添加剂世界Ａｄｄｉｔｉｖｅ　Ｗｏｒｌｄ　饲料防霉剂对饲料防霉效果的检测　王姣姣，刘　博，赫彩霞，高文惠　（河北科技大学生物科学与工程学院，石家庄０５００００）　摘要：在２５～２８℃，水分含量８５％的环境条件下，通过在不同水分的饲料中加入不同浓度的饲料防霉剂，　每隔一定的时间对饲料进行感官检测并对饲料中的霉茵进行计数，同时进行水分含量的测定。由霉菌数的变化而　得出防霉剂的抑茵效力以及饲料水分含量和防霉剂防霉效果的关系。结果表明，该防霉剂在一定的水分含量下对　饲料具有较好的防霉作用。　关键词：防霉剂；霉茵；水分含量；防霉效果　中图分类号：￥８１６．８；Ｒ３７９文献标志码：Ａ文章编号：１００１—００８４（２０１３）０９一ｏ０３０一ｏ４　

Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｏｎ　Ａｎｔｉｍｏｕｌｄ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｆｅｅｄ　Ｍｏｕｌｄ　Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ＷＡＮＧ　Ｊｉａｏｊｉａｏ，ＵＵ　Ｂｏ，ＨＥ　Ｃａｉｘｉａ，ＧＡＯ　Ｗｅｎｈｕｉ　（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｈｅｂｅｉ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｉｊｉａｚｈｕａｎｇ　０５００１８，Ｃｈｉｎａ）　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｔ　２５－２８　ｏＣ。ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　８５％ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｇｒａｄｉ．　ｅｎｔ　ｆｅｅｄ　ｍｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｗａｓ　ａｄｄｅｄ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｆｅｅｄｓ．Ｓｅｎｓｏｒｙ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ，ｆｅｅｄ　ｍｏｌｄ　ｃｏｕｎｔ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒ—　ｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｗｅｒｅ　ｄｏｎｅ　ｉｎ　ａ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｉｎｔｅｒｖａｌ　ｏｆ　ｔｉｍｅ．Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｆｅｅｄ　ｍｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ　ｗａｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ　ｍｏｌｄ　ｃｏｕｎｔ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｏｆ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｉｎ　ｆｅｅｄ　ａｎｄ　ｍｉｌ—　ｄｅｗｐｒｏｏｆ　ｅｆｆｅｃｔ　ｗａｓ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｃｈａｎｇｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｆｅｅｄ　ｍｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉ—　ｔｏｒ　ｉｎ　ｃｅｒｔａｉｎ　ｍｏｉｓｔｕｒｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　ｆｅｅｄ　ｈａｓ　ｇｏｏｄ　ｍｉｌｄｅｗｐｒｏｏｆ　ｆｕｎｃｔｉｏｎ．　Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｍｏｕｌｄ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ；ｍｏｕｌｄ；ｄｏｓａｇｅ；ｍｉｌｄｅｗｐｒｏｏｆ　ｅｆｆｅｃｔ　

我国是一个饲料生产和消耗大国，然而在饲　料的生产、加工、运输及贮存过程中，饲料霉变　的现象屡见不鲜，霉菌毒素对饲料会产生不同程　度的污染，造成了巨大的经济损失，已成为饲料　业和畜牧业生产中不可忽视的问题。据联合国粮　食组织估算，全世界每年约有５％　７％的粮食、饲　料等农产品受到霉菌的污染，因而饲料的防腐保　鲜问题尤为重要。　控制饲料霉变的措施很多，Ｋｉｍ等研究了物理　防霉。但目前在生产中应用最广的是防霉剂…。随　着饲料工业的快速发展，饲料防霉剂的应用Ｅｌ益　广泛，对饲料行业的贡献越来越大，品种也日益　增多，因此对饲料防霉剂防霉效果的检验成为关　键【　一　。　饲料防霉剂防霉效果的检测方法有杯碟法、　最低抑菌浓度（ＭＩＣ）法、饲料强化防霉（破坏性试　验）、饲料常规试验、二氧化碳稀释法、温度测定　法、平皿记数法等。在众多防霉剂中，丙酸类防　霉剂因其成本较低、公认安全、世界通用等特点　受到饲料企业和研究者的青睐　。ｌ。本试验将防霉　剂添加到饲料中，通过破坏性实验法和平皿计数　法研究其对饲料的防霉效果。　

