（中文标题：黑体，二号） 枸杞甜菜碱含量测定方法的比较研究
Comparative study on methods for determination of betaine from Lycium barbarum L. （英文标题：Times New Roman，20）
院 系：生命科学学院 专 业：生物技术 年 级：2003级 学 号：12003242527 姓 名：马佳卉 指导教师：张自萍 （黑体，三号） ,. 枸杞甜菜碱含量测定方法的比较研究 （标题：黑体二号） 摘 要（黑体，小四）：本实验利用甲醇加热回流提取枸杞甜菜碱，提取物经活性炭脱色、雷氏盐沉淀、分光光度法测定不同产地枸杞甜菜碱含量；或直接利用NH2柱未经衍生高效液相色谱法测定枸杞甜菜碱含量。通过比较分光光度法和高效液相色谱法测定的枸杞甜菜碱含量，选择适宜的甜菜碱含量测定方法。由实验结果可知，NH2柱未经衍生高效液相色谱法快速、简便、重复性好，所测甜菜碱含量明显高于分光光度法。 本研究表明NH2柱未经衍生高效液相色谱法能快速准确地测定枸杞甜菜碱含量，可用于枸杞的质量控制.（仿宋，小四，1.5倍行距） 关键词：枸杞子；甜菜碱；分光光度法；高效液相色谱法
Comparative study on methods for determination of betaine from Lycium barbarum L. （Times New Roman，18，加粗） Abstract（Times New Roman，14，加粗）: To apply methanol-refluxed
extraction method to extract betaine from Lycium barbarum L., extraction was decolored by active carbon, precipitated with Remecke salt and the contents of betaine from different producing areas were determined by spectrophotometry; ,. and the contents of betaine were directly determined by HPLC with NH2 stationary phase without derivatization of betaine. The suitable determination method was selected through comparing the methods of spectrophotometry and HPLC in determining the content of betaine from Lycium barbarum L. From the result we can see that HPLC is rapid, accurate, and the contents of betaine determined by HPLC were higher than spectrophotometry. This study showed that HPLC with NH2 stationary phase without derivatization of betaine can be applied to determine the content of betaine from Lycium barbarum L. rapidly and accurately. （Times New Roman，12，1.5倍行距）
Keywords: Lycium barbarum L; betaine; spectrophotometry; HPLC ,. 目 录（黑体，三号） 前 言……………………………………………………………………………………… 4 1.材料与器材……………………………………………………………………………… 5 1.1原料 …………………………………………………………………………………… 5 1.2试剂 …………………………………………………………………………………… 6 1.3仪器与设备 …………………………………………………………………………… 6 2．