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ＢＫ病毒在干细胞移植术后出血性膀胱炎

中的作用研究

谢颖韩悦吴德沛孙爱宁岑建农朱子玲

【摘要】目的探讨ＢＫ病毒在造血干细胞移植术（ＨＳＣＴ）后出血性膀胱炎（Ｈｃ）中的致病作用，分析ＢＫ病毒尿及ＨＣ的相关危险因素。方法收集２００６年８月至２００７年１１月间８０例ＨＳＣＴ患者的血、尿标本，用ＰＣＲ方法检测ＢＫ病毒ＤＮＡ，同时用免疫荧光组化法检测血巨细胞病毒（ＣＭＶ）抗原，２０例健康成人为正常对照。结果８０例ＨｓＣＴ患者中１５例发生ＨＣ（发病率１８．８％）・，中位发生时间为移植后４４（１３—１５０）ｄ，持续时间ｌｌ（２—２５）ｄ。８０例患者中尿检出ＢＫ病毒３０例（检出率３７．５％），其中１３例为ＨＣ患者（占ＨＣ组８６．７％）。ＨＣ患者尿ＢＫ病毒中位检出时间为移植后２３（０一ｓ６）ｄ，早于ＨＣ发生时间。尿ＢＫ病毒持续阳性中位时间为７（２—１４）周，长于ＨＣ持续时间。∞例ＨＳＣＴ患者中１２例检出ＣＭＶ抗原血症，尿ＢＫ病毒阳性组检出率为３６．７％（１１／３０），ＨＣ患者检出

率为４０．０％（６／１５）。３０例尿ＢＫ病毒阳性患者中９例发生Ⅱ一Ⅳ度急性移植物抗宿主病（ａＧＶＨＤ）（３０．Ｏ％）。有２例ＨＣ患者及２０例正常对照者未检出ＢＫ病毒尿。所有血标本ＢＫ病毒检测均阴性。单因素分析显示ＣＭＶ抗原血症、Ⅱ一Ⅳ度ａＧＶＨＤ是ＢＫ病毒尿的危险因素。结论ＢＫ病毒尿是ＨＳＣＴ术后迟发性ＨＣ的主要发病原因，ＣＭＶ感染与ａＧＶＨＤ可能诱发ＢＫ病毒相关性ＨＣ的发生。【关键词】多瘤病毒，人，ｌ型；膀胱炎；造血干细胞移植

ＴｈｅｒｏｌｅｏｆＢＫｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｃｙｓｔｉｔｉｓａｆｔｅｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｋｍｃｅＨ

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Ｃｏｍｓｍｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＷＵＤｅ－ｐｅｉ。Ｅｍａｉｌ：ｗｕｄｅｐｅｉ＠５砒ｅｄ乩ｃｎ