收稿日期：２０１３—０６—１４　基金项目：河北省科技支撑计划项目（１０２７６９０２Ｄ）；石家庄市科技支撑计划项目（１２１４９４７２Ａ）　作者简介：王姣姣（１９８８一），女，河北衡水人，硕士研究生，研究方向为食品安全与检测。　｝通信作者：教授，硕士生导师，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｅｎｈｕｉｇａｏ＠１２６．ｃｏｒｎ。　

３０饲料嚣览２０１３￣簟９期　Ａｄｄｉｔｉｖｅ　Ｗｏｒｌｄ添加剂世界　１材料与方法　１．１材料与设备　分析天平：上海精科天平，ＪＡ２００３；电热恒　温培养箱：中仪国科（北京）科技有限公司，ＤＨＰ一　９０８２；电热干燥箱：江苏省东台县电器厂，　２００２—２型；高压灭菌锅：上海申安医疗器械厂，　ＳＹＱ—ＤＳＸ＇２８０Ｂ；无菌工作台：北京亚泰科隆仪　器技术有限公司，ＹＴ－Ｃ卜１Ｎ型；试管架、试管　（２５　ｍＬ）、三角瓶（５００　ｍＬ）、平皿（９　ｅｍ）、量筒　（２５　ｍＬ、１００　ｍＬ）、洗耳球、称量瓶、烧杯（１　０００　ｍＬ）、移液枪、枪头。　培养基为硝酸钠２　磷酸二氢钾１　硫酸镁　（ＭｇＳＯ　・７Ｈ　０）０．５　ｇ、氯化钾０．５　ｇ、硫酸亚铁０．Ｏ１　ｇ、氯化钠６０　ｇ、蔗糖３Ｏ　ｇ、琼脂２０　ｇ、蒸馏水　１　０００　ｍＬ。上述试剂中琼脂为生化试剂，其余为分　析纯试剂。　稀释液为０．８５％生理盐水：称取分析纯ＮａＣ１　８．５　ｇ，定容至１　０００ｍＬ。　１．２试验方法　１．２．１破坏性试验　提高饲料含水量为１２％、１４％、１６％，将恒温　培养箱中的湿度调节为８５％，温度２８℃。　１．２．２平皿计数法　将加入不同比例（０、０．４％。、０．６％ｏ）防霉剂的饲　料在一定条件下储存，每隔７　ｄ进行取样，用稀释　液稀释、振荡后将上层液吸取１　ｍＬ，与培养基混　匀，培养后进行计数。　１．２＿３试验分组与编号　在饲料中添加不同量的防霉剂，同时按照试验　要求调节饲料中的水分含量，并对样品进行编号，　具体方案见表ｌ。　表１试验分组　１．３操作步骤　１．３．１培养基与稀释液的配制　按照ＧＢ厂ｒｌ３０９２—２００６用蒸馏水加温溶解培养　基成分，分装后１２１℃高压灭菌３０　ｍｉｎ。必要时，　可酌量增加琼脂。称取分析纯ＮａＣ１　８．５　ｇ，用蒸馏　水溶解，定容至ｌ　０００　ｍＬ，制成稀释液。按需要量　分装在试管和三角瓶中，１２１　ｏＣ高压灭菌３０　ｒａｉｎ。　其他玻璃器具和枪头在同样条件下灭菌备用。　１．３．２感官检测　观察饲料的色泽，闻饲料的香气，并挑起少量　饲料观察形态。　１．３－３取样检测　将饲料编号后在试验条件下储存，每隔７　ｄ进　行取样。以无菌操作称取有霉菌的饲料２５　ｇ，放人　含有２２５　ｍＬ灭菌生理盐水的２５０　ｍＬ三角瓶中，振　荡３０　ｍｉｎ，即为１：１０稀释液。用移液枪取上述稀　释液１　ｍＬ，注入盛有９　ｍＬ稀释液的试管中，充分　振荡，使霉菌孢子分散，完成１００倍稀释。用相同　的方法完成１　０００倍稀释。将以上稀释液用移液枪　各取１　ｍＬ注入平皿中，倒入适量４５℃以下的培养　基，充分混匀，待其凝固后，倒置放入恒温培养箱　中进行培养，３　ｄ后开始观察，培养观察ｌ周。　１．３．４水分含量测定　称取饲料２．０００　ｇ放人称量瓶，在１０３＋２　ｏＣ的干　燥箱中烘干３　ｈ，取出在干燥器中冷却至室温后称　量，再放入干燥箱中干燥３０　ｍｉｎ，取出后冷却称　量，两次称量值相差＜Ｏ．００２　ｇ视为恒重，计算水分　含量。　１．４数据分析　试验数据用ＯｒｉｇｉｎＰｒｏ８软件根据数据作图，观　察储存期内霉菌数的变化以及饲料水分含量的变化　趋势和规律。　２试验结果　２．１感官检验　储存７　ｄ后取出，１￣９号样品在色泽、气味和　组织方面无明显变化。储存１４　ｄ后取出，１—２号以　及４～９号样品色泽变浅变暗，气味减弱，组织方面　无变化，３号样品色泽变暗，稍有霉味儿，大量结　块。储存２１　ｄ后，２号少量结块，３号长出肉眼可　见的少量霉菌，６号微量结块。其他样品组织方面　无变化，色泽变暗，气味减弱，无异味。储存３５　ｄ　后，１号、５号、６号少量结块，２号大量结块，３　号长出大量霉菌，４号、７号、８号、９号无变化。　２．２霉菌检测数　储存之前用平皿计数法测量饲料原样品的霉菌　

