常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物 激素： 1、生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D
2、细胞分裂类：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip
3、赤霉素类：GA3、GA4、GA7 4、脱落酸：ABA 5、乙烯：ETH
1、生长素类： 主要促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形 成愈伤组织，促进生根。 常用的有NAA、IAA、IBA、2，4－D等。
可以加入培养基或浸泡处理外植体。
（2）聚乙烯吡咯烷酮（PVP）：
加入培养基中。
4、生长抑制剂： 常用矮壮素、比久（B9）、多效唑 （pp333） 、三碘苯甲酸、根皮酚等。
二、培养基的类型：
1、高盐浓度培养基：MS、B5、SH等。 适用于多数营养需求量较大的植物。 2、中等盐浓度培养基：Nitsh、Miller等 大量元素浓度约为MS的1/2。 3、低盐培养基：WPM、 White等。 大量元素浓度约为MS的1/4左右。 适用于木本植物的培养。
三、培养基母液及激素母液的配制：
由于培养基中元素种类多，用量少，因此每次称量 繁琐，因此通常将各种营养成分配制成母液保存，配制 培养基时根据需要量取用，从而简化操作，节省时间。 营养元素母液根据其性质和反应特性混合。
激素母液 根据使用浓度配制。
1、器皿和用具的准备 仪器包括万分之一天平，百分之一天平，pH计
表1 MS培养基的组成配方 组成成分 NH4NO3 KNO3 CaCl2· 2O 2H MgSO4· 2O 7H KH2PO4 KI H3BO3 MnSO4· 2O 4H ZnSO4· 2O 7H Na2MoO4· 2 2H O 2· 2O CoCl 6H 数量(mg/l) 1650 1900 440 370 170 0.83 6.2 22.3 8.6 0.25 0.025 组成成分 Na2-EDTA FeSO4· 2O 7H CuSO4· 2O 5H 蔗糖 pH 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 甘氨酸 盐酸硫铵等 数量(mg/l) 37.3 27.8 0.025 30 5.8 100.0 0.5 0.5 2.0 0.4
（3）激素母液的配制： 根据各种激素的使用浓度配制适宜的母液，用 万分之一天平称取激素，溶剂溶解后加水定容。 生长素类、赤霉素类及脱落酸等用95％乙醇溶 解；细胞分裂素类用1N HCl或1N NaOH溶解。
通常激素母液浓度生长素类为0.1~0.5 mg/ml, 细胞分裂素母液浓度为0.2~1.0 mg/ml.
4、脱落酸（ABA）： 促进休眠、衰老和脱落。组织培养中较 少使用，主要用于调节激素平衡，促进形 态建成。
5、乙烯： 主要促进衰老和脱落，高浓度易形态变化。
（四）碳源： 碳源主要为细胞提供合成新化合物的骨架， 为细胞的呼吸代谢提供底物与能源，此外还能 维持一定的渗透压。 常用的碳源主要是蔗糖，使用浓度在2－5 ％，此外果糖、葡萄糖、麦芽糖、山梨糖、甘 露糖及可溶性淀粉等也常用于植物组织培养。 糖浓度高低直接影响形态建成。
灭菌前检查灭菌锅内水量是否充足， 然后将培养基放于灭菌锅内，改好盖，关 闭放气阀，打开电源，加热升温。 2、排气：
当温度升至0.5kg/cm2时，打开放气阀 彻底排出锅内冷空气。然后关闭放气阀， 促使压力继续上升。
3、温度控制：
当锅内压力升至1.1kg/cm2时，计时15－20 分钟，计时结束后，关闭电源。
用品包括不同型号的烧杯（2000ml、1000ml、 100ml），容量瓶（1000ml、500ml、100ml）、移 液管（10ml、5ml、2ml、1ml）、试剂瓶若干 （1000ml、250ml）、移液器（1000ul、200ul）滴 灌、玻璃棒、试管、各种规格三角瓶（150ml、 100ml、50ml）、培养基分装器，漏斗、称量纸、标 签纸、不同范围pH试纸、铅笔等。 玻璃器皿用前清洗干净。
2、细胞分裂素类： 促进细胞分裂和扩大，促进茎增促，抑制茎 伸长；诱导芽的分化、促进侧芽萌发；延缓衰 老。 常用细胞分裂素有BA、KIN、ZT、2ip等。
此外近年来发现苯基脲衍生物具有非常高的细 胞分裂素活性，在多种植物上应用。
如TDZ，CPPU，4－PU等。
3、赤霉素类： 主要具有诱导茎的细胞伸长，对根无效；对 形成层细胞分化有影响，与生长素协同作用； 可以诱导离体成花；打破休眠等功能。 常用GA3、GA4等。
（三）植物生长调节物质： 植物激素是植物新称代谢中产生的天然 化合物，它能以极微小的用量直接影响植 物细胞的分化、分裂以及发育，影响植物 的形态建成、开花、结实、成熟、衰老脱 落、休眠、萌发等生理活动。 在植物组织培养中，主要通过植物激素 及生长调节物质对离体的组织、器官的形 态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈 伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚 胎发生等。
第二节 培养基的组成、配制与灭菌