【Ａｂｓｔｒａｃｔ】ＯｂｊｅｄｄＹｅＴｏｓｔｕｄｙｔｈｅｒｏｌｅｏｆＢＫｖｉｒｕｓ（ＢＫｐｏｌｙｏｍａｖｉｍｓ）ｉｎｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆｔｈｅｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｃｙｓｔｉｔｉｓ（ＨＣ）ａｆｔｅｒｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ（ＨＳＣＴ）ａｎｄａｎａｌｙｚｅｔｈｅｒｉｓｋｆａｔｏｒｓｆｏｒＢＫｖｉｒｕｒｉａａｎｄＨＣ．ＭｅｔｈｏｄｓＦｒｏｍＡｕｇｕｓｔ２００６ｔｏＮｏｖｅｍｂｅｒ２００７．ｂｌｏｏｄａｎｄｕｒｉｎｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｆｒｏｍ８０ｐａｔｉｅｎｔｓｕｎｄｅｒｇｏｉｎｇＨＳＣＴ．ＢＫｖｉＩＬｌＳＤＮＡｗａｓｄｍｅｃｔｅｄｗｉｔｈＰＣＲＣｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｍｓ（ＣＭＶ）ａｎｔｉｇｅｎＷａｇｄｅｔｅｃｔｅｄｗｉｔｈｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｅｅｎｃｅｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａ］蚴１１Ｉｌａｔｉｏｎ．Ａｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐｉｎｃｌｕｄｉｎｇ２０ｈｅａｌｔｈｙｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ８Ｗａｇｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．ＲｅｓｕｌｔｓＬａｔｅ－ｏｎｓｅｔＨＣｏｃｃｕｒｒｅｄｉｎ１５ｏｆｔｈｅ８０ＨＳＣＴｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈａｌｌｉｎｃｉｄｅｎｃｅｏｆ１８．８％．１１１ｅｍｅｄＪａｎｏｎｓｅｔｔｉｍｅｏｆＨＣＷａｇ４４（１３．１５０）ｄａｙｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ＢＫｖｉｍｒｉａＷＳＳｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎ３０ｏｆｔｈｅ８０ＨＳＣＴｐａｔｉｅｎｔｓ（３７．５％）ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆｖｉｒｕｒｉａｉｎｔｈｅＨＣｐａｔｉｅｎｔｓＷａｇ８６．７％（１３／１５）．ＴｈｅｍｅｄｉａｎｔｉｍｅｏｆＢＫｖｉｒｕｒｉａｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎＨＣｐａｔｉｅｎｔｓｗａｓ２３（０－５６）ｃｌａｙｓａｆｔｅｒｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ．ｂｅｉｎｇｅａｒｌｉｅｒｔｈａｎｔｈｅｏｎｓｅｔｔｉｍｅｏｆＨＣ．ＴｈｅｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅｔｉｍｅｏｆＢＫｖｉｒｕｒｉａｗａｇ７（２－１４）ｗｅｅｋｓ，ｂｅｉｎｇｍｕｃｈｌｏｎｇｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆＨＣ（“ｄａｙｓ）．ＣＭＶａｎｔｉｇｅｎｖｉｒｅｍｉａＷａｇｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎ１２ｏｆｔｈｅ８０ｔｒａｎｓｐｌａｎｔｅｄｐａｔｉｅｎｔｓ．ｗｉｔｌＩａｐｏｓｉｔｉｖｅｒａｔｅｏｆ３６．７％ｉｎｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＢＫｖｉｒｕｒｉａａｎｄ４０．０％ｉｎＨＣｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｎｉｎｅｏｆｔｈｅ３０ＨＣｐａｔｉｅｎｔｓｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｃｕｔｅｓｒｄｔｖｅｒｓｕｓｈｏｓｔｄｉｓｅａｓｅ（ａＧＶＨＤ）ｏｆｇｒａｄｅＩＩ－１Ｖ（３０．Ｏ％）．ＢＫｖｉｒａＳＷａｇｎｏｔｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎ山ｅｕｒｉｎｅｏｆｔｈｅｒｅｍａｉｎｉｍｇｔｗｏＨＣｐａｔｉｅｎｔｓａｎｄｔｈｅ２０ｃｏｎｔｒｏｌｓｕｂｊｅｃｔｓ∞ｗｅｌｌ舶ｉｎａｌｌｔｈｅｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓ．ＵｎｉｖａｒｉａｔｅａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔＣＭＶｖｉｒｅｍｉａａｎｄａＧＶＨＤｏｆ掣＿ａｄｅＩＩ—ＩＶｗｅｒｅａｇｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｌＩｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅｏｆＢＫｖｉｍｒｉａＣｏｎｄｕｓｉｏｎｓＢＫｖｉｒｕｒｉａｉＳｔｈｅｍａｉｎｃａｕｓｅｏｆｔｈｅｌａｔｅ－ｏｎｓｅｔＨＣａｆｔｅｒＨＳＣＴ．ＣＭＶｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄａＧＶＨＤｍａｙｃｏｎｔｒｉｈａｔｅｔｏｔｈｅｏｃｃｕｒｒｅｎｃ．ｅｏｆＨＣａｇｓｏｃｉａｔｉｅｇｗｉｔｈＢＫｖｉｒｕｓ．【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】Ｐｏｌｙｏｍａｖｉｒｕｓｈｏｍｉｎｉｓ１；Ｃｙｓｔｉｔｉｓ；Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｃｅｌｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ

基金项目：江苏省医学领军人才培养项目（Ｌ１２００６２６）；江苏省自然科学基金青年科技创新人才项目（ＢＫ２００７５０８）；江苏省卫生厅医学重点人才项目（ＲＣ２００７０７３）作者单位：２１５００６卫生部血栓与止血重点实验室江苏省血液研究所苏州大学附属第一医院血液科通信作者：吴德沛．Ｅｍａｉｌ：ｗｕｄｅｐｅｉ＠ｓｕｃｈ．ｅｄｕ．∞

．论著

万方数据ＢＫ病毒属于人类乳头状多瘤病毒，初次感染多

发生在儿童时期，感染后可长期潜伏于人体泌尿道

中，当机体免疫功能受抑时复活，大量复制而致

病…。造血干细胞移植术（ＨＳＣＴ）后迟发性出血性

膀胱炎（ＬＯＨＣ）发生在预处理结束２周之后，表现为不同程度的血尿，伴或不伴尿频、尿痛等尿路刺激

症状，严重者后期会出现尿路梗阻或肾衰竭。ＢＫ病

毒复活并持续高水平复制被认为是ＬＯＨＣ发生的主

要原因，但部分非ＨＣ患者尿中也可检出较高载量

的ＢＫ病毒，其他因素也可能参与ＬＯＨＣ的发病。

目前对ＢＫ病毒在ＨＳＣＴ术后ＬＯＨＣ中的致病作用、

机制、相关危险因素及治疗方法尚在研究中。

资料与方法

１．对象：２００６年８月至２００７年１１月间在本院接受ＨＳＣＴ的血液病患者共８０例，男５２例，女２８

例，中位年龄３５（１０—５９）岁。其中急性淋巴细胞白

血病（ＡＬＬ）１８例，急性髓系白血病（ＡＭＬ）２１例，慢

性粒细胞白血病（ＣＭＬ）２０例，多发性骨髓瘤（ＭＭ）４例，非霍奇金淋巴瘤１２例，杂合性白血病２例，浆

细胞性白血病ｌ例，淋巴瘤白血病１例，重型再生障

碍性贫血１例。移植类型分别采用：自体移植２４

例，同胞全相合异基因移植３６例，无关供体全相合

异基因移植１６例，单倍体半相合异基因移植４例。

预处理方案：大部分病例采用司莫司汀＋环磷酰胺

＋羟基脲＋阿糖胞苷（Ａｒａ—Ｃ）＋美法仑（改良

ＢＵＣＹ）方案，部分ＡＬＬ病例采用全身照射＋Ａｒａ－Ｃ

＋环磷酰胺（ＴＢＩ＋ＣＹ）方案，无关供体和半相合供

体采用ＢＵＣＹ＋抗胸腺细胞球蛋白（ＡＴＧ）方案，淋

巴瘤采用司莫司汀＋ＶＰ－１６＋Ａｒａ－Ｃ＋美法仑

（ＢＥＡＭ）方案，ＭＭ用美法仑方案，５例采用非清髓

性或减低强度预处理（福达华＋ＢＵ＋Ａｒａ—Ｃ＋ＡＴＧ

或福达华＋抗淋巴细胞球蛋白＋环磷酰胺）。２．ＨＣ的分级诊断与防治：（１）诊断：ＨＳＣＴ术后

无明显诱因出现不同程度的血尿，伴或不伴尿痛、尿

频等刺激症状，同时排除泌尿系细菌感染、结石、肿

瘤等所致的血尿。体检可发现膀胱区压痛，超声、

ＭＲＩ等检查发现膀胱壁增厚、充血，膀胱腔内有血

块。ＨＣ分级：０级：没有膀胱出血或刺激症状。

ｌ级：镜下血尿、伴或不伴尿频、尿痛、排尿困难等。

２级：肉眼血尿。３级：肉眼血尿并有小血块。４级：

伴有大血块、需要仪器清除血块、或导致尿路梗阻的