２０１３年第９期饲料博览３１　添加剂世界Ａｄｄｉｔｉｖｅ　Ｗｏｒｌｄ　数，之后每隔７　ｄ测量１次，到达２１　ｄ后隔１４　ｄ测　量１次，随着天数的增加，饲料中霉菌数逐渐增　加，测量结果见表２。　

表２饲料储存试验霉菌检测数　储藏时间／ｄ　ｌ　２　３　４　５　６　７　８　９　

注：检测物为饲料的ｌＯ倍稀释液；“＋”表示数量极多。　由表２可以看出，加人防霉剂０—７　ｄ，霉菌数　有所下降。由此可见，此种防霉剂具有一定的杀　菌作用；３号和６号样品在ｌ４～２１　ｄ中霉菌数增长速　度加快，其他样品在２１～３５　ｄ时霉菌数增长速度也　加快。　２．３水分含量　试验中测量霉菌数的同时，对饲料的水分含　量也进行了测量，数据记录结果见表３。　

表３饲料储存试验水分含量的测定　．％　￣储ｔＮ藏／ａ　ｌ　２　３　４　５　６　７　８　９　

由表３可知，饲料储存过程中，水分含量一般　先上升再下降然后第２次上升。　３讨论　３．１试验方法的选择　破坏性试验旨在提高饲料水分含量，恶化环　境（高温、高湿）从而促使饲料尽快发霉。这种方　法作为防霉剂性能评判的中期试验，试验结果较　直观，在较短时期内（１０—２０　ｄ）即能得出防霉效　果；对各种饲料防霉剂的评价普遍适用。何万领　等在试验中调节试验材料的水分含量并放人２６℃　的恒温箱中储存，得出较理想的试验结果－－”。缺点　是试验时间仍然较长，对防霉性能相近的防霉剂　测定结果不够准确ｎ　。　

３２　Ｍ￣ｔｌｌｍ　２０１３￣ＪｌｉＳｍ　

平皿记数法根据霉菌生理特性和防霉剂防霉　机理，选择适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的培　养基，采用平皿记数法，在菌液中加入防霉剂，　培养后测定霉菌菌落总数，菌落总数越少，表明　其防霉抑菌效果越佳，并根据测定的数据计算出　防霉剂的抑菌率。周永红等在防霉剂效果检测中　使用了此种方法，并根据测定的数据计算出各种　防霉剂的抑菌率，操作方便，结果准确ｎ　。　本试验综合以上两种试验方法，将培养箱的　温度调为霉菌的最适生长温度，即２５～２８℃，将湿　度调为８５％，在尽量缩短试验时间的基础上保证了　试验结果的准确性。　３．２感观检测　由感官检测结果可知，在高温、高湿的储存　环境中，饲料的色泽首先会发生变化，气味减　弱，随着时间的推移会少量结块，此时，饲料已　经变质，商品及食用价值消失。继续储存，饲料　表面会长出肉眼可见的霉菌，发生腐败。根据储　存期内霉菌数检测结果可知，对水分含量相同、　防霉剂添加量不同以及防霉剂添加量相同、水分　含量不同的饲料进行直观的比较，在储存期的后　期，防霉剂的防霉作用不显著；３号和６号样品水　分含量相同，防霉剂添加量不同，但最终霉菌数　相似，因此，当饲料的水分含量在１６％时，防霉剂　作用不显著，此时应大幅度提高防霉剂的添加　量，以达到防霉效果。综合感官检验结果，在水　分含量第２次上升时饲料发生霉变；加入防霉剂的　饲料水分含量下降较慢，可见，此种防霉剂具有