一、培养基的组成和作用
培养基（medium）是植物组织培养的重要材料， 是外植体生长的营养物质，只有配制出适宜的培养 基，才能使组织培养获得成功。 通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类 成分，即矿质营养、有机成分、植物生长调节剂、 碳源、琼脂以及其他附加物等。 培养基的主要指标是营养成分及植物生长调节 物质的浓度。
（六）有机附加物： 1、椰子汁：
用量为100～200g/L。
2、香蕉泥：
使用量为150～200g/L。
3、苹果汁、番茄汁等。
（七）其他成分： 1、活性炭：
使用量为0 .2-1%。
2、抗生素： 常用青霉素、链霉素、庆大霉素等，用 量在5～20mg/L。
3、抑制酚类物质形成的物质： （1）抗坏血酸：
表3 N6培养基的组成和配方 组成成分 数量(mg/l) KNO3 2.3 CaCl2· 2O 2H 166 MgSO4· 2O 7H 185 KH2PO4 400 (NH4)2SO4 463 KI 0.8 H3BO3 1.6 MnSO4· 2O 4H 4.4 ZnSO4· 2O 7H 1.5 组成成分 Na2－EDTA FeSO4· 2O 7H 蔗糖 pH 烟酸 盐酸吡哆醇 甘氨酸 盐酸硫铵 (mg/l) 37.3 27.8 50 5.8 0.5 0.5 2.0 1.0
四、培养基的配制：
1、量取母液：营养元素和激素。 2、称量蔗糖、琼脂，放入600ml左右蒸馏水的 锅内，电路上加热，使琼脂溶化。 3、加入母液，混合均匀，调整pH值。
4、分装入瓶，每瓶40－50ml。
5、封口：用4－6层称量纸封口，之后灭菌备用。
五、培养基的灭菌（高压蒸汽灭菌）： 1、加热：
表2 B5培养基的组成和配方 组成成分 数量(mg/l） KNO3 2500 CaCl2· 2O 2H 150 MgSO4· 2O 7H 250 (NH4)2SO4 134 KI 0.75 H3BO4 3.0 MnSO4· 2O 4H 10 ZnSO4· 2O 7H 2.0 Na2MoO4· 2 2H 0.25 O CoCl2· 2O 6H 0.025 Na2-EDTA 37.3 组成成分 FeSO4· 2O 7H CuSO4· 2O 5H 蔗糖 pH 肌醇 烟酸 盐酸吡哆醇 激动素 2,4－D 盐酸硫铵 数量(mg/l) 27.8 0.025 40 5.5 100 1.0 1.0 0.1 0.1－1.0 10
4、出锅：
当灭菌锅自然冷却后，取培养基，放置 于接种室备用。
六、培养基的保存：
1、防尘： 防治灰尘污染。 2、避光：吲哚乙酸等易于分解，要注意遮光。 3、恒温：4 oC可保存3－6周，室温下两周内用 完。
4。定期更新：不易长期保存。
20050913
（五）琼脂： 琼脂作为固化剂用于组织培养中，起支持植 物的作用，不提供营养，为海藻中提取的一种高 分子化合物，仅溶于热水（90 oC以上），成为凝 胶，冷却后（40 oC以下）即凝固为凝胶。
琼脂的用量通常在4～10g/L.
琼脂是组织培养培养基中主要的成本支出，约 占80％。
琼脂的凝固能力除与原料、厂家的加工工艺 有关外，还受高压灭菌时的温度、时间以及pH 影响。
2、药品及蒸馏水准备：
药品采用分析纯或化学纯试剂。 水利用蒸馏水或去离子水。
3、母液配制：
（1）配制母液原则： 相同类型的试剂混合； 易形成沉淀的药品分开； 母液浓度要适宜；
用量要认真计算和核对；
药品要准确称量。
（2）MS培养基母液的配制： MS培养基母液根据试剂特性通常配成四种母液， 即大量元素母液（10或20倍）、微量元素母液（100 或1000倍）、Fe盐（100倍）、有机物（100倍）。 配置前先进行根据培养基组成和配制体积计算母 液试剂用量，然后称取药品，大量元素可以用百分 之一或千分之一天平，微量元素，铁盐和有机物用 万分之一天平称量。
（一）矿质营养： 矿质营养又称无机营养，是指植物生 长发育所需要的各种化学元素。
矿质元素的生理作用： （1）组成各种化合物，成为结构物质； （2）构成特殊物质，参与代谢； （3）维持离子平衡、胶体稳定及电荷平衡等 电化学作用； （4）影响形态发生和组织、器官的建成等。
根据植物对元素的吸收量，可以把植物必需元素 分为大量元素和微量元素。 国际植物生理学会建议将植物所需浓度大于0.5 mmol/l的的元素称为大量元素。低于0.5 mmol/l的 元素称为微量元素。 根据此规则大量元素种类包括C、H、O、N、P、K、 Ca、Mg、S。其中C、H、O为气体元素，其余六种为矿 质元素，分别占植物干重的百分数为18％、10％、70 ％、0.3%、0.07％、0.3%、0.3 ％、0.07%、0.05％。
以MS为例6中矿质元素分别由KNO3、NH4NO3、KH2PO4、 MgSO4.7H2O、CaCl2 . 2H2O提供。
大量元素中的氮通常采用硝态氮或铵态氮的形 式被使用，但铵态氮浓度过高会对有些植物培养物 造成伤害，不适宜使用过高的浓度。而常用MS培养 基中既有硝态氮又有铵态氮。
2、微量元素： 植物组织的对其需要量极少，过多会产生 毒害，如造成蛋白质变性、酶系失活。代谢 障碍等。 各种微量元素均具有特定的生理功能，如 硼与蛋白质的合成及糖类的运输有关；铜能 促进离体根的形成；锰参与植物的光合作用 和呼吸作用；钼为氮素代谢的重要元素。