肉眼血尿。（２）预防：预处理时常规水化、碱化。环磷酰胺静滴同时应用美司钠预防，每日总剂量为环磷酰胺剂量的１．６—２．０倍。（３）治疗：加强水化，

碱化。选用广谱抗病毒药静脉滴注，如利巴韦林

２５０—５００ｍｇ，１次／１２ｈ；膦甲酸钠６０ｎａｇ・ｋｇ～・ｄ～；阿昔洛韦５ｍｇ／ｋｇ，１次／８ｈ等，合并巨细胞病

毒（ＣＭＶ）抗原血症时加用更昔洛韦静脉滴注。静

注人丙种球蛋白免疫支持。治疗７ｄ后未缓解时加

用生理盐水膀胱灌注，保守治疗未缓解时选择膀胱

血管栓塞术。

３．其他移植后并发症的防治：（１）急性移植物

抗宿主病（ａＧＶＨＤ）用环孢素Ａ（ＣｓＡ）＋短程甲氨蝶

呤（ＭＴＸ）预防，部分病例用ＦＫＳ０６代替ＣｓＡ，或加

用ＡＴＧ。出现ＧＶＨＤ时调整免疫抑制剂及加用糖

皮质激素等治疗。（２）ＣＭＶ感染：移植前１０ｄ至移

植前２ｄ静滴更昔洛韦进行预防。检出ＣＭＶ抗原

血症时静滴更昔洛韦５ｎａｇ・ｌ‘ｇ一・ｄ～，直至抗原血症转阴。（３）肝血管闭塞病（ＶＯＤ）：小剂量肝素、

前列腺素Ｅ预防。（４）真菌感染：口服氟康唑预防，

用伊曲康唑或两性霉素Ｂ脂质体等治疗。

４．病毒检测：（１）ＢＫ病毒检测：所有移植患者

在移植前１周至出院当周（最短３周，最长１６周），

每周１次同时收集血液和尿液。取健康成人２０例

为正常对照。高速离心（８０００ｒ／ｒａｉｎ，３ｍｉｎ）取血浆

及尿液上清２００山，用病毒基因组ＤＮＡ／ＲＮＡ提取

试剂盒（北京ＴＩＡＧＥＮ公司产品）提取病毒ＤＮＡ，

４５一双蒸水洗脱溶解。ＰＣＲ检测：正向引物

５’ＡＧＴＣｒＩｆ】［ＴＩ＇ＡＧＧｌ３ＴＣＴＴＣＴＡＣＣ３７，反向引物

５’ＧＧＴＧＣＣＡＡＣＣＴＡｌ’ＧＧＡＡｃＡＧ３儿２１；反应体系：总

体积２５一，其中ＰＣＲ－ｍｉｘｔｕｒｅ１２．５山（含０．１ＵＴａｑ酶，５００Ｉ＿Ｌｍｏｉ／ＬｄＮＴＰ，３ｍｍｏＬ／ＬＭｇｃｌ２等），正向、

反向引物各ｏ．５山，ＤＮＡ模板５一，灭菌双蒸水６．５

山。反应条件：９４℃５ｍｉｎ，９４℃４５ｓ，５７℃３０８，７２℃３０ｓ，共４０个循环，７２℃１０ｒａｉｎ。ＢＫ病毒ＰＣＲ

产物为１７６ｂｐ大小，用１．８％琼脂糖凝胶电泳观察。

每次扩增均以双蒸水为模板为阴性参照，ＢＫ病毒

ＤＮＡ为模板为阳性参照。（２）ＣＭＶ抗原检测：采用

ＣＭＶＢｒｉｔｅ荧光免疫组化抗原血症试剂盒（荷兰

ＩＱ公司产品）。ＣＭＶ抗原阳性和阴性对照玻片由

试剂盒提供。检测过程：分离白细胞，调整细胞浓

度，制备细胞涂片，固定和破膜，免疫荧光染色，读片

和结果判断（ＰＰ６５阳性细胞呈均匀的绿色或黄绿

色）。

５．统计学处理：应用ＳＰｓＳ１３．０软件。单因素

分析用ｘ２检验，多因素分析采用ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归分析，

事件时间分布用Ｗｉｌｅｏｘｏｎ秩和检验分析。

万方数据