实验方法 ……………………………………………………………………………… 6 2.1分光光度法测定枸杞甜菜碱含量 …………………………………………………… 6 2.1.1实验原理 …………………………………………………………………………… 6 2.1.2枸杞甜菜碱供试品溶液的制备…………………………………………………… 6 2.1.3甜菜碱标准曲线的建立…………………………………………………………… 6 2.1.4供试品溶液的含量测定…………………………………………………………… 7 2.2 高效液相色谱法测定枸杞甜菜碱含量……………………………………………… 7 2.2.1 色谱分析条件……………………………………………………………………… 8 2.2.2 枸杞甜菜碱供试品溶液的制备…………………………………………………… 8 2.2.3 对照品溶液的制备………………………………………………………………… 8 2.2.4 甜菜碱标准曲线的制备…………………………………………………………… 8 2.2.5供试品溶液的含量测定…………………………………………………………… 8 2.2.6方法学考察………………………………………………………………………… 9 2.2.7 回收率实验………………………………………………………………………… 9 3.结果与分析……………………………………………………………………………… 9 3.1 分光光度法与高效液相色谱法测定枸杞甜菜碱含量结果………………………… 9 ,. 3.2高效液相色谱法测定枸杞甜菜碱含量的方法分析………………………………… 10 4.讨论……………………………………………………………………………………… 10 参考文献 …………………………………………………………………………………… 11 谢 辞…………………………………………………………………………………… 13 （宋体，小四，1.5倍行距）
前 言（黑体，四号） （宋体，小四，1.5倍行距）宁夏枸杞（Lycium barbarm L.）系茄科枸杞属盐生植物，具有很强的耐盐碱、耐瘠薄、抗旱、抗风沙等特性，集中种植在宁夏、新疆、河北、内蒙等地区，是西北生态建设的先锋树种[1]，也是西北干旱地区的重要经济作物。其果实，枸杞子是我国重要的药用植物资源和药食同源的名贵中药材，具有多种生理活性和保健功能。明朝李时珍在《本草纲目》中就有枸杞功效的记述[2]：“主五内邪气，热中消渴，补精气诸不足，易颜色，变白，明目安神，令人长寿”。现代药理学研究表明[3]，枸杞子具有增强免疫力、降血压、降血脂、防衰老、抗氧化、抗肿瘤等多方面的药理作用。 近年来的研究发现，枸杞的主要化学成分有枸杞多糖(LBP)[4,5]、枸杞黄酮[6]、甜菜碱（betaine）[7]、类胡萝卜素及类胡萝卜素酯[8]、维生素C[9]、莨菪亭(scopoletin)[10]、多种氨基酸及微量元素K、Na、Ca、Mg、Cu、Fe、Mn、Zn、P等成分[11]。此外，尚从枸杞中分离得到环肽(Cyclicpeptides)及枸杞素A—D[12]、脑甙脂类[13]等。其中，枸杞多糖为枸杞主要活性成分，具有增强免疫作用；甜菜碱、玉蜀黍黄素及玉蜀黍黄素二棕榈酸、脑甙脂类对四氯化碳引起的肝损害有保护作用；枸杞素A和B有抑制血管紧张肽转化酶的活性[14] 。 甜菜碱(Betaine)化学名称三甲基胺乙丙酯(C5H11NO2)，系甘氨酸的三甲基衍生物，是,. 一种广泛分布于动植物组织中的季铵型水溶性生物碱，是人体惟一可替代叶酸或S-腺苷蛋氨酸作为甲基供体、参与蛋氨酸循环及卵磷脂合成的物质，是枸杞[15]、肉苁蓉[16-17]等多种传统中药的重要活性成分。 据文献报道[18]，甜菜碱具有促进脂肪代谢、抗脂肪肝、保护肾脏、降压、缓和应激、增进食欲、稳定维生素等多种药理作用。通过测定人体内组织或排泄物中的甜菜碱含量，有助于临床诊断人体的代谢异常。此外甜菜碱作为生物刺激剂，可促进家畜生长，增加产蛋量，作为两性表面活性剂、保湿剂、食品添加剂、防腐剂等，已广泛用于化工、食品等行业。 近年来，甜菜碱对植物抗逆、抗旱盐性的作用逐渐受到关注，一些研究认为[19－20]，甜菜碱的积累能提高细胞的渗透调节能力，在一定程度上提高细胞SOD、POD等细胞保护酶的活性，抑制过氧化作用产物丙二醛(MAD)的积累，维持细胞膜的稳定性和完整性，而且甜菜碱可作为渗透调节物参与稳定生物大分子物质的结构与功能。 甜菜碱作为枸杞果、叶、柄中主要的生物碱之一，在体内起甲基供体作用，是枸杞中对脂质代谢或抗脂肪肝作用的主要活性物质[21]。因此，枸杞甜菜碱的提取分离、定量测定已受到广泛的关注。 目前枸杞甜菜碱含量测定有分光光度法、薄层扫描法、非水滴定法和高效液相色谱法等。药典中枸杞甜菜碱的含量测定采用薄层扫描法[22]，此法多用甲醇、正丁醇提取样品，以不同比例的氯仿-甲醇-水或其他展开剂在硅胶薄层板上展开，用改良碘化铋钾试剂显色后进行扫描测定，且多采用双波长扫描法，能消除有机成分的干扰及操作误差,使测定的灵敏度和精确度显著提高。杨东辉等[7]用薄层扫描法测定了枸杞浸膏中甜菜碱的含量，结果表明该法快速、灵敏、显色方便、选择性好，但层析过程常会出现拖尾现象，且展开时的温度、展开剂的极性和蒸汽饱和度都会影响色谱条件的恒定，从而影响分离效果和方法的重现性[23]。非水滴定法测定快速、简便、准确，但要求在实验过程中避免有水分存在[24]。分光光度法是目前常用