）are lower than high concentration samples in both accuracy and precision , which as a result make it unsuitable for low concentration sample testing. Conclusion: the ELISA quantitative analysis kit of HBsAg cannot be used for the analysis of Clinical Sample.

Key words HBsAg Quantitative analysis Verification Methodology. v .. . ..

. . . 资 料. . 前 言 乙肝病毒感染是我国最常见的感染性疾病之一，而乙型肝炎血清标志物是检测乙肝病毒感染最主要的病原标志。随着免疫学技术的不断发展，抗原抗体检测灵敏度明显提高，使低水平乙肝病毒得以检出，对临床诊断及流行病学有重要意义[1]。ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、重复性好、可进行定量和半定量测定等优点，可以在酶免疫分析仪上做批量检测。目前临床上多倾向于做定量分析，若想知道检验结果是否可靠，实验室则必须对所用试剂盒进行方法学验证，本实验对蓝图生物工程生产的HBsAg的ELISA法定量分析试剂盒进行准确度，精密度和检测限等方法学验证，现报告如下。

1. 材料与方法 1.1 试剂盒 乙肝表面抗原ELISA法定量分析试剂盒，蓝图生物工程出品。 1.2 仪器 酶标仪：Bio-Rad 680 ；洗板机：Bio-Rad 1575；超纯水系统：Millipore Elix ；电热恒温培养箱(DNP-9052)精宏实验设备；振荡器（管械，KJ-201A）；移液器；Tip头；EP管。 1.3 方法 1.3.1．溶液配置 1×PBS缓冲液的配置： 称取8g NaCl、 0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4，溶于800ml蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L即可。 标准品的配置：原始标准品浓度为8 ng/ml。。取6个2mlEP管，分